胃癌化疗药物敏感性的检测方法、试剂盒及NSUN2检测的应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其是胃癌化疗药物敏感性的检测方法、试剂盒及NSUN2检测的应用，现提出如下方案，胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒包括针对NSUN2基因的扩增引物和NSUN2基因的干扰序列，试剂盒中的试剂还包括顺铂和/或检测NSUN2的试剂；胃癌化疗药物敏感性的检测方法利用小干扰RNA慢病毒载体感染胃癌组织细胞，敲低胃癌组织细胞中NSUN2表达含量，得到第一组织细胞，再利用所述化疗药物处理第一组织细胞得到第二组织细胞，培育第二组织细胞，通过检测第二组织细胞的增值能力来判断胃癌化疗药物敏感性。本发明专利技术可以并利用shRNA干扰实验敲低NSUN2的表达水平，并结合该分子对胃癌预后的预测，评估胃癌患者顺铂治疗疗效和预后情况，整个评估流程简便易行，可行性高。性高。性高。

【技术实现步骤摘要】
胃癌化疗药物敏感性的检测方法、试剂盒及NSUN2检测的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是胃癌化疗药物敏感性的检测方法、试剂盒及NSUN2检测的应用。

技术介绍

[0002]胃癌是最具有侵袭和转移特性的恶性肿瘤之一，顺铂等化疗药物治疗是临床治疗胃癌的重要手段之一，对于组织学证实的晚期胃癌且未接受过化疗的患者来说，基于顺铂(cisplatin，CDDP)的化疗被视为一线治疗，尽管多年研究使得胃癌病因方面取得了进展，但许多患者的化疗效果仍然欠佳，究其原因，胃癌细胞对药物敏感性或药物耐受性不清楚，导致无法合理应用化疗药物，无效化疗；现有技术中的对胃癌细胞对顺铂药物的耐受性的检测尚无良好的方法。本申请提出了利用检测胃癌细胞中的NSUN2的表达量评估胃癌对顺铂的耐药性，NSUN2表达量越高，顺铂治疗约不敏感，通过检测胃癌患者NSUN2表达水平，以确定是否需要使用顺铂药物来化疗。
[0003]为此，本专利技术提出了胃癌化疗药物敏感性的检测方法、试剂盒及NSUN2检测的应用。

技术实现思路

[0004]为解决现有技术中的问题，本专利技术提出了胃癌化疗药物敏感性的检测方法、试剂盒及NSUN2检测的应用。
[0005]经研究发现，NSUN2在胃癌组织中呈现高水平表达，且高表达与患者的预后不良密切相关。通过2条NSUN2的慢病毒shRNA干扰序列敲低胃癌NSUN2的表达水平后，明显抑制了胃癌细胞的生长，且最为重要的是，抑制NSUN2表达后，胃癌细胞对顺铂治疗的敏感性提高了，提示小干扰RNA敲低NSUN2的表达有望成为提高胃癌化疗敏感性方案；据此，我们提出：检测NSUN2基因表达量之后，敲低NSUN2的表达进而应用顺铂药物治疗胃癌的方案，，降低胃癌死亡率。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒，包括如下试剂：针对NSUN2基因的扩增引物和NSUN2基因的干扰序列。
[0008]进一步地，所述试剂盒中的试剂还包括顺铂和/或检测NSUN2的试剂。
[0009]进一步地，所述NSUN2基因的干扰序列包括：干扰序列1：5
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‑3’
；干扰序列2：5
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。
[0010]进一步地，所述NSUN2基因的扩增引物包括上游引物：5
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‑3’
；下游引物：5
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‑3’
。
[0011]一种NSUN2基因的干扰序列在制备用于评估胃癌顺铂化疗药物敏感性的试剂盒中的应用。
[0012]NSUN2用作胃癌化疗药物敏感性评估标记物，所述化疗药物包括顺铂。
[0013]NSUN2的检测在胃癌化疗耐药评估中的应用或NSUN2的检测在在制备用于评估胃癌顺铂化疗药物敏感性的试剂盒中的应用。
[0014]一种胃癌化疗药物敏感性的检测方法，利用小干扰RNA慢病毒载体感染胃癌组织细胞，敲低胃癌组织细胞中NSUN2表达含量，得到第一组织细胞，再利用所述化疗药物处理第一组织细胞得到第二组织细胞，培育第二组织细胞，通过检测第二组织细胞的增值能力来判断胃癌化疗药物敏感性。
[0015]进一步地，所述化疗药物包括顺铂，所述小干扰RNA的序列包括：干扰序列1：5
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‑3’
；干扰序列2：5
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。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]1、本专利技术通过检测胃癌细胞中NSUN2的表达量，先应用小干扰RNA敲低胃癌细胞中NSUN2的表达量，再应用化疗药物顺铂处理胃癌细胞，通过细胞生长曲线分析检测药物敏感性；
[0018]2、采用本专利技术公开的技术方案后，可以并利用shRNA干扰实验敲低NSUN2的表达水平，并结合该分子对胃癌预后的预测，评估胃癌患者顺铂治疗疗效和预后情况，整个评估流程简便易行，可行性高。
附图说明
[0019]图1为本专利技术的为2条NSUN2 shRNA干扰序列对胃癌细胞(shCtrl)HGC27的敲低效率图；
[0020]图2为本专利技术的胃癌细胞HGC27(shCtrl)对照组(未敲出NSUN2表达)、胃癌细胞HGC27顺铂单药处理组(shCtrl+CDDP)、敲低NSUN2表达后胃癌细胞增殖(shNSUN2)和敲低NSUN2表达后胃癌细胞增殖顺铂单药处理组(shNSUN2+CDDP)的增值效率折线图；
[0021]图3为本专利技术的胃癌细胞HGC27(shCtrl)对照组(未敲出NSUN2表达)、胃癌细胞HGC27顺铂单药处理组(shCtrl+CDDP)、敲低NSUN2表达后胃癌细胞增殖(shNSUN2)和敲低NSUN2表达后胃癌细胞增殖顺铂单药处理组(shNSUN2+CDDP)的增值效率柱状图。
具体实施方式
[0022]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0023]本专利技术所用试剂和原料均市售可得或者可以按照文献方法制备。本专利技术实施例中未注明的具体条件的试验方法均按照常规条件，或者按照制造厂商所建议的条件。
[0024]在本专利技术中：检测试剂是由NSUN2基因表达的引物、NSUN2基因的shRNA干扰序列组成。
[0025]试剂盒均为由qPCR试剂、CCK
‑
8增殖实验检测试剂盒。
[0026]胃癌的生物样品为胃癌患者手术切除的离体胃癌组织。
[0027]在本专利技术中公开了抑制NSUN2表达的2条shRNA序列，及其对胃癌细胞生长的抑制作用。
[0028]该序列为干扰RNA序列，用于抑制肿瘤细胞中信使RNA NSUN2(NSUN2)的表达,属于RNA序列。
[0045][0046]4)将MIXⅡ加入MIXⅠ中；
[0047]5)42℃温育15min；
[0048]6)85℃灭活，5sec。
[0049]荧光实时定量PCR
[0050]表qPCR反应体系(10μl)
[0051][0052][0053]qPCR反应每个样本需要3个复孔，每个复孔为10μl反应体系。qPCR反应参数具体为：95℃预热10min；95℃变性30sec，60℃退火30sec，72℃退火30sec，共40个循环。利用StepOne
TM
软件的输出功能导出每个样本的Ct值，以β
‑
actin为内参，用2
‑
ΔΔCt
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：针对NSUN2基因的扩增引物和NSUN2基因的干扰序列。2.根据权利要求1所述的一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的试剂还包括顺铂和/或检测NSUN2的试剂。3.根据权利要求1所述的一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒，其特征在于，所述NSUN2基因的干扰序列包括：干扰序列1：5
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GAGCGAUGCCUUAGGAUAUUA
‑3’
；干扰序列2：5
’‑
CCCAAGAAUGAACGGCUUCAU
‑3’
。4.根据权利要求1所述的一种胃癌化疗药物敏感性检测试剂盒，其特征在于，所述NSUN2基因的扩增引物包括上游引物：5
’‑
AUCUUGAGAAAAUCGCCACAC
‑3’
；下游引物：5
’‑
AUCAUUCGCAAUAACAAAUCCCU
‑3’

【专利技术属性】
技术研发人员：樊红，沈小慧，李懿萍，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：