卵巢组织保存方法技术

本发明专利技术提供了一种卵巢组织保存方法，包括将卵巢组织顺次浸没于平衡液和玻璃化液后放置于液氮中保存，以及将保存于液氮中的卵巢组织取出后顺次置于N种复苏液进行复苏过程。本发明专利技术采用液氮快速降温的方法尽可能降低卵巢组织冻融过程的损伤，提高组织复苏后的活率，保存其生理功能。保存其生理功能。

【技术实现步骤摘要】
卵巢组织保存方法


[0001]本专利技术涉及生物保存
，尤其涉及卵巢组织保存方法。

技术介绍

[0002]2018年全球新增860万例女性癌症患者，在每年新确诊的女性癌症患者中，大约有5％为育龄期女性。肿瘤治疗无论手术或放化疗均可造成医源性的生育力丧失，卵巢功能受损或衰竭的风险可达100％。随着癌症患者低龄化的现象渐趋明显，肿瘤患者治疗后有较高的长期生存率，约有75％的患者具有保存生育能力和内分泌水平的需求。有研究表明，大约有8％的子宫内膜癌、12％的卵巢癌和40％的宫颈癌发生在生育年龄的妇女，而这些患者大多仍然有生育要求。
[0003]卵巢组织冷冻是随着女性疾病患者对保留生育力的需求而发展起来的一项新技术，为接受放化疗的肿瘤患者保留完整生育功能提供了一线生机。临床研究表明，卵巢组织冻存复苏后移植成功率约85％～90％，95％的患者能够恢复卵巢内分泌功能，临床妊娠率约45％，出生率约35％～40％。卵巢组织冷冻保存的方法和冷冻解冻液对卵巢组织中卵泡的存活率具有重要的影响，良好的冻存程序可以保存大量的卵泡，为后续能否成功移植奠定基础。
[0004]理想的卵巢组织的冻融方法和冻存复苏溶液体系要能够保存卵巢组织的活性和功能。目前虽然开发出了多种冷冻保存溶液，但其复苏活性不理想。
[0005]因此，有必要提供一种新型的卵巢组织保存方法以解决现有技术中存在的上述问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种卵巢组织保存方法。
[0007]为实现上述目的，本专利技术的所述卵巢组织保存方法包括：
[0008]提供卵巢组织、平衡液、玻璃化液和N种复苏液，N为不小于2的正整数；
[0009]将所述卵巢组织顺次浸没于所述平衡液和所述玻璃化液后放置于液氮中保存；
[0010]将保存于液氮中的卵巢组织取出后顺次置于所述N种复苏液进行复苏过程。
[0011]本专利技术的所述卵巢保护方法的有益效果在于：将所述卵巢组织顺次浸没于所述平衡液和所述玻璃化液后放置于液氮中保存；将保存于液氮中的卵巢组织取出后顺次置于所述N种复苏液进行复苏过程，有利于提高卵巢组织复苏后活率。
[0012]优选的，控制所述平衡液的温度为10
‑
25摄氏度，所述卵巢组织浸没于所述平衡液的时间不超过25分钟。
[0013]优选的，控制所述玻璃化液的温度为10
‑
25摄氏度，所述卵巢组织浸没于所述玻璃化液的时间至少为15分钟。
[0014]进一步优选的，控制所述卵巢组织浸没于所述玻璃化液的时间至少为15分钟直至所述卵巢组织下沉于置有所述玻璃化液的容器底部。
[0015]优选的，控制使用的第一种复苏液的温度为30
‑
40摄氏度，所述卵巢组织浸没于所述第一种复苏液的时间不超过10分钟。
[0016]进一步优选的，控制其余复苏液的温度为10
‑
25摄氏度，所述卵巢组织浸没于所述其余复苏液分别进行的复苏过程时间不超过15分钟。
[0017]优选的，控制所述玻璃化液中非渗透冷冻保护剂的含量是所述平衡液中非渗透性冷冻保护剂含量的8
‑
30倍。
[0018]优选的，控制所述玻璃化液中渗透性冷冻保护剂的含量是所述平衡液中渗透性冷冻保护剂含量的0.8
‑
1.5倍。
[0019]优选的，不同复苏液中非渗透性冷冻保护剂的含量随所述N次复苏过程逐步降低0.2
‑
1倍。
[0020]优选的，控制所述玻璃化液中乙二醇含量高于所述平衡液中乙二醇含量，所述玻璃化液中二甲基亚砜含量高于所述平衡液中二甲基亚砜含量。
[0021]优选的，控制所述平衡液、所述玻璃化液和每种复苏液均包含组成和含量相同的基准液。
具体实施方式
[0022]针对现有技术存在的问题，本专利技术的实施例提供了一种生物保存液及其在卵母细胞和卵巢组织保存中的应用，以提供卵巢组织存活的微环境，提高卵巢组织复苏后的活率。
[0023]本专利技术实施例的人血白蛋白为非重组人血白蛋白。具体的，所述非重组人血白蛋白经对健康人血液纯化得到，能够维持与调节溶液的渗透压并对细胞形成保护作用。
[0024]本专利技术实施例的所述生物保存液，由平衡液、玻璃化液和N种解冻液组成，以应用于对卵巢组织进行的冻存过程和N次复苏过程，N为不小于2的正整数。
[0025]本专利技术一些实施例中，所述平衡液由基准液、渗透性冷冻保护剂、非渗透冷冻保护剂和溶剂组成。
[0026]具体的，所述平衡液的非渗透冷冻保护剂为人血白蛋白，所述平衡液的渗透性冷冻保护剂由乙二醇和二甲基亚砜组成。
[0027]本专利技术一些实施例的平衡液中，以占所述平衡液的体积计，人血白蛋白含量为5
‑
40mg/ml，乙二醇和二甲基亚砜的体积百分比均为2
‑
30％。
[0028]本专利技术一些实施例的平衡液中，乙二醇和二甲基亚砜具有相同的含量。
[0029]本专利技术一些实施例中，所述玻璃化液由基准液、渗透性冷冻保护剂、非渗透冷冻保护剂和溶剂组成。
[0030]具体的，所述玻璃化液的非渗透冷冻保护剂由人血白蛋白以及蔗糖和海藻糖的任意一种组成。所述玻璃化液的渗透性冷冻保护剂由乙二醇和二甲基亚砜组成。
[0031]本专利技术一些实施例的玻璃化液中，以占所述玻璃化液的体积计，蔗糖和海藻糖任意一种的含量为0.1
‑
2mol/L，人血白蛋白含量为5
‑
40mg/ml，乙二醇和二甲基亚砜的体积百分比均为2
‑
30％。
[0032]本专利技术一些实施例的玻璃化液中，乙二醇和二甲基亚砜具有相同的含量。
[0033]本专利技术一些实施例中，所述玻璃化液中渗透性冷冻保护剂的含量高于所述平衡液中的渗透性冷冻保护剂的含量。
[0034]具体的，所述玻璃化液中渗透性冷冻保护剂含量是所述平衡液中渗透性冷冻保护剂含量的0.8
‑
1.5倍。
[0035]本专利技术一些实施例中，所述玻璃化液中非渗透冷冻保护剂含量高于所述平衡液中非渗透性冷冻保护剂的含量。
[0036]具体的，所述玻璃化液中非渗透冷冻保护剂含量是所述平衡液中非渗透性冷冻保护剂含量的8
‑
30倍。
[0037]本专利技术一些实施例中，所述玻璃化液的非渗透冷冻保护剂具有与所述平衡液中相同含量的人血白蛋白。
[0038]本专利技术一些实施例中，所述玻璃化液的乙二醇含量高于所述平衡液的乙二醇含量，所述玻璃化液的二甲基亚砜含量高于所述平衡液的二甲基亚砜含量。
[0039]本专利技术一些实施例中，每种解冻液由基准液、非渗透性冷冻保护剂和溶剂组成。
[0040]具体的，所述解冻液非渗透性冷冻保护剂由人血白蛋白，以及蔗糖和海藻糖的任意一种组成。
[0041]本专利技术一些实施例的解冻液中，以每种解冻液的体积计，每种解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵巢组织保存方法，其特征在于：提供卵巢组织、平衡液、玻璃化液和N种复苏液，N为不小于2的正整数；将所述卵巢组织顺次浸没于所述平衡液和所述玻璃化液中处理后转入液氮中冷冻保存；将保存于液氮中的卵巢组织取出后顺次置于所述N种复苏液中进行复苏过程。2.根据权利要求1所述的卵巢组织保存方法，其特征在于，控制所述平衡液的温度为10
‑
25摄氏度，所述卵巢组织浸没于所述平衡液的时间不超过25分钟。3.根据权利要求1所述的卵巢组织保存方法，其特征在于，控制所述玻璃化液的温度为10
‑
25摄氏度，所述卵巢组织浸没于所述玻璃化液的时间至少为15分钟。4.根据权利要求3所述的卵巢组织保存方法，其特征在于，控制所述卵巢组织浸没于所述玻璃化液的时间至少为15分钟直至所述卵巢组织下沉于盛有所述玻璃化液的容器底部。5.根据权利要求1所述的卵巢组织保存方法，其特征在于，控制使用的第一种复苏液的温度为30
‑
40摄氏度，所述卵巢组织浸没于所述第一种复苏液的时间不超过10分钟。6.根据权利要求5所述的卵巢组织保存...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦芹芹，
申请(专利权)人：上海慧存医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：