一种针对乙型肝炎病毒的抗原肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种针对乙型肝炎病毒的抗原肽，基于乙型肝炎病毒编码蛋白的氨基酸序列，结合不同主要组织相容性复合体I类分子中的人类白细胞抗原单倍型，使用生物信息预测方法，合成抗原肽，所述抗原肽包括：如SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种针对乙型肝炎病毒的抗原肽及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫治疗药物
，尤其涉及一种针对乙型肝炎病毒的抗原肽及其应用。

技术介绍

[0002]肿瘤的免疫治疗被认为是继手术、放疗、化疗和小分子靶向治疗之后的新一代的肿瘤治疗方法，它与之前传统治疗方法的不同之处在于：免疫治疗将治疗手段从药物直接杀伤肿瘤细胞改变为免疫细胞的增强，通过提高患者自身的抗肿瘤免疫能力来治疗肿瘤，与传统治疗相比具有杀伤精准、副作用小和疗效持久等优势。此外，机体免疫系统具有免疫记忆的特性，因此免疫治疗可以帮助患者形成记忆型免疫，在防止肿瘤复发和转移上具有显著优势。
[0003]肝细胞癌(HCC)在最常见的肿瘤中居第五位，具有相当广泛的地域差异，全世界每年发病率约100万，主要集中在中国。80％左右的肝癌与乙型肝炎病毒感染(HBV)有关。约15％
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40％未经治疗的感染者会发展成肝硬化、肝功能衰竭或肝癌。总的来说，肝癌虽然每年在中国人的发病率不到十万分之二十，但许多病人在有症状时已是晚期，失去了切除的时机，这样中位生存率不到半年。少数患者切除了肝脏的癌组织后其5年生存率约40％。
[0004]HBV基因组含3200个碱基，包含4个开放读码框(ORF)均位于负链，分别为S区、C区、P区、X区。S区又分为前S1、前S2及S三个编码区，分别编码包膜上的前S1蛋白、前S2蛋白及HBsAg。前S蛋白有很强的免疫原性，HBV的嗜肝性主要由前S蛋白与肝细胞受体之间的识别和介导的。C区又分为前C基因和C基因，编码HBeAg和HBcAg。从前C基因开始编码的蛋白质经加工后分泌到细胞外即为HBeAg；从C基因开始编码的蛋白质为HBcAg。P区是最长的读码框架，编码一个大分子碱性多肽，分子量约为90KD，含有多种功能蛋白。X基因编码X蛋白，即HBxAg。HBxAg具有反式激活作用，可激活HBV本身的、其他病毒的或细胞的多种调控基因，促进HBV的复制。
[0005]为了寻找个体化针对HBV的抗原肽，需要对HBV表达出来的蛋白和多肽进行抗原性预测，将潜在的抗原肽进行体外合成，最后使用高浓度和高强度的肿瘤疫苗激活免疫细胞。科学家长期以来立足于免疫学的基础研究，其中关于T细胞抗原识别的研究已经取得了长足的进展。研究发现在肿瘤中的某些变异蛋白在经过降解后形成的多肽(也被称为抗原表位)可以被主要组织相容性复合体(MHC)分子特异识别并形成MHC
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抗原肽复合体，继而复合体被呈递到细胞的表面并被T细胞识别为非己成分，使得T细胞活化成效应T细胞而对肿瘤细胞进行攻击和清除。其中最为关键的步骤就是MHC分子与多肽分子的结合。人体内的MHC分子又称为人类白细胞抗原(HLA)，主要分为MHC I类分子和MHC II类分子，前者由大多数的细胞表达，主要参与内源抗原的递呈；而后者主要由抗原递呈细胞表达，主要参与外源抗原的递呈。其中人的基因组中存在三个编码MHC I(HLA
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A、HLA
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B和HLA
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C)和三个MHC II的基因(HLA
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DR、HLA
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DQ、HLA
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DP)，这些基因的变异非常大，目前已经发现有数万种不一样的基因型，被称为HLA单倍型，每种单倍型均被国际统计命名。不同的单倍型一般对同一多肽
有不同的亲和力，也就是识别其作为抗原的能力，亲和力越强则识别能力越强。由于主要组织相容性复合体I类分子识别的抗原肽相对较短，因此对主要组织相容性复合体
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抗原肽复合体的相关研究和分析也更为充分。截止目前为止，相关领域的科学家已经构建了多个抗原表位数据库，并开发了多个针对主要组织相容性复合体I类分子基于个体化HLA单倍型的抗原表位预测相关软件(如NetMHCpan4.0、netmhcpan
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ba、netmhcpan
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el、mhcflurry、ann、smm或comblib)。被越多的不同软件同时预测为抗原肽，其抗原的准确性越高。基于目前的研究和分析手段，已经可以针对不同的个体化靶点进行预测和设计针对性的抗原肽用于个体化治疗。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种针对乙型肝炎病毒的抗原肽及其应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0008]本专利技术的第一方面是提供一种针对乙型肝炎病毒的抗原肽，基于乙型肝炎病毒编码蛋白的氨基酸序列，结合不同主要组织相容性复合体I类分子中的人类白细胞抗原单倍型，使用生物信息预测方法，合成抗原肽，所述抗原肽包括如下表所示氨基酸序列中的至少一种。
[0009][0010][0011][0012][0013][0014]优选地，所述乙型肝炎病毒编码蛋白包括：HBV_env、HBV_polymerase、HBV_C或HBV_X中的至少一种。
[0015]优选地，所述人类白细胞抗原分型包括：HLA
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A*02:01、HLA
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A*02:03、HLA
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A*02:06、HLA
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A*03:01、HLA
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A*11:01、HLA
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A*24:02、HLA
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A*30:01、HLA
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A*31:01、HLA
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A*32:01、HLA
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A*68:01、HLA
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B*07:02、HLA
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B*40:01、HLA
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B*40:02、HLA
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B*54:01、HLA
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B*58:01、HLA
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C*12:03、HLA
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C*14:02或HLA
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C*15:02中的至少一种。
[0016]本专利技术的第二方面是提供一种如上所述的抗原肽在制备乙型肝炎病毒感染的肝癌的免疫治疗药物中的应用。
[0017]优选地，所述免疫治疗药物包括：抗原肽细胞治疗药物或疫苗中的至少一种。
[0018]本专利技术采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
[0019]本专利技术的抗原肽已在人体实验中利用免疫实验验证了其个体化的有效性，从而弥补了个体化抗原肽在肝癌治疗中的空白；本专利技术的抗原肽能够显著激活人体特异性针对HBV的T细胞，增加T细胞对HBV感染的肝癌细胞的杀伤能力，大规模的合成可用于标准化个体化的HBV相关肝癌免疫治疗之中。
附图说明
[0020]图1为使用树突状细胞负载抗原肽6和抗原肽115，刺激活化T细胞后，通过IFN
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γELISPOT测定分析来自肝癌患者1的T细胞对抗原肽6和抗原肽115的体外反应性；阳性对照：
植物凝集素PHA；阴性对照：不加肽。
[0021]图2为使用树突状细胞负载抗原肽6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对乙型肝炎病毒的抗原肽，其特征在于，基于乙型肝炎病毒编码蛋白的氨基酸序列，结合不同主要组织相容性复合体I类分子中的人类白细胞抗原单倍型，使用生物信息预测方法，合成抗原肽，所述抗原肽包括：如SEQ ID NO:1
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124所示氨基酸序列中的至少一种。2.根据权利要求1所述的抗原肽，其特征在于，所述乙型肝炎病毒编码蛋白包括：HBV_env、HBV_polymerase、HBV_C或HBV_X中的至少一种。3.根据权利要求1所述的抗原肽，其特征在于，所述人类白细胞抗原分型包括：HLA
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A*02:01、HLA
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A*02:03、HLA
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A*02:06、HLA
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A*03:01、HLA
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A*11:01、HLA
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A*24:02、HLA
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【专利技术属性】
技术研发人员：许恒，杨莉，舒洋，魏于全，丁振宇，
申请(专利权)人：成都朗谷生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：