用于治疗杜氏肌营养不良的抗FLT-1抗体制造技术

本发明专利技术尤其提供用于治疗肌营养不良、具体地说杜氏肌营养不良(DMD)的抗Flt

【技术实现步骤摘要】
用于治疗杜氏肌营养不良的抗FLT
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1抗体
[0001]本申请是申请号为201680032814.0、申请日为2016年4月7日、 专利技术名称为“用于治疗杜氏肌营养不良的抗FLT
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1抗体”的中国专利技术专 利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2016/026352的 PCT国际申请的中国国家阶段申请，该PCT国际申请分别要求2015 年4月7日、2016年3月14日提交的美国临时申请序列号62/144,251 和62/307,645的优先权。
[0002]相关申请
[0003]本申请要求2015年4月7日提交的美国临时申请序列号 62/144,251和2016年3月14日提交的美国临时申请序列号62/307,645 的优先权，所述临时申请各自的公开内容特此以引用的方式并入。
[0004]背景
[0005]杜氏肌营养不良(DMD)是一种X连锁隐性病症，其影响估计 1:3600男性出生者，估计全世界有50,000名受影响的个体。所述病 症的特征是肌肉的进行性消耗，并且受影响的儿童到他们13岁时依 赖轮椅。受影响的个体通常在3岁时出现症状，其中此类个体的中值 存活期介于25与30岁之间。由于膈肌无力和心肌病所致的呼吸衰竭 是死亡的常见原因。
[0006]DMD是由肌营养不良蛋白基因中的突变引起的。肌营养不良蛋 白基因位于X染色体上并且编码蛋白质肌营养不良蛋白。肌营养不 良蛋白负责通过肌营养不良蛋白聚糖复合物将肌肉纤维的收缩机制 (肌动蛋白
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肌球蛋白复合物)连接至周围的细胞外基质。肌营养不良蛋 白基因的突变导致肌营养不良蛋白的改变或不存在以及异常肌膜(sarcolemal membrane)功能。虽然男性和女性均可携带肌营养不良蛋 白基因的突变，但女性很少受DMD的影响。
[0007]DMD的一个特征是受影响组织的局部缺血。局部缺血是对组织 或器官的供血的限制或减少，从而导致用于细胞代谢的氧和营养物需 要的不足。局部缺血通常由血管的收缩或阻塞引起，从而导致对组织 或器官的损伤或组织或器官的功能障碍。局部缺血的治疗旨在增加到 受影响的组织或器官的血流量。
[0008]目前，尚无法治愈DMD。已经研究了若干治疗途径，包括基因 疗法和皮质类固醇施用，然而仍然需要用于DMD患者的替代物。
[0009]专利技术概述
[0010]本专利技术尤其提供了用于基于抗Flt
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1抗体疗法治疗肌营养不良、 具体地说杜氏肌营养不良(DMD)和/或贝克肌营养不良(Beckermusculardystrophy)的改进的方法和组合物。如下文实施例中所描述， 本专利技术部分基于以下发现：抗Flt
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1抗体或其抗原结合片段能够抑制 VEGF和其他配体结合至Flt
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1受体，从而增加可用于结合至VEGF 受体的VEGF和/或其他配体的量。增加VEGF的可用性促进血管生 成，伴随到肌肉的血流量增加以对抗功能性局部缺血并产生DMD的 结构和功能特征的改善。实际上，如本专利技术实施例中所示，本专利技术人 已经证明，施用抗Flt
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1抗体改善了肌肉病理的测量值(例如，改善的 血管生成、减少的纤维化、减少的坏死)。因此，本专利技术提供用于治 疗DMD的安全且有效的基于抗体的治疗剂。
[0011]一方面，本专利技术提供特异性地结合至人Flt
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1的抗体或其抗原结 合片段，所述抗
ID NO:9和SEQ ID NO:17的 氨基酸序列定义的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。在一个具体 实施方案中，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:12 和SEQ ID NO:17的氨基酸序列定义的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3。
[0015]另一方面，本专利技术提供特异性地结合至人Flt
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1的抗体或其抗原 结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(i)轻链可变(VL)区，其 包含与SEQ ID NO:49至SEQ ID NO:61中的任一个具有至少80％同 一性的氨基酸序列；和/或(ii)重链可变(VH)区，其包含与SEQ IDNO:35至SEQ ID NO:48中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序 列。在一个具体实施方案中，所述VL区包含SEQ ID NO:60的氨基 酸序列，并且所述VH区包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列。
[0016]在一些实施方案中，所述抗体还包含重链恒定区，所述重链恒定 区包含与SEQ ID NO:87至SEQ ID NO:89中的任一个具有至少80％ 同一性的氨基酸序列。
[0017]另一方面，本专利技术提供特异性地结合至人Flt
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1的抗体或其抗原 结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：(i)轻链，其包含与SEQID NO:75至SEQ ID NO:86中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸 序列；和/或(ii)重链，其包含与SEQ ID NO:62至SEQ ID NO:74中的 任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列。在一个具体实施方案中， 所述轻链包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列，并且所述重链包含SEQID NO:71的氨基酸序列。
[0018]在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自由以下组 成的组：IgG、F(ab')2、F(ab)2、Fab'、Fab、ScFv、双抗体(diabody)、 三抗体(triabody)和四抗体(tetrabody)。在一个实施方案中，所述抗体 或其抗原结合片段是IgG。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原 结合片段是IgG1。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片 段是单克隆抗体。在一个具体实施方案中，所述抗体是人源化单克隆 抗体。在另一个实施方案中，所述人源化单克隆抗体含有人Fc区。 在一些实施方案中，Fc区含有增强Fc区与FcRn受体之间的结合亲 和力以使得抗体的体内半衰期延长的一个或多个突变。在另一个实施 方案中，所述Fc区含有在对应于人IgG1的Leu 234、Leu 235和/或 Gly 237的位置处的一个或多个突变。
[0019]在一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段不结合至VEGFR2和/或VEGF R3。在另一个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片 段不结合至小鼠或猴Flt
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1。
[0020]另一方面，本专利技术提供一种分离的抗体或其抗原结合片段，其识 别包含以下氨基酸序列的肽或其片段，所述氨基酸序列对应于SEQID NO:90的位置139至148、位置139至153、位置178至206、位 置199至204以及位置128至138。在一个实施方案中，所述肽由以 下氨基酸序列组成，所述氨基酸序列对应于SEQ ID NO:90的位置130 至138、位置141至148、位置141至153和位置193至206。
[0021]另一方面，本专利技术提供一种与任何抗Flt...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性地结合至人Flt
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1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含一个或多个互补决定区(CDR)，所述互补决定区选自由以下组成的组：可变轻(VL)链CDR1，其由与SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；VL CDR2，其由与SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:24中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；VL CDR3，其由与SEQ ID NO:25至SEQ ID NO:34中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；可变重(VH)链CDR1，其由与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:4中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；VH CDR2，其由与SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:14中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；以及VH CDR3，其由与SEQ ID NO:15至SEQ ID NO:18中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义。2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述一个或多个CDR包括所述VL CDR3，其由所述与SEQ ID NO:25至SEQ ID NO:34中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；以及所述VH CDR3，其由所述与SEQ ID NO:15至SEQ ID NO:18中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义。3.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述一个或多个CDR包括所述VL CDR1，其由所述与SEQ ID NO:19至SEQ ID NO:21中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；所述VL CDR2，其由所述与SEQ ID NO:22至SEQ ID NO:24中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；以及所述VL CDR3，其由所述与SEQ ID NO:25至SEQ ID NO:34中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义。4.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述一个或多个CDR包括所述VH CDR1，其由所述与SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:4中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；所述VH CDR2，其由所述与SEQ ID NO:5至SEQ ID NO:14中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义；以及所述VH CDR3，其由所述与SEQ ID NO:15至SEQ ID NO:18中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列定义。5.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VL链，所述VL链包含分别由SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:25的所述氨基酸序列定义的所述VL CDR1、所述VL CDR2和所述VL CDR3。6.如权利要求1
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4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VL链，所述VL链包含分别由SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:25的所述氨基酸序列定义的所述VL CDR1、所述VL CDR2和所述VL CDR3。7.如权利要求1
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4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VL链，所述VL链包含分别由SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:24的所述氨基酸序列定义的所述VL CDR1和所述VL CDR2，以及由SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33或SEQ ID NO:34的所述氨基酸序列定义的所述VL CDR3。
8.如权利要求1
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4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL链包含分别由SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:32的所述氨基酸序列定义的所述VL CDR1、所述VL CDR2和所述VL CDR3。9.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VH链，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:15的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR1、所述VH CDR2和所述VH CDR3。10.如权利要求1
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8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VH链，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:16的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR1、所述VH CDR2和所述VH CDR3。11.如权利要求1
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8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VH链，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:18的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR1、所述VH CDR2和所述VH CDR3。12.如权利要求1
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8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VH链，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:17的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR1和所述VH CDR3，以及由SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR2。13.如权利要求1
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8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VH链，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:17的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR1和所述VH CDR3，以及由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR2。14.如权利要求1
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8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VH链，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:17的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR1、所述VH CDR2和所述VH CDR3。15.如权利要求1
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8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其包含VH链，所述VH链包含分别由SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:17的所述氨基酸序列定义的所述VH CDR1、所述VH CDR2和所述VH CDR3。16.一种特异性地结合至人Flt
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1的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)轻链可变(VL)区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:49至SEQ ID NO:61中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列；和/或(ii)重链可变(VH)区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:35至SEQ ID NO:48中的任一个具有至少80％同一性的氨基酸序列。17.如权利要求16所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述VL区包含SEQ ID NO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：