一种阿巴帕肽的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种阿巴帕肽的纯化方法。包括如下步骤：(1)以醋酸盐缓冲液为流动相A1，以乙腈为流动相B对阿巴帕肽粗肽溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分；(2)将步骤(1)收集的洗脱组分转盐：以醋酸溶液为流动相A2，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，收集洗脱组分得到醋酸阿巴帕肽。本发明专利技术通过一步纯化加一步转盐即可得到纯度≥99.0％，单杂≤0.10％的合格馏分，将单个杂质控制0.10％以内，且TFA未检出。避免多次纯化而导致有机溶剂消耗量过大，减少纯化的步骤及废液的排放，整个过程操作简单，生产周期短，环境友好，有利于大规模工业化生产。有利于大规模工业化生产。有利于大规模工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种阿巴帕肽的纯化方法


[0001]本专利技术涉及多肽纯化
，尤其涉及一种阿巴帕肽的纯化方法。

技术介绍

[0002]阿巴帕肽(Abaloparatide)，是由Radius Health公司研制的一种新型甲状旁腺激素相关肽(PTHrP)，它是PTH
‑
I受体强有力的选择性激活剂，可以增加骨矿物质含量、骨密度以及骨强度，促进骨骼形成，已于2017年4月28日被FDA批准上市，其商品名称为Tymlos。阿巴帕肽经皮下注射，用于治疗处于骨折风险或对其它治疗药物无效的绝经后妇女的骨质疏松症，可有效降低新发椎体和非椎体骨折率。甲状旁腺激素(PTH)是一种由甲状旁腺主细胞分泌的，调节体内钙和磷代谢的多肽类激素，其C端肽链与PTH
‑
II受体结合可促进骨细胞凋亡、N端肽链与PTH
‑
I受体结合可促进骨骼重建。阿巴帕肽由34个氨基酸残基组成，分子式为C
174
H
300
N
56
O
49
，分子量3960，肽链中含有4个Lys和三个Arg，等电点为9.98，极易结合大量的酸根。其肽链序列如下：
[0003]Ala1‑
Val2‑
Ser3‑
Glu4‑
His5‑
Gln6‑
Leu7‑
Leu8‑
His9‑
Asp
10
‑
Lys
11
‑
Gly
12
‑
Lys
13
‑
Ser
14
‑
Ile
15
‑
Gln
16
‑
Asp
17
‑
Leu
18
‑
Arg
19
‑
Arg
20
‑
Arg
21
‑
Glu
22
‑
Leu
23
‑
Leu
24
‑
Glu
25
‑
Lys
26
‑
Leu
27
‑
Leu
28
‑
Aib
29
‑
Lys
30
‑
Leu
31
‑
His
32
‑
Thr
33
‑
Ala
34
‑
NH2。
[0004]原研及个参考文献均采用固相合成的方式合成阿巴帕肽，合成过程中会产生大量的杂质，比如氨基酸消旋、氨基酸插入、氨基酸缺失等，现有的纯化方法无法将纯度提高，也无法将单杂降低至0.1％以下，且收率较低，制备成本高。
[0005]如专利CN 112724241 A1中公开了一种阿巴帕肽的纯化方法。包括以下步骤：步骤一：取阿巴帕肽粗肽进行预处理使其溶于乙腈水溶液中，获得粗肽溶液；步骤二：取所述粗肽溶液，以A1、A2溶液与B溶液的混合溶液进行等度、梯度洗脱，收集洗脱组分，得第一次纯化物；步骤三：取所述第一次纯化物，以A3与B溶液的混合溶液进行转盐等度洗脱，收集洗脱组分,得最终纯化物；步骤四：取最终纯化物经减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，得到阿巴帕肽成品；所述A1溶液为10％醋酸水溶液；所述A2溶液为0.1％的TFA的水溶液；所述A3溶液为纯水；所述B溶液为100％乙腈。由于肽链的等电点为9.98，极易集合大量的酸根，所以再使用含有强酸的流动相纯化之后进行转盐，需要用醋酸盐(醋酸铵、醋酸钠或醋酸钾等)缓冲液置换以除去这些酸根。而该专利的公开文件中并没有相应的操作步骤，结果必然导致TFA残留严重。

技术实现思路

[0006]针对上述
技术介绍
中，阿巴帕肽纯化效果不理想，消旋杂质及氨基酸插入的杂质控制不力，且TFA残留严重等问题，本专利技术提供一种阿巴帕肽的纯化方法，能够得到纯度≥99.0％，单杂≤0.10％的醋酸盐样品，氨基酸插入的杂质控制在0.10％以内，TFA未检出，且单次上样量高，生产周期短，废液量少，有利于环保。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0008]本专利技术提供一种阿巴帕肽的纯化方法，包括以下步骤：
[0009](1)以醋酸盐缓冲液为流动相A1，以乙腈为流动相B对阿巴帕肽粗肽溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分；
[0010](2)将步骤(1)收集的洗脱组分转盐：以醋酸溶液为流动相A2，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，收集洗脱组分得到醋酸阿巴帕肽。
[0011]作为优选地实施方式，步骤(1)中，所述流动相B乙腈的起始体积百分比为15％～25％，截至体积百分比为35％～45％，洗脱时间为50～100min。
[0012]作为优选地实施方式，步骤(1)中，所述醋酸盐选自醋酸铵、醋酸钠和醋酸钾中的任意一种或任意混合。
[0013]优选地，步骤(1)中，所述醋酸盐缓冲液的pH值为4.0～8.0。
[0014]在某些具体的实施方式中，所述醋酸盐缓冲液的pH值为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0或它们之间的任意数值的pH。
[0015]在某些具体的实施方式中，所述醋酸盐缓冲液由醋酸与氨水、氢氧化钠或氢氧化钾混合配制而成。
[0016]优选地，步骤(1)中，所述醋酸盐缓冲液中以醋酸根的浓度计为5～500mmol/L；进一步优选为20～200mmol/L。
[0017]在某些具体的实施方式中，所述醋酸盐缓冲液中以醋酸根的浓度计为5mmol/L、50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L、200mmol/L、250mmol/L、300mmol/L、400mmol/L、500mmol/L或它们之间的任意数值的浓度。
[0018]作为优选地实施方式，步骤(1)中，所述对阿巴帕肽粗肽溶液为将阿巴帕肽粗肽溶于乙腈和水的混合溶液；所述乙腈的体积百分比为5％～15％。
[0019]作为优选地实施方式，步骤(2)中，所述流动相B乙腈的起始体积百分比为5％～15％，截止体积百分比为50％～60％，洗脱时间为30～60min。
[0020]作为优选地实施方式，步骤(2)中，所述醋酸溶液的浓度为0.05％～5.0％。
[0021]在某些具体的实施方式中，所述醋酸溶液的浓度为0.05％、0.1％、1.0％、2.0％、3.0％、4.0％、5.0％或它们之间任意数值的浓度。
[0022]作为优选地实施方式，步骤(2)中，所述梯度洗脱前还包括冲洗，所述冲洗为以所述流动相A2和流动相B进行冲洗。
[0023]优选地，所述冲洗时间为10～30min。
[0024]在某些具体的实施方式中，所述冲洗前，需将步骤(1)得到的洗脱组分进行稀释；所述稀释为用水进行稀释，具体为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阿巴帕肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以醋酸盐缓冲液为流动相A1，以乙腈为流动相B对阿巴帕肽粗肽溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分；(2)将步骤(1)收集的洗脱组分转盐：以醋酸溶液为流动相A2，以乙腈为流动相B进行梯度洗脱，收集洗脱组分得到醋酸阿巴帕肽。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述流动相B乙腈的起始体积百分比为15％～25％，截至体积百分比为35％～45％，洗脱时间为50～100min。3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述醋酸盐选自醋酸铵、醋酸钠和醋酸钾中的任意一种或任意混合；优选地，步骤(1)中，所述醋酸盐缓冲液的pH值为4.0～8.0；优选地，步骤(1)中，所述醋酸盐缓冲液中以醋酸根的浓度计为5～500mmol/L；进一步优选为20～200mmol/L。4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中，所述对阿巴帕肽粗肽溶液为将阿巴帕肽粗肽溶于乙腈和水的混合溶液；所述乙腈的体积百分比为5％～15％。5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，步骤(2)中，所述流动相B乙腈的起始体积百分比为5％～15％，截至体积百分比为50％～60％，洗脱时间为30～60min。6.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜绪邦，汪伟，尹传龙，唐洋明，余品香，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：