用于蛋白质产生的材料和方法技术

本文件涉及用于产生蛋白质的材料和方法。一方面，本文件提供了一种核酸构建体，所述核酸构建体包含第一醇氧化酶启动子元件，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包含位于对应于核苷酸位置668

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于蛋白质产生的材料和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年4月17日提交的美国临时申请序列号62/835,338的优先权，所述美国临时申请通过引用以其整体并入本文。
[0003]以电子方式提交的文本文件的说明
[0004]与本申请一起以电子方式提交的文本文件的内容通过引用以其整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本，文件名：38767
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0193WO1_SequenceListing.txt，记录日期：2020年4月17日，文件大小：约53千字节。


[0005]本公开总体上涉及DNA构建体和使用此类DNA构建体对如酵母细胞或甲基营养型酵母细胞等细胞进行基因工程化的方法。

技术介绍

[0006]产物的重组表达是用于产生所述产物的常用方法。在某些情况下，可以通过重组产生来产生蛋白质。本文提供了可以用于使一或多个产物(例如蛋白质)在如酵母细胞或甲基营养型酵母细胞等细胞中高效表达的构建体。

技术实现思路

[0007]本文件至少部分地基于对AOX1启动子中的点突变的鉴定，所述点突变可以使连接的编码序列的表达增加。例如，本文所描述的突变的AOX1启动子可以用于使可操作地连接的编码序列在毕赤酵母(Pichia)中高效表达。
[0008]在一个方面，本文提供了一种核酸构建体，所述核酸构建体包括第一醇氧化酶启动子元件，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包含位于对应于核苷酸位置668
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734中的任何核苷酸位置的一或多个核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变。
[0009]实施方案可以具有以下特征中的一或多个特征。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置673
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729中的任何核苷酸位置的一或多个核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置678
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724中的任何核苷酸位置的一或多个核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置683
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719中的任何核苷酸位置的一或多个核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置688
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714中的任何核苷酸位置的一或多个核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置668
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734中的任何核苷酸位置的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的两个或两个以上突变。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置668
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734中的任何核苷酸位置的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的三个或三个以上突变。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置668
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734中的任何核苷酸位置的核苷酸位置处
的相对于SEQ ID NO:28的四个或四个以上突变。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于核苷酸位置668
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734中的任何核苷酸位置的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的五个或五个以上突变。
[0010]在另一方面，本文提供了一种核酸构建体，所述核酸构建体包括第一醇氧化酶启动子元件，其中所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的一或多个突变：T146、C154、T303、T426、A433、A435、T530、C572、T596、T617、T688、A696、T702、A709、A712、T714、A790、A841和T862。
[0011]实施方案可以包含以下特征中的一或多个特征。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的两个或两个以上突变：T146、C154、T303、T426、A433、A435、T530、C572、T596、T617、T688、A696、T702、A709、A712、T714、A790、A841和T862。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的三个或三个以上突变：T146、C154、T303、T426、A433、A435、T530、C572、T596、T617、T688、A696、T702、A709、A712、T714、A790、A841和T862。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的四个或四个以上突变：T146、C154、T303、T426、A433、A435、T530、C572、T596、T617、T688、A696、T702、A709、A712、T714、A790、A841和T862。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的五个或五个以上突变：T146、C154、T303、T426、A433、A435、T530、C572、T596、T617、T688、A696、T702、A709、A712、T714、A790、A841和T862。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的一或多个突变：T688、A696、T702、A712和T714。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的两个或两个以上突变：T688、A696、T702、A712和T714。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的三个或三个以上突变：T688、A696、T702、A712和T714。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的四个或四个以上突变：T688、A696、T702、A712和T714。所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含位于对应于以下的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变：T688、A696、T702、A712和T714。
[0012]在另一方面，本文提供了一种核酸构建体，所述核酸构建体包括第一醇氧化酶启动子元件，其中所述第一醇氧化酶启动子元件可以包含选自由对应于以下的相对于SEQ ID NO:28的突变组成的组的一或多个突变：T146C、C154T、T303C、T426A、A433T、A435G、T530A、C572T、T596C、T617C、T688C、A696T、T702C、A709G本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸构建体，其包括第一醇氧化酶启动子元件，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括位于对应于核苷酸位置668
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734中的任何核苷酸位置的一或多个核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变。2.一种核酸构建体，其包括第一醇氧化酶启动子元件，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的群组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的一或多个突变：T146、C154、T303、T426、A433、A435、T530、C572、T596、T617、T688、A696、T702、A709、A712、T714、A790、A841和T862。3.根据权利要求1到2中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括位于选自由对应于以下的核苷酸位置组成的群组的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的一或多个突变：T688、A696、T702、A712和T714。4.根据权利要求1到3中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括位于对应于以下的核苷酸位置处的相对于SEQ ID NO:28的突变：T688、A696、T702、A712和T714。5.一种核酸构建体，其包括第一醇氧化酶启动子元件，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括选自由对应于以下的相对于SEQ ID NO:28的突变组成的群组的一或多个突变：T146C、C154T、T303C、T426A、A433T、A435G、T530A、C572T、T596C、T617C、T688C、A696T、T702C、A709G、A712G、T714G、A790G、A841T和T862A。6.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括选自由以下组成的群组的相对于SEQ ID NO:28的一或多个突变：T688C、A696T、T702C、A712G和T714G。7.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括选自由以下组成的群组的相对于SEQ ID NO:28的两个或两个以上突变：T688C、A696T、T702C、A712G和T714G。8.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括选自由以下组成的群组的相对于SEQ ID NO:28的三个或三个以上突变：T688C、A696T、T702C、A712G和T714G。9.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括选自由以下组成的群组的相对于SEQ ID NO:28的四个或四个以上突变：T688C、A696T、T702C、A712G和T714G。10.根据权利要求1到5中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件包括相对于SEQ ID NO:28的突变T688C、A696T、T702C、A712G和T714G。11.根据权利要求1到10中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件是醇氧化酶1(AOX1)启动子元件。12.根据权利要求1到11中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一醇氧化酶启动子元件与SEQ ID NO:28具有至少90％的序列同一性。13.根据权利要求1到12中任一权利要求所述的核酸构建体，其进一步包括核苷酸序列，其中所述核苷酸序列与所述第一醇氧化酶启动子元件可操作地连接。14.根据权利要求13所述的核酸构建体，其中所述核苷酸序列对第一蛋白质进行编码。15.根据权利要求13所述的核酸构建体，其中所述第一蛋白质选自由以下组成的群组：
抗体或其片段、酶、调节蛋白、肽激素、凝血蛋白、细胞因子、细胞因子抑制剂和血红素结合蛋白。16.根据权利要求13到14中任一权利要求所述的核酸构建体，其中所述第一蛋白质是血红素结合蛋白。17.根据权利要求16所述的核酸构建体，其中所述血红素结合蛋白是豆血红蛋白。18.根据权利要求17所述的核酸构建体，其中所述血红素结合蛋白包括氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:1
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27中的任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性。19.一种细胞，其包括第一核酸构建体，其中所述第一核酸构建体是根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：非凡食品有限公司，
类型：发明
国别省市：