分子标记物组合及其用途制造技术

本发明专利技术涉及小鼠巨核细胞(MK)中可能存在的三种不同功能异质性的巨核细胞亚群，且分别鉴定出了这些亚群的特异性分子标记物，包括作为HSC的微环境支持细胞的MK分子标记物为MYLK4；行使免疫调节功能的MK分子标记物为LSP1、CD53或CD52；具有产板功能的MK分子标记物为ARNTL。这些分子标记物可以用来分离或标记具有不同功能的MK，进而促进MK行使不同的功能，包括支持HSC静息、免疫调节、产板等。产板等。产板等。

【技术实现步骤摘要】
分子标记物组合及其用途


[0001]本专利技术属于细胞生物学和医药领域，具体涉及一种巨核细胞群以及鉴定巨核细胞群的方法。进一步的，本专利技术还涉及一种检测标记分子或其组合的试剂在制备试剂盒中的用途，以及一种抗体或其组合物在制备试剂中的用途。

技术介绍

[0002]巨核细胞(Megakaryocyte，MK)是骨髓中体积最大、数目最少的一类造血细胞。MK的直径可达50
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100μm，而MK的数量仅占骨髓细胞的0.05
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0.1％。MK由造血干细胞(hematopoietic stem cell，HSC)发育分化而来。造血干细胞首先分化成巨核祖细胞。巨核祖细胞通过核内有丝分裂的方式进行多倍体化过程并逐步发育成熟。最终巨核细胞染色体数目不断加倍，在小鼠体内最高可以达到64N。
[0003]本领域传统上对巨核细胞功能的认识仅限于产生具有止血凝血功能的血小板。因此，巨核细胞分化成熟进而产生血小板的过程是本领域一直以来的重点研究方向。但是，近年来在小鼠体内和体外的实验研究发现，巨核细胞能够通过释放大量细胞因子IGF
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1(类胰岛素一号生长因子)、 PF4(血小板因子4)、TGF
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β(转化生长因子
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β)、FGF1(成纤维细胞生长因子1)来组成HSC的微环境进而调控HSC的静息和增殖。除此之外，越来越多的证据表明，在巨核细胞表面表达一些免疫相关的受体或者表面标记物，包括TLR1
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6(Toll样受体1
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6)、FcγR、MHC I及CD40L等。同时还有证据表明，在病毒感染时，巨核细胞能够通过上调IFITM3(干扰素诱导的跨膜蛋白3)的表达使其具备抵抗病毒的能力。以上发现均提示巨核细胞还可能具备参与免疫反应的功能。因此，巨核细胞不仅包括产生血小板的祖细胞，同时还可能具备调控HSC和免疫反应等多种功能。
[0004]巨核细胞的多功能性带来了新的科学问题：巨核细胞的多种功能是由同一群巨核细胞执行还是由不同功能的巨核细胞分别承担？即巨核细胞内部是否存在功能异质性亚群？目前对于巨核细胞异质性的研究主要基于巨核细胞的形态、染色体倍性和表面标记物表达三个层面。巨核细胞的形态在其发育成熟及产生血小板的过程中发生改变。根据形态的差异可以将巨核细胞分成原始巨核细胞、幼稚巨核细胞、颗粒型巨核细胞、产血小板型巨核细胞以及裸核型巨核细胞。同时，研究表明，小鼠骨髓中存在高达6种含有不同染色体数目的巨核细胞。因此，随着巨核细胞染色体倍数的增加而细胞成熟度逐渐增强的这一理念也被广泛接受。此外，研究显示，在巨核细胞成熟的过程中，CD41、CD42、CD61等表面标记物的表达也随之逐渐升高。因此，通过这些标记物的表达能够区分处于不同发育阶段和成熟度的巨核细胞。但是通过形态、染色体倍性和表面标记物所区分的巨核细胞异质性并不能与巨核细胞的不同功能相互对应。
[0005]因此，实质上，巨核细胞的功能异质性仍然是未知的。众所周知的是，骨髓中巨核细胞数目极少且易碎，不易获取，很难直接对体内的巨核细胞进行研究。功能不同的巨核细胞，其转录程序也不同。因此，传统的转录组学方法不能对功能不同的巨核细胞进行有效区分。
[0006]因此，对巨核细胞功能异质性的探究存在着极大的挑战。

技术实现思路

[0007]本申请的专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，发现了小鼠巨核细胞中可能存在三种不同功能异质性的巨核细胞亚群，且分别鉴定出了这些亚群的特异性分子标记物，包括作为HSC的微环境支持细胞的MK分子标记物为MYLK4(Myosin Light Chain Kinase 4)；行使免疫调节功能的 MK分子标记物为LSP1(Lymphocyte
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specific protein 1)、CD53或CD52；具有产板功能的MK分子标记物为ARNTL(Aryl hydrocarbon receptornuclear translocator
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like protein 1，也称为Brain and Muscle ARNT
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Like1，BMAL1)。这些分子标记物能够用来分离或标记具有不同功能的MK，进而促进MK行使不同的功能，包括支持HSC静息、免疫调节、产板等。
[0008]由此，在第一方面，本申请提供了抗体或其组合在制备试剂中的用途，所述试剂用于检测、鉴定或分离样品中的巨核细胞细胞群，其中，所述抗体或其组合选自(a)至(c)中的任意一项或多项：
[0009](a)抗MYLK4抗体；
[0010](b)抗LSP1抗体、抗CD52抗体和/或抗CD53抗体；
[0011](c)抗ARNTL抗体；
[0012]在某些实施方案中，所述抗体或其组合的(b)项为抗LSP1抗体。
[0013]在某些实施方案中，所述抗体或其组合的(b)项为抗CD52抗体。
[0014]在某些实施方案中，所述抗体或其组合的(b)项为抗CD53抗体。
[0015]在某些实施方案中，所述抗体或其组合为抗LSP1抗体。
[0016]在某些实施方案中，所述抗体或其组合为抗CD52抗体。
[0017]在某些实施方案中，所述抗体或其组合为抗CD53抗体。
[0018]在某些实施方案中，所述抗体或其组合的(b)项为抗CD52抗体和抗 CD53抗体。
[0019]在某些实施方案中，所述抗体或其组合的(b)项为抗LSP1抗体、抗 CD52抗体和抗CD53抗体。
[0020]在某些实施方案中，所述抗体或其组合由(a)至(c)组成：
[0021](a)抗MYLK4抗体；
[0022](b)抗LSP1抗体、抗CD52抗体和/或抗CD53抗体；
[0023](c)抗ARNTL抗体。
[0024]在某些实施方案中，所述MYLK4、LSP1、CD52、CD53和/或ARNTL 来源于哺乳动物(例如，人，小鼠，羊，马，猪，兔等)。
[0025]在某些实施方案中，编码所述MYLK4的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2或12所示。
[0026]在某些实施方案中，编码所述LSP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:4或 14所示。
[0027]在某些实施方案中，编码所述CD52的核苷酸序列如SEQ ID NO:8 或18所示。
[0028]在某些实施方案中，编码所述CD53的核苷酸序列如SEQ ID NO:10 或20所示。
[0029]在某些实施方案中，编码所述ARNTL的核苷酸序列如SEQ ID NO: 6或16所示。
[0030]在某些实施方案中，所述样品选自哺乳动物的全血、外周血、骨髓、脐带血，或其任何组合。
[0031]在某些实施方案中，所述哺乳动物选自人、狗、猴、牛、马，或其任何组合。
[0032]在某些实施方案中，所述抗体或其组合选自(a)至(f)中的任意一项或多项：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗体或其组合在制备试剂中的用途，所述试剂用于检测、鉴定或分离样品中的巨核细胞细胞群，其中，所述抗体或其组合选自(a)至(c)中的任意一项或多项：(a)抗MYLK4抗体；(b)抗LSP1抗体、抗CD52抗体和/或抗CD53抗体；(c)抗ARNTL抗体；优选地，所述MYLK4、LSP1、CD52、CD53和/或ARNTL来源于哺乳动物(例如，人，小鼠，羊，马，猪，兔)；优选地，编码所述MYLK4的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或12所示；优选地，编码所述LSP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:4或14所示；优选地，编码所述CD52的核苷酸序列如SEQ ID NO:8或18所示；优选地，编码所述CD53的核苷酸序列如SEQ ID NO:10或20所示；优选地，编码所述ARNTL的核苷酸序列如SEQ ID NO:6或16所示；优选地，所述样品选自哺乳动物的全血、外周血、骨髓、脐带血，或其任何组合；优选地，所述哺乳动物选自人、狗、猴、牛、马，或其任何组合。优选地，所述抗体或其组合选自(a)至(f)中的任意一项或多项：(a)抗MYLK4抗体；(b)抗LSP1抗体、抗CD52抗体和/或抗CD53抗体；(c)抗ARNTL抗体；(d)抗MYLK4抗体和抗CD41抗体；(e)抗LSP1抗体、抗CD52抗体和/或抗CD53抗体，以及抗CD41抗体；(f)抗ARNTL抗体和抗CD41抗体。2.标记分子或其组合在制备试剂中的用途，所述试剂用于检测、鉴定或分离样品中的巨核细胞细胞群，其中，所述标记分子或其组合选自(a)至(c)中的任意一项或多项：(a)MYLK4；(b)LSP1、CD52和/或CD53；(c)ARNTL；优选地，所述MYLK4、LSP1、CD52、CD53和/或ARNTL来源于哺乳动物(例如，人，小鼠，羊，马，猪，兔)；优选地，编码所述MYLK4的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或12所示；优选地，编码所述LSP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:4或14所示；优选地，编码所述CD52的核苷酸序列如SEQ ID NO:8或18所示；优选地，编码所述CD53的核苷酸序列如SEQ ID NO:10或20所示；优选地，编码所述ARNTL的核苷酸序列如SEQ ID NO:6或16所示；优选地，所述标记分子或其组合选自(a)至(f)中的任意一项或多项：(a)MYLK4；(b)LSP1、CD52和/或CD53；(c)ARNTL；(d)MYLK4和CD41；(e)LSP1、CD52和/或CD53，以及CD41；
(f)ARNTL和CD41。3.巨核细胞细胞群，所述细胞群表达至少一种选自MYLK4、LSP1、CD52、CD53和ARNTL的标记分子；优选地，所述细胞群还表达CD41标记分子；优选地，所述细胞群由(a)至(c)中的任意一组或多组的细胞群组成：(a)表达MYLK4和CD41的细胞群；(b)表达LSP1和CD41的细胞群，表达CD52和CD41的细胞群和/或表达CD53和CD41的细胞群；(c)表达ARNTL和CD41的细胞群；优选地，所述MYLK4、LSP1、CD52、CD53和/或ARNTL来源于哺乳动物(例如，人，小鼠，羊，马，猪，兔)；优选地，编码所述MYLK4的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或12所示；优选地，编码所述LSP1的核苷酸序列如SEQ ID NO:4或14所示；优选地，编码所述CD52的核苷酸序列如SEQ ID NO:8或18所示；优选地，编码所述CD53的核苷酸序列如SEQ ID NO:10或20所示；优选地，编码所述ARNTL的核苷酸序列如SEQ ID NO:6或16所示。4.一种鉴定、分离或检测权利要求3的巨核细胞细胞群的方法，所述方法包括：(1)将所述细胞群与至少1种试剂(例如，1种、2种、3种或3种以上)接触，(2)对细胞群进行检测。5.权利要求4的方法，其中，所述试剂通过蛋白质检测方法检测所述标记分子；优选地，所述蛋白质检测方法选自免疫学方法、色谱法、质谱法、光谱法，或其任意组合；优选地，所述蛋白检测方法为酶联免疫吸附测定法、化学发光免疫分析法、荧光免疫分析法、放射免疫测定法、电化学免疫传感器、肽质量指纹图谱法，或其任意组合；优选地，所述试剂各自独立地包含一种能够特异性结合所述标记分子的抗体，其抗原结合片段和可检测的标记；优选地，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王前飞，李玥莹，孙舒，金晨，
申请(专利权)人：中国科学院北京基因组研究所国家生物信息中心，
类型：发明
国别省市：