免疫球蛋白纯化肽及其用途制造技术

本发明专利技术提供了合成肽，其包含SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫球蛋白纯化肽及其用途
[0001]政府支持声明本专利技术在由美国国家科学基金会(National Science Foundation)授予的资助号1830272下，由政府支持完成。政府在本专利技术中拥有一定的权利。


[0002]本专利技术涉及具有SEQ ID NO:1
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17中任何一个的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:1
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17中任何一个的氨基酸序列具有至少80%序列同一性的氨基酸序列的合成肽，及其使用方法。

技术介绍

[0003]单克隆抗体("mAbs")构成了几种目前治疗策略，包括作为用于癌症和免疫病症的治疗的支柱。治疗性mAb的开发和生产是非常昂贵的。用于目前平台生物制造工艺中的治疗性mAb纯化的技术依赖蛋白A吸附剂在产物捕获步骤期间实现同时纯化和浓缩。由于其对于mAb(最常属于IgG1和IgG4亚类)的高亲和力，基于蛋白A的纯化提供了约2.5
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3.0的宿主细胞蛋白(HCP)的对数去除值(LRV) (Shukla等人2008 Biotechnology Progress 24(3):615
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622)。尽管这些优点，但蛋白A吸附剂仍显示出几个明显的局限性。它们是昂贵的(高达$15,000/升)，在清洁条件或原料蛋白水解酶的存在下具有有限生化稳定性的缺点，洗脱必须在低pH下进行，并且它们不能捕获任何推定的IgG3治疗剂(Hober等人207 J. of Chromatography B:Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences 848:40
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47；Leblebici等人2014 J. of Chromatography B:Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences 962:89
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93)。蛋白A片段和聚集的mAb是高度毒性和免疫原性的，因此必须密切监测其在产物流内的潜在释放。克服与蛋白A介质相关的挑战是生物分离技术中主要的创新驱动力之一。在这个背景下，蛋白质配体的合成替代物已经并且仍然受到彻底审查。
[0004]在制造没有批次间变化性、更少免疫原性和致病性组分、更温和的洗脱条件和更低成本的吸附剂的努力中，已调查了许多合成配体。将离子交换层析(IEC)的离子和电荷相互作用与疏水作用层析(HIC)中发现的对非极性要素的吸引力组合的混合模式配体(MML)，是生产廉价的且已得到广泛调查(Tong等人2016 J. of Chromatography A 1429:258
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264；Holstein等人2012 J. of Chromatography A 1233:152
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155)。几种MML，例如基于三嗪的MAbSorbent A1P和A2P、MEP Hypercel、CaptoAdhere和CaptoMMC已成为商购可得的，并且经常用于MAb精制步骤中。然而，MML缺乏亲和配体如蛋白A的mAb结合亲和力和选择性，并且因此并不适合于捕获。
[0005]本专利技术通过提供合成肽配体，以及任选地在免疫球蛋白和/或其片段的纯化和/或检测中使用其例如作为蛋白A的肽模拟物的方法，克服了本领域的缺点。
和“一种(an)”以及“该/所述”可以意指一个或多个/一种或多种。
[0028]本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如，“如”)的使用仅预期更好地阐明本专利技术，并不对本专利技术的范围构成限制，除非另有声明。
[0029]当用于描述两个或更多个项目或条件时，术语“和/或”指其中所有指定项目或条件都存在或适用的情况，或者其中仅一个(或少于所有)项目或条件存在或适用的情况。同样如本文使用的，“和/或”指的是并且涵盖一个或多个相关列出的项目的任何和所有可能的组合，以及当以替代方案(“或”)解释时组合的缺乏。
[0030]此外，如本文使用的，当指可测量的值例如多肽序列的长度、剂量、时间、温度等等的量时，术语“约”意欲涵盖指定量的
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20%、
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10%、
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5%、
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1%、
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0.5%或甚至
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0.1%的变化。
[0031]如本文使用的，与“包括”、“含有”和“特征在于”同义的术语“包含”是包含性或开放式的，并不排除另外的、未列举的要素和/或方法步骤。“包含”是本领域的术语，其意指存在指定的要素和/或步骤，但可以添加其它要素和/或步骤，并且仍落入相关主题的范围内。
[0032]如本文使用的，短语“由
……
组成”排除权利要求中未指定的任何要素、步骤或成分。当短语“由
……
组成”出现在权利要求主体的条款中，而不是紧跟在前序之后时，它仅限制该条款中阐述的要素；其它要素并未从整个权利要求中排除。
[0033]如本文使用的，短语“基本上由
……
组成”将权利要求的范围限制为指定的材料或步骤，加上实质上并不影响请求保护的主题的基本和新颖特性的材料或步骤。
[0034]就术语“包含”、“基本上由
……
组成”和“由
……
组成”而言，当这三个术语之一在本文中使用时，当前公开的主题可以包括任何其它术语的使用。
[0035]如本文使用的，“氨基酸”或“残基”定义为包含氨基、羧基和侧链官能团(R)的分子。当这些R基团附加到“残基”上的主链碳时，它被称为肽，而R基团附着到酰胺氮是类肽。连同沿着聚酰胺链(即肽和类肽)的R基团的位置一起，典型肽主链的另一种变化是在α碳和酰胺氮之间添加一个或多个亚甲基单元。这些添加的碳，称为β
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碳(一个另外的亚甲基单元)、γ
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碳(两个另外的亚甲基单元)或另外的(δ等)碳也被视为“氨基酸”或“残基”。这些残基的实例可见于表1A
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1C中。
[0036]表1A. 肽和类肽残基。类型α肽
类肽
[0037]表1B. 肽和类肽残基。类型β肽类肽
[0038]表1C. 肽和类肽残基。类型γ肽类肽
[0039]如本文使用的，“天然氨基酸”或“蛋白质氨基酸”或“天然残基”或“蛋白质残基”或“规范氨基酸”或“规范残基”定义为下述氨基酸之一：丙氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨
酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸和酪氨酸。
[0040]如本文使用的，“非天然氨基酸”或“非蛋白质氨基酸”或“非天然残基”或“非蛋白质残基”或“非规范氨基酸”或“非规范残基”定义为其侧链官能团(R)不同于天然氨基酸特征的氨基酸。
[0041]如本文使用的，非蛋白质或非天然或非规范官能团(R)可以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1. 一种合成肽，其包含SEQ ID NO:1
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17中任何一个的氨基酸序列，或者与SEQ ID NO:1
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17中任何一个的氨基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的氨基酸序列。2. 权利要求1的肽，其中如通过HCP特异性定量测定法测量的，所述肽具有或被配置为提供至少2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5或更大的宿主细胞蛋白(HCP)对数去除值(LRV)，任选地其中所述肽具有或被配置为提供至少2.5的HCP LRV。3. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。4. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。5. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。6. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。7. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。8. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。9. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。10. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。11. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。12. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。13. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。14. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。15. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。16. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。
17. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。18. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。19. 权利要求1或2的肽，其中所述肽包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，任选地其中所述肽进一步包含连接氨基酸残基(例如，半胱氨酸残基或赖氨酸残基)作为C末端氨基酸残基。20.权利要求1
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19中任一项的肽，...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：北卡罗莱纳州立大学，
类型：发明
国别省市：