抗B7-H3单克隆抗体、抗B7-H3制造技术

本发明专利技术涉及免疫及抗体药物领域，特别涉及抗B7

【技术实现步骤摘要】
抗B7
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H3单克隆抗体、抗B7
‑
H3
×
CD3双特异性抗体、制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫及抗体药物领域，特别涉及抗B7
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H3单克隆抗体、抗B7
‑
H3
×
CD3双特异性抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]在过去几年中，证明治疗性双特异性抗体(bsAbs)的发展和效果的报告数量迅速增加。涉及同时调节肿瘤细胞上的两个分子靶标或重定向免疫效应细胞以杀死肿瘤细胞的方法可能在癌症免疫治疗中显示出巨大的潜力。Blinatumomab是一种上市的双特异性抗体，靶向急性淋巴细胞白血病患者的T细胞上的CD3和B细胞上的CD19，已在临床中显示出有效的治疗效果。这些有希望的临床数据鼓励研究人员有效地合成和生产稳定的双特异性抗体。
[0003]目前，各种用于癌症治疗的双特异性抗体正在临床开发中，其中将T细胞重定向到肿瘤细胞的T细胞衔接子(bsTCEs)代表了最大的一组。此外，大多数临床阶段的bsTCE正在开发用于治疗血液系统恶性肿瘤。实体瘤特有的因素，包括关键组织中的抗原表达、免疫抑制性肿瘤微环境、肿瘤血管系统紊乱以及抗体和效应细胞在肿瘤渗透中的局限性，使得开发用于实体瘤治疗的bsTCE变得困难。然而，许多靶向实体瘤抗原的bsTCE，如HER2、EGFRvIII、PSMA、EpCAM和CEA，正在临床实践中进行评估，并且已经提出了一些证明CD3
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双特异性抗体在治疗实体瘤中疗效的证据。
[0004]B7
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H3(CD276)是B7超家族成员，被鉴定为T细胞共刺激和共抑制分子。人B7
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H3在体外T细胞增殖、细胞毒性T细胞活化和IFN
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γ产生方面表现出积极的调节功能。其他研究也证明了B7
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H3的共刺激作用，它被认为与增强肿瘤治疗的疗效以及延长生存期有关。然而，随后的研究表明B7
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H3参与了T细胞的抑制，并且正在成为肿瘤进展的重要调节剂。
[0005]除了免疫调节外，B7
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H3通过非免疫反应参与肿瘤进展。已在多种人类实体瘤组织中检测到高B7
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H3表达。除了在肿瘤细胞上表达外，B7
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H3在肿瘤浸润性树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、肿瘤相关成纤维细胞、内皮细胞和癌症干细胞上过表达。B7
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H3异常高表达在多种人类实体癌中被检测到，包括非小细胞肺癌，前列腺癌，胰腺癌，神经母细胞瘤和成神经管细胞瘤，卵巢癌，胃癌，下咽鳞状细胞癌，子宫内膜癌，结直肠癌，肝细胞癌，骨肉瘤，乳腺癌，皮肤黑色素瘤、透明细胞肾细胞癌、头颈癌以及胶质母细胞瘤。此外，在肿瘤浸润性树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、肿瘤相关成纤维细胞、内皮细胞和癌症干细胞上也发现了B7
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H3的过度表达。B7
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H3在肿瘤组织中的过表达与预后不良、转移增加、临床分期进展和对治疗的抵抗相关。在正常健康组织中表达有限并维持在低水平。总的来说，这些发现表明B7
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H3是治疗实体瘤的潜在靶点。
[0006]目前，许多靶向B7
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H3的肿瘤治疗方法已经在临床前或临床试验中进行研究。Omburtamab(8H9)是一种人源化亲和力成熟的单克隆抗体(mAb)，介导强效抗肿瘤活性并调节B7
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H3的免疫抑制功能。一种鞘内注射用131I放射性标记的8H9(131I
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8H9)，已经完成治
疗神经母细胞瘤(儿科)的CNS/软脑膜转移的关键2期临床试验，并已经提交BLA(NCT03275402)。131I
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8H9针对其他多种类型肿瘤的临床试验也在进行中。Enoblituzumab(MGA271)通过Fc优化设计为具有增强效应功能的抗体，并表现出针对多种肿瘤类型的ADCC效应。Enoblituzumab分别作为单药，与PD
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1抑制剂，或PD
‑1×
LAG
‑
3双特异性抗体联合用药在临床研究中进行评估(NCT02982941、NCT01391143、NCT02475213、NCT04634825)。抗体
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药物偶联物(ADC)MGC018和DS7300a也在晚期实体瘤患者中进行了临床研究(NCT03729596,NCT04145622)。最近，许多靶向B7
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H3的嵌合抗原受体(CAR)T细胞和双特异性抗体也正在开发中。B7
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H3特异性CAR T细胞局部免疫治疗弥漫性内源性脑桥胶质瘤、弥漫性中线神经胶质瘤和复发性或难治性小儿中枢神经系统肿瘤的临床研究正在进行中(NCT04185038)。其中，靶向B7
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H3的bsTCEs也在几项临床前研究中展现出抗肿瘤活性，但是到目前为止只有MGD009进入临床研究。MGD009，又称为Orlotamab，是一种人源化、带有Fc的双亲和重定位(DART)结构分子,该结构中抗CD3(XR32)和抗B7
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H3(BRCA84D)单克隆抗体的人源化Fv并列位于Fc的N端。而其他研究中设计的抗B7
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H3 bsTCEs主要为BITE结构分子和通过化学偶联方法制备的抗CD3抗体和抗B7
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H3抗体的偶联物。BITE结构抗体半衰期较短，而化学偶联方法制备的抗体由于分子量较大、具有较强的免疫原性，这两种结构的抗体在后续应用中都具有局限性。
[0007]因此，制备并筛选新的抗B7
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H3的特异性单克隆抗体，设计构建新型结构的抗B7
‑
H3
×
CD3双特异性抗体，具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术提供了抗B7
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H3的单克隆抗体和抗B7
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H3
×
CD3的双特异性抗体。
[0009]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0010]第一方面，本专利技术提供了新结构的抗B7
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H3
×
CD3双特异性抗体，包括：
[0011]其特征在于，所述双特异性抗体具有不对称结构，其中一条Fc片段的N端与能与B7
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H3结合的抗体Fab片段和能与CD3结合的抗原结合片段相连接，另一条Fc片段的N端无抗原结合区域，该两条Fc片段通过铰链区二硫键及Fc区域氨基酸突变(knobs
‑
into
‑
holes或其他机制)形成异源二聚体。
[0012]所述双特异性抗体包含三条多肽链：
[0013]a)所述第一条多肽链从N末端到C末端依次包含VH
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B7
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H3—CH1—CH本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗B7
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H3
×
CD3的双特异性抗体，靶向B7
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H3和CD3，其特征在于，所述双特异性抗体具有不对称结构，其中一条Fc片段的N端与能与B7
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H3结合的抗体Fab片段和能与CD3结合的抗原结合片段相连接，另一条Fc片段的N端无抗原结合区域，该两条Fc片段通过铰链区二硫键及Fc区域氨基酸突变(knobs
‑
into
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holes或其他机制)形成异源二聚体。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包含三条多肽链：a)所述第一条多肽链从N末端到C末端依次包含VH
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B7
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H3—CH1—CH2—CH3，所述第二条多肽链从N末端到C末端依次包含VL
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B7
‑
H3—CL—linker—CD3 SCFV,所述第三条多肽链从N末端到C末端依次包含CH2—
‑
CH3；或b)所述第一条多肽链从N末端到C末端依次包含VL
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B7
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H3—CL—CH2—CH3，所述第二条多肽链从N末端到C末端依次包含VH
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B7
‑
H3—CH1—linker—CD3 SCFV,所述第三条多肽链从N末端到C末端依次包含CH2—
‑
CH3；或c)所述第一条多肽链从N末端到C末端依次包含VH
‑
B7
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H3—CH1—CH2—CH3，所述第二条多肽链从N末端到C末端依次包含CD3 SCFV—linker—VL
‑
B7
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H3—CL,所述第三条多肽链从N末端到C末端依次包含CH2—
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CH3；或d)所述第一条多肽链从N末端到C末端依次包含VL
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B7
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H3—CL—CH2—CH3，所述第二条多肽链从N末端到C末端依次包含CD3 SCFV—linker—VH
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B7
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H3—CH1,所述第三条多肽链从N末端到C末端依次包含CH2—
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CH3，其中，所述VH
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B7
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H3为结合B7
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H3的重链可变区，所述VL
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B7
‑
H3为结合B7
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H3的轻链可变区，所述CH1和CH2和CH3为重链恒定区，所述CL为轻链恒定区；所述CD3SCFV是抗CD3单链抗体，其序列可以是VL
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CD3—linker—VH
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CD3或VH
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CD3—linker—VL
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CD3，其中所述VH
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CD3为结合CD3的重链可变区，所述VL
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CD3为结合CD3的轻链可变区；其中，所述VH
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B7
‑
H3与所述VL
‑
B7
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H3形成特异性结合B7
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H3的抗原结合片段，所述VH
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CD3与所述VL
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CD3形成结合CD3的抗原结合片段；其中，所述第一条多肽链和所述第三条多肽链通过铰链区二硫键结合，所述第一条多肽链和所述第二条多肽链通过二硫键结合。3.如权利要求2所述的抗B7
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H3
×
CD3双特异性抗体，其特征在于，包括(I)、所述VL
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B7
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H3的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQ ID No.6、7和8所示的氨基酸序列；和(II)、所述VH
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B7
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H3的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQ ID No.9、10和11所示的氨基酸序列；或(III)、(I)或(II)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)或(II)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；或(IV)、与(I)、(II)或(III)所述氨基酸序列具有50...

【专利技术属性】
技术研发人员：房健民，冯艳，尹衍新，
申请(专利权)人：同济大学苏州研究院，
类型：发明
国别省市：