PINK1作为预测肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性及肺腺癌复发的标志物的应用制造技术

本发明专利技术公开了PINK1作为预测肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性及肺腺癌复发的标志物的应用。本发明专利技术通过实验发现，PINK1在肿瘤中的表达增高提示肺腺癌患者具有更高的肿瘤休眠和复发风险，因此可通过检测PINK1在肺腺癌患者中的表达水平预测肺腺癌的休眠和复发，以弥补现有的技术中肺腺癌休眠和复发的生物标志物的空白，可根据PINK1的表达水平作为肺腺癌休眠和复发的判断标准，用于开发肺腺癌休眠和复发预测试剂盒。另外，对于接受MAPK通路抑制剂的肺腺癌患者，PINK1的表达增高提示患者治疗后出现耐药和复发的风险增高，这将有利于临床上提早采取干预措施，预防肿瘤复发，为临床治疗肺腺癌提供了新的策略和思路。提供了新的策略和思路。提供了新的策略和思路。

【技术实现步骤摘要】
PINK1作为预测肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性及肺腺癌复发的标志物的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学技术和生物医药领域，特别涉及PINK1作为预测肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性及肺腺癌复发的标志物的应用。

技术介绍

[0002]肺癌是危害人类健康的常见的肿瘤之一，肺癌的死亡率高居恶性肿瘤的首位。非小细胞肺癌占所有肺癌的80％～85％，其中肺腺癌是非小细胞肺癌中最常见的病理组织类型。肺癌的治疗包括手术切除，放化疗和靶向治疗。即使治疗的手段不断进步，肺腺癌患者的5年生存率仍然很低。在早期肺腺癌经手术完整切除肿瘤的患者中，约30％会经历肿瘤复发。此外，大多数肺腺癌患者在确诊时即为晚期，这类患者的治疗策略主要是化疗和靶向治疗。30％的晚期肺腺癌患者在接受化疗和靶向治疗后肿瘤出现耐药和复发。因此，肿瘤复发是肺腺癌治疗失败和预后不良的重要原因，为了克服肺腺癌耐药和复发，亟需发展准确、特异的生物标志物和治疗靶点，以辅助预测肺腺癌耐药和复发的风险。
[0003]肿瘤休眠是导致复发的重要原因。肿瘤休眠是肿瘤细胞进入了一种类似冬眠的状态。当肿瘤细胞处于休眠状态时，意味着其不再进行分裂，在体内可以存活数年，也难以被检测到，并且对常规治疗方法不再敏感。在一定的条件下，肿瘤细胞会从休眠状态下“苏醒”，重新恢复增殖，导致肿瘤复发。肿瘤的休眠和再次激活是肿瘤耐药和复发的关键因素。对于肿瘤细胞如何进入休眠，且保持休眠状态尚不清楚。一些研究表明，代谢重编程活跃是休眠肿瘤细胞的一大特征。自1952年瓦伯格提出，在肿瘤中线粒体呼吸功能损伤是细胞恶性转化的前提，有氧糖酵解与线粒体功能障碍被广泛接受为肿瘤的标志。然而近期的研究发现，代谢的灵活性可满足肿瘤发展各个阶段的不同需求，线粒体的功能在肿瘤发生发展的特定时期发挥至关重要的作用。在休眠的肿瘤细胞中，线粒体的功能尤其重要。许多研究证明，线粒体从细胞能量代谢，维持氧化还原稳态平衡，调控细胞凋亡等方面支持着休眠细胞的存活。健康的线粒体网络是肿瘤细胞休眠和存活的基础。
[0004]细胞内存在一套保守的线粒体质量控制系统，包括线粒体合成、线粒体动力学、线粒体自噬、ROS监控等，其中线粒体自噬是线粒体质量控制的核心环节。当细胞遭受恶劣环境时，例如饥饿或化疗，会导致线粒体受损，这时细胞会启动线粒体自噬，通过溶酶体途径吞噬并降解受损的线粒体，以维持功能性线粒体网络和细胞稳态。大量研究表明，在抗肿瘤药物处理下，线粒体自噬促进肿瘤细胞存活，增强肿瘤细胞耐药。在哺乳动物体内，已发现多条通路参与线粒体自噬，其中，以PINK1介导的线粒体自噬最为经典。PINK1是一个具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性的线粒体外膜蛋白，能够作为受损线粒体的分子感受器。正常情况下，PINK1被转运至线粒体内膜并立即降解；在线粒体功能失调时，PINK1被稳定在线粒体外膜，招募其他线粒体外膜的效应蛋白发生一系列磷酸化和泛素化事件，最终导致线粒体被酸性囊泡包裹，并被运输到溶酶体降解。细胞通过PINK1介导的线粒体自噬清除受损的线粒体，维护线粒体质量，增强氧化磷酸化，进而有利于氧利用和能量合成。
[0005]MAPK通路的基因，包括RAS、RAF、MEK、ERK，在约40％的肺腺癌患者中存在突变，并驱动肺腺癌的进展。携带这类突变的患者肿瘤进展迅速，生存预后差，且往往对传统化疗不敏感。目前，多个MAPK通路抑制剂被应用于治疗肺腺癌患者，如靶向KRAS G12C突变蛋白的药物AMG 510，靶向RAF蛋白的达拉菲尼和维莫非尼，靶向MEK蛋白的曲美替尼。这些MAPK通路蛋白的抑制剂改善了患者的生存，但仍有部分患者在使用MAPK通路抑制剂后复发，这提示MAPK通路抑制剂治疗后可能引起肿瘤休眠。肿瘤休眠导致的MAPK通路抑制剂耐药已经成为限制其临床应用和患者生存预后差的关键因素，因此，为了克服及逆转肺腺癌对MAPK通路抑制剂耐受，需要使用准确、灵敏、特异性强的生物标记物辅助尽早判断肺腺癌是否对MAPK通路抑制剂耐药，指导临床用药，以提高临床疗效，改善患者预后。
[0006]目前，对肺腺癌的休眠判定没有参考标准，也缺乏针对肺腺癌休眠和复发的特异性的指标。因此，对肺腺癌休眠进行判定，以便选择合适的治疗方案，将休眠的肿瘤细胞彻底杀死，将显著降低患者的复发风险，提高肺腺癌患者的生存率。此外，药物诱导的肿瘤休眠是否导致了肺腺癌患者对MAPK通路抑制剂耐药，也尚无研究。针对这个问题进行深入且全面的探究，必将对肺腺癌MAPK通路抑制剂耐药的逆转发挥重要的指导作用。
[0007]为了尽早判断肺腺癌休眠和复发，克服及逆转肺腺癌治疗药物耐受，需要使用准确、灵敏、特异性强的生物标记物辅助预测肺腺癌休眠和复发的风险，以便选择最佳治疗方案，提高患者生存率。

技术实现思路

[0008]本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供PINK1在制备调控肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性的产品中的应用。
[0009]本专利技术的另一目的在于提供用于检测PINK1表达水平的试剂在制备预测肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性的产品中的应用。
[0010]本专利技术的再一目的在于提供用于检测PINK1表达水平的试剂在制备预测肺腺癌患者发生肿瘤休眠和复发的产品中的应用。
[0011]本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
[0012]PINK1在制备调控肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性的产品中的应用。
[0013]所述的PINK1是一个具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性的线粒体外膜蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：
[0014]MAVRQALGRGLQLGRALLLRFTGKPGRAYGLGRPGPAAGCVRGERPGWAAGPGAEPRRVGLGLPNRLRFFRQSVAGLAARLQRQFVVRAWGCAGPCGRAVFLAFGLGLGLIEEKQAESRRAVSACQEIQAIFTQKSKPGPDPLDTRRLQGFRLEEYLIGQSIGKGCSAAVYEATMPTLPQNLEVTKSTGLLPGRGPGTSAPGEGQERAPGAPAFPLAIKMMWNISAGSSSEAILNTMSQELVPASRVALAGEYGAVTYRKSKRGPKQLAPHPNIIRVLRAFTSSVPLLPGALVDYPDVLPSRLHPEGLGHGRTLFLVMKNYPCTLRQYLCVNTPSPRLAAMMLLQLLEGVDHLVQQGIAHRDLKSDNILVELDPDGCPWLVIADFGCCLADESIGLQLPFSSWYVDRGGNGCLMAPEVSTARPGPRAVIDYSKADAWAVGAIAYEIFGLVNPFYGQGKAHLESRSYQEAQLPALPESVPPDVRQLVRALLQREASKRPSARVAANVLHLSLWGEHILALKNLKLDKMVGWLLQQSAATLLANRLTEKCCVETKMKMLFLANLECETLCQAALLLCSWRAAL。
[0015]所述的调控为通过如下方式实现：
[0016](1)通过过本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PINK1在制备调控肺腺癌对MAPK抑制剂敏感性的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的MAPK抑制剂为KRASG12C抑制剂、RAF抑制剂和MEK抑制剂中的至少一种。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的MAPK抑制剂为AMG510、达帕菲尼、维莫非尼和曲美替尼中的至少一种。4.根据权利要求1～3所述的应用，其特征在于，所述的调控通过如下方式实现：(1)通过过表达PINK1基因降低肺腺癌对MAPK抑制剂的敏感性；(2)抑制PINK1基因的表达提高肺腺癌对MAPK抑制剂的敏感性。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：方式(1)中所述的过表达PINK1基因通过如下步骤实现：将PINK1基因连接到过表达骨架载体上，构建得到过表达PINK1基因的质粒；然后使用慢病毒包装系统对过表达PINK1的质粒进行慢病毒包装，经筛选得到过表达PINK1的细胞株；方式(2)中所述的抑制PINK1基因的表达通过采用抑制PINK1的试剂或敲低PINK1基因的方式实现；所述的抑制PINK1的试剂为抑制PINK1介导的线粒体自噬的制剂羟氯喹；所述的敲低PINK1基因的靶点序列为如下任一序列：shPINK1#1:5
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【专利技术属性】
技术研发人员：尹东，李贇，陈恒星，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：