C型凝集素样受体-1作为真菌性角膜炎的治疗标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了C型凝集素样受体

【技术实现步骤摘要】
C型凝集素样受体
‑
1作为真菌性角膜炎的治疗标志物的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及C型凝集素样受体
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1(C
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type lectin
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like receptor
‑
1，CLEC
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1)作为真菌性角膜炎的治疗标志物的应用。

技术介绍

[0002]真菌性角膜炎(fungal keratitis,FK)在全球范围内是一种严重的感染性眼部疾病，目前由于在临床上缺乏有效的治疗手段，往往可引发眼部严重并发症，严重者最终可导致永久性视力丧失。我国是以农业为主的发展中国家，而且是真菌性角膜炎的高发区，特别是农作时植物性角膜外伤成为该病的发生的主要原因。虽然近年来许多真菌性角膜炎药物已应用于临床，但这些药物的疗效较差，而且真菌逐渐出现了耐药性，尤其是对唑类药物的耐药性。由于缺乏有效的治疗手段，很多患者需要进行角膜移植甚至是眼球摘除。
[0003]真菌感染角膜后，角膜中的模式识别受体与真菌表面的病原体相关分子模式的相互识别，启动角膜的固有免疫应答清除真菌病原体。但糖皮质激素可以抑制巨噬细胞膜对抗原的吞噬和处理以及细胞免疫过程。而真菌各种致病因子能协助真菌黏附于宿主细胞，分解细胞膜中的磷脂，从而破坏细胞膜，使菌丝更有效地穿透宿主细胞，减少中性粒细胞的趋化性及巨噬细胞的吞噬功能。盲目应用糖皮质激素类药物可导致疾病进展，严重使可导致角膜穿孔。
[0004]角膜固有免疫应答启动后，大量的中性粒细胞及趋化因子聚集，导致角膜水肿和炎症浸润，甚至造成角膜溃疡甚至穿孔。因此，过强的免疫反应在控制外来感染的同时对角膜组织造成损伤，使角膜难以恢复透明，对患者视力造成严重的损伤。最近的研究证明，在疾病的后期使用糖皮质激素类药物可以减轻角膜混浊，帮助角膜维持良好的透明性。因此，把握使用糖皮质激素类药物使用的时间点至关重要。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种真菌性角膜炎的治疗标志物及其应用。
[0006]C型凝集素样受体家族编码于人类12号染色体自然杀伤(NK)基因复合体的着丝粒部分，可识别多种配体，执行多种功能。然而，未有文献公开或指示C型凝集素样受体家族与真菌性角膜炎之间的关联性。
[0007]本专利技术的申请人通过体内实验、体外实验，充分证明C型凝集素样受体
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1(CLEC
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1)作为C型凝集素样受体家族一员，在真菌性角膜炎急性炎症期表达降低，恢复期表达升高。使用那他霉素治疗真菌性角膜炎后，CLEC
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1的表达下降。上调CLEC
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1表达后，髓过氧化物酶(MPO)水平降低，中性粒细胞募集减少，IL
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1β表达降低，真菌负荷增加。
[0008]本专利技术采用定量聚合酶链反应(qRT
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PCR)和免疫荧光法检测了真菌性角膜炎患者角膜中CLEC
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1的表达。然后分别在THP
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1巨噬细胞和C57BL/6小鼠模型上进行体内外实验，qRT
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PCR、westernblot和免疫荧光法检测CLEC
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1的表达。结果表明，CLEC
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1在真菌性角膜炎
急性炎症期表达降低，恢复期表达升高。使用那他霉素治疗真菌性角膜炎后，CLEC
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1的表达下降。利用病毒载体使小鼠角膜及THP
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1巨噬细胞过表达CLEC
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1，通过裂隙灯摄影、临床评分、菌落形成单位(CFU)、生物发光成像系统图像采集、MPO检测、免疫荧光染色、qRT
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PCR和westernblot等实验证实上调CLEC
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1表达后，MPO水平降低，中性粒细胞募集减少，IL
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1β表达降低，真菌负荷增加。
[0009]基于上述研究结果，本专利技术的第一方面提供了C型凝集素样受体
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1作为真菌性角膜炎的治疗标志物的应用。
[0010]在本专利技术的第一方面所提供的应用中，所述真菌性角膜炎为烟曲霉菌性角膜炎。
[0011]在本专利技术的第一方面所提供的应用中，所述治疗标志物用于指示使用糖皮质激素类药物的用药时机。
[0012]进一步地，在本专利技术的第一方面所提供的应用中，当C型凝集素样受体
‑
1在体内的表达增加，指示使用糖皮质激素类药物的用药时机。
[0013]本专利技术的第二方面提供一种用于在治疗真菌性角膜炎的过程中评估使用糖皮质激素类药物的用药时机的试剂盒，该试剂盒包括检测角膜中C型凝集素样受体
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1水平的试剂。
[0014]在本专利技术的第二方面提供的试剂盒中，所述真菌性角膜炎为烟曲霉菌性角膜炎。
[0015]进一步地，本专利技术的第二方面提供的试剂盒中，所述试剂基于定量聚合酶链反应或免疫印迹技术实现对C型凝集素样受体
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1水平的检测。
附图说明
[0016]图1是实施例1采用qRT
‑
PCR法检测的正常角膜以及感染烟曲霉菌性角膜炎的人角膜中CLEC
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1mRNA表达的结果图；
[0017]图2是实施例1采用免疫荧光染色法检测的正常角膜以及感染烟曲霉菌性角膜炎的人角膜中CLEC
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1蛋白表达的结果图；
[0018]图3是实施例2烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型建立1/2、1、2、3、5、7、10、14天后裂隙灯显微镜下的照片；
[0019]图4是实施例2烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型建立1/2、1、2、3、5、7、10、14天后，采用qRT
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PCR法检测的小鼠角膜中CLEC
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1mRNA表达的结果图；
[0020]图5是实施例2烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型建立1/2、1、2、3、5、7、10、14天后，采用western blot法检测的小鼠角膜中CLEC
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1蛋白表达的结果图；
[0021]图6是实施例2烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型建立5天后，采用免疫荧光染色法检测的小鼠角膜中CLEC
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1蛋白表达的结果图；
[0022]图7是实施例2小鼠烟曲霉菌感染组与烟曲霉菌感染联合那他霉素治疗组1、3、5天裂隙灯显微镜下的照片；
[0023]图8是实施例2小鼠烟曲霉菌感染组与烟曲霉菌感染联合那他霉素治疗组3天及5天的角膜临床评分；
[0024]图9是实施例2采用qRT
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PCR检测小鼠烟曲霉菌感染组与烟曲霉菌感染联合那他霉素治疗组CLEC
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1mRNA表达的结果图；
[0025]图10是实施例2采用western blot检测小鼠烟曲霉菌感染组与烟曲霉菌感染联合
那他霉素治疗组CLEC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.C型凝集素样受体
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1作为真菌性角膜炎的治疗标志物的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述真菌性角膜炎为烟曲霉菌性角膜炎。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗标志物用于指示使用糖皮质激素类药物的用药时机。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，当C型凝集素样受体
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1在体内的表达增加，指示使用糖皮质激素类药物的用药时机。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：车成业，张倩，吕乐雨，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：