靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统、制备方法及应用技术方案

一种靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统、制备方法及应用，本发明专利技术是中药有效成分药物制剂领域，公开了一种靶向治疗缺血性卒中脑组织的仿生脂质体递药系统的制备方法。本发明专利技术以脂质成分磷脂及胆固醇等为原材料制备纳米脂质体(liposome，Lipo)作为内核并包覆中药有效成分益母草碱(leonurine，Leo)，形成脂质体益母草碱(Lipo

【技术实现步骤摘要】
靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统、制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及药物制剂
，具体地，涉及一种靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]脑卒中是一种进展迅速的神经系统疾病，造成严重的神经功能障碍。由于治疗时间窗有限和急诊药物较少，脑卒中成为全球人口死亡和残疾的主要原因，其中缺血性脑卒中占87％。而目前用于缺血性卒中的临床药物由于难以跨越血脑屏障，对缺血脑组织保护作用有限。同时，再灌注引起的继发性损伤会导致血脑屏障破坏、炎症和缺血后神经元损伤等更为严重的后果。缺血性脑卒中再灌注损伤出现在血管再通后24
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48小时，大量的MMP9表达和激活侵袭紧密连接蛋白，破坏血脑屏障的完整性，进一步损伤脑组织。研究发现，益母草碱可以下调MMP9的表达提高TJs水平，从而保护血脑屏障的完整性。益母草碱治疗后MDA显著降低，SOD活性升高，对氧化应激有较好的抑制作用。
[0003]在《中国药典》中有记载，益母草是一种促进血液循环、调节月经的妇科药物。目前已从中分离出两百多种化合物，其中益母草碱是最重要的生物活性化合物，益母草碱具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗氧化、抗血小板聚集、心血管保护作用和脑保护作用。然而，益母草碱的结构导致其水溶性和脂溶性较差，跨膜能力弱，生物利用度低，这使得益母草碱在临床中的广泛应用受到了阻碍。脂质体是具有磷脂双分子层结构的微小囊泡，可包封诸多药物成分，且可生物降解，免疫原性小、安全无毒，药物包载后使药物缓慢释放，脂质体通过细胞的内吞和融合作用，直接将药物送入细胞内，因此脂质体是理想的递药载体。由于益母草碱不同pH下溶解度差异，利用pH梯度法，脂质体可有效包载益母草碱。
[0004]未经修饰的脂质体虽有一定被动靶向能力，但由于血脑屏障的作用，仅有极少量药物可被递送至缺血脑组织发挥药理作用，靶向性不足，且脂质体进入体内容易被内皮系统吞噬。而缺血性脑卒中后坏死的脑组织引起炎性因子的释放，吸引中性粒细胞等快速聚集，通过细胞膜表面的黏附分子相互作用，穿透血脑屏障。由于炎性因子的再灌注的作用，缺血性脑卒中部位血脑屏障发生改变，以中性粒细胞膜包覆脂质体药物，不仅可以减少内皮系统的识别、吞噬，还可以通过中性粒细胞膜表面粘附分子主动靶向至缺血性脑卒中部位血脑屏障，发挥益母草碱的药理作用，保护受损血脑屏障，减少再灌注性损伤的进一步进展。中性粒细胞膜表面的粘附分子引导中性粒细胞膜包覆的仿生脂质体递药系统穿透血脑屏障，进入缺血性脑卒中病灶，抑制脑组织的氧化应激，保护脑组织。因此，中性粒细胞膜包覆的仿生脂质体递药系统具有广泛的临床应用价值。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于构建一种中性粒细胞膜包覆的靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统及其制备方法，增加抗缺血性脑卒中治疗中药制剂的脑靶向性。
[0006]一种靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统，由包封益母草碱的脂质体纳米载体
及活化的中性粒细胞膜构成，脂质体通过薄膜水化法制备，脂质体和中性粒细胞膜通过膜挤出器共挤出实现包覆外膜。
[0007]优选的，中性粒细胞为HL
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60细胞系通过DMSO诱导分化得到，经过进一步炎性刺激，使其活化后细胞膜表面过表达相关粘附分子。
[0008]优选的，中性粒细胞膜依次经过机械研磨、差速离心提取获得，通过超声处理得到细胞膜囊泡。
[0009]优选的，相关粘附分子包括CD11b，PECAM，Integrinβ2等膜蛋白。
[0010]优选的，所采用药物为益母草碱的游离碱或其盐。
[0011]一种靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统的制备方法，其特征在于：载药脂质体采用pH梯度法或硫酸铵梯度法制备：称取处方量的磷脂和胆固醇，将其溶于适量有机溶剂并于30～50℃条件下旋转蒸干成膜，加入一定浓度的缓冲盐水化，超声过膜，即得均匀空白脂质体；再加入一定浓度的益母草碱溶液后调节pH，30～65℃条件下孵育1～10min后超滤法离心清洗除去游离药物，即得益母草碱脂质体。
[0012]优选的，制备脂质体的磷脂为大豆磷脂、氢化大豆磷脂、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、(2,3
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二油酰基
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丙基)
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三甲胺、二油酰磷脂酰乙醇胺及其衍生物中的一种或几种的混合；所用有机溶剂为为甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷的一种或几种的混合；使用pH梯度法初始pH范围为3～4，调节后pH范围为6～8；使用硫酸铵浓度范围为100～500mM。
[0013]优选的，所述脂质体与中性粒细胞膜通过膜挤出法通过静电作用或疏水作用力进行膜融合，其质量比为1:1～500:1。
[0014]优选的，所述脂质体平均粒径为60～180nm，包覆中性粒细胞膜的仿生脂质体粒径在80～200nm。
[0015]靶向缺血性脑卒中的仿生脂质体递药系统可靶向治疗缺血性卒中。
[0016]本专利技术以磷脂、胆固醇为原料制备纳米脂质体作为内核并包载中药益母草碱，将HL
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60细胞以DMSO诱导分化为中性粒细胞后给予进行TNF
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α刺激，提取该细胞膜包覆脂质体益母草碱，构建中性粒细胞膜包覆的仿生脂质体递药系统。该仿生脂质体递药系统中既能利用中性粒细胞膜表面分子增加该系统生物相容性，减少内皮系统的吞噬，吸附炎症因子发挥炎症中和作用，又能利用中性粒细胞主动趋向炎性血管部位并能穿透血脑屏障的原理，靶向缺血性卒中的血脑屏障，将脑保护药物有效成分递送至脑缺血病灶，还能发挥脂质体缓慢释放药物的作用，延长药物作用时间。
[0017]本专利技术中，采用的药物为中草药益母草有效成分益母草碱，已有研究表明益母草碱具有抗炎、抗氧化、心血管保护作用和脑保护作用。将益母草碱包载入脂质体并以中性粒细胞膜包覆，增加脑部病灶的药物聚集并持续释放药物，提高脑保护药物疗效。
[0018]本专利技术中，所述中性粒细胞膜为HL
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60细胞通过DMSO诱导分化后给予炎性刺激，使其细胞膜表面相关粘附分子过表达，机械研磨后采用差速离心法提取获得。
[0019]本专利技术中，所述中性粒细胞膜相关粘附分子中，TNF
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α刺激诱导分化后的HL
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60细胞膜上CD11b，PECAM，Integrinβ2等膜蛋白表达上调。
[0020]本专利技术通过下述方法构建中性粒细胞膜包覆的仿生脂质体递药系统：
[0021]HL
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60细胞以DMSO诱导分化并给予TNF
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α刺激以上调相关粘附分子的表达，机械研
磨并差速离心提取的细胞膜分散在双蒸水中超生分散；
[0022]以磷脂、胆固醇等为原材料用薄膜水化法制备脂质体，并利用pH梯度法或硫酸铵梯度法包载益母草碱药物，制备成脂质体益母草碱。
[0023]将预先制备的脂质体益母草碱和中性粒细胞膜共孵育并以膜挤出器反复过膜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统，其特征在于：由包封益母草碱的脂质体纳米载体及活化的中性粒细胞膜构成，脂质体通过薄膜水化法制备，脂质体和中性粒细胞膜通过膜挤出器共挤出实现包覆外膜。2.如权利要求1所述的靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统，其特征在于：中性粒细胞为HL
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60细胞系通过DMSO诱导分化得到，经过进一步炎性刺激，使其活化后细胞膜表面过表达相关粘附分子。3.如权利要求2所述的靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统，其特征在于：中性粒细胞膜依次经过机械研磨、差速离心提取获得，通过超声处理得到细胞膜囊泡。4.如权利要求2所述的靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统，其特征在于：相关粘附分子包括CD11b，PECAM，Integrinβ2等膜蛋白。5.如权利要求2所述的靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统，其特征在于：所采用药物为益母草碱的游离碱或其盐。6.如权利要求1至5任一项所述的靶向缺血性脑卒中仿生脂质体递药系统的制备方法，其特征在于：载药脂质体采用pH梯度法或硫酸铵梯度法制备：称取处方量的磷脂和胆固醇，将其溶于适量有机溶剂并于30～50℃条件下旋转蒸干成膜，加入一定浓度的缓冲盐水化，超声过膜，即得均匀空白脂质体；再加入一定浓度的益母草碱溶液后调节pH，30～...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓琳，朱依谆，唐桩，孟诗雨，
申请(专利权)人：依诺科技香港有限公司，
类型：发明
国别省市：