H因子抗体在制备检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的试剂盒中的用途制造技术

本发明专利技术提供了H因子抗体在制备检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的试剂盒中的用途。本发明专利技术将H因子单克隆抗体或H因子单克隆抗体和多克隆抗体包被，胶体金结合多克隆抗体，可提高试剂盒的灵敏度，也可和多克隆抗体联合使用，应用在免疫比浊法（免疫透射比浊法、免疫散射比浊法、免疫胶乳比浊法）、ELISA法、化学发光法、微流控芯片法、磁微粒法、胶体金渗滤法及层析法上。本发明专利技术还提供一种试剂盒，采用H因子抗原

【技术实现步骤摘要】
H因子抗体在制备检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的试剂盒中的用途


[0001]本专利技术属于生物工程领域，涉及一种试剂盒，特别是采用H因子抗体在制备检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的试剂盒中的用途。

技术介绍

[0002]血清H因子是一种分子量约为150kDa的糖蛋白，主要由肝脏合成分泌，此外，肾脏系膜细胞、足细胞及肾小管上皮细胞、单核细胞等也能合成,正常血清浓度为274mg/L-501mg/L。H因子主要抑制补体旁路途径的过度激活，从而保护宿主细胞免受损伤。此外H因子还可以与凋亡细胞的碎片、DNA、组蛋白等成分相结合来清除凋亡细胞。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供H因子抗体在制备检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的试剂盒中的用途。
[0004]进一步的，所述的试剂盒包括检测板、兔抗H因子抗体、由胶体金标记的羊抗H因子抗体结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品，所述的检测板由一个塑料盒底盒组成，所述的塑料盒底盒中设置有一层吸水层，所述的吸水层上设置有一层硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上面覆盖一层滤网，所述的滤网上设置有一个塑料盒面盖，所述的塑料盒面盖中央设置有一个检测反应孔，在检测反应孔对应的硝酸纤维素膜上点加兔抗H因子抗体和胶体金标记的羊抗H因子抗体结合物，所述的封闭液是含有牛血清白蛋白的磷酸盐溶液，磷酸盐溶液的pH7.0～7.5之间，牛血清白蛋白在磷酸盐溶液中的重量百分比为1.0％，所述的洗涤液是含有Tween-20的Tris-HCl溶液，Tris-HCl溶液的pH在7.0～7.5之间，Tween-20在Tris-HCl溶液中的重量百分比为0.05％，在每毫升胶体金结合物中，羊抗H因子抗体的质量为700毫克，所述的阳性参考品为浓度小于274mg/L的H因子抗原。
[0005]进一步的，采用胶体金渗滤法、层析法或者化学发光法进行检验。
[0006]进一步的，采用ELISA法、免疫比浊法、免疫透射比浊法、免疫散射比浊法或者免疫胶乳增强比浊法进行临床检验常规检测。
[0007]进一步的，采用微流控芯片、磁微粒法进行检测。
[0008]进一步的，所述的兔抗H因子抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体。
[0009]本专利技术还提供了一种检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的试剂盒，采用H因子抗原-抗体结合反应进行检测。
[0010]进一步的，兔抗H因子抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体，提高试剂的灵敏度和准确性，(包含有鼠、兔、羊或者马的单克隆抗体或者多克隆抗体)。
[0011]H因子抗体在制备检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的标记物中的用途。
[0012]本专利技术的检测原理是：H因子抗体和血清中H因子抗原的相结合反应。
[0013]本专利技术将H因子单克隆抗体或H因子单克隆抗体和多克隆抗体包被，胶体金结合多克隆抗体，可提高试剂盒的灵敏度，也可和多克隆抗体联合使用，应用在免疫比浊法(免疫透射比浊法、免疫散射比浊法、免疫胶乳比浊法)、ELISA法、化学发光法、微流控芯片法、磁微粒法、胶体金渗滤法及层析法上。
[0014]本专利技术和已有技术相比，其技术进步是显著的。本专利技术可以用于检测人血清样本中H因子抗原。采用本专利技术的试剂盒1分钟至5分钟内能收到检测报告，检测结果准确而且方便。
具体实施方式
[0015]实施例1.试剂盒的制备方法
[0016]1.1胶体金结合物制备工艺；
[0017]1.1.1制备胶体金；
[0018]1.1.1.10.05％氯化金溶液300毫升，加热至沸；
[0019]1.1.1.2加入5.0％柠檬酸三钠3.6毫升；
[0020]1.1.1.3继续加热煮沸15分钟，停止加热，待冷至室温，用蒸馏水恢复至原体积；
[0021]1.1.2胶体金标记；
[0022]1.1.2.1胶体金100mL；
[0023]1.1.2.2加1.0％无水碳酸钠溶液2.4毫升，校pH值6.4～7.2；
[0024]1.1.2.3加羊抗H因子抗体(1.0mg/mL)2.5毫升，室温静止30分钟；
[0025]1.1.2.4搅拌加入10X Tris-HCl 20毫升调控pH 7.2～7.5；
[0026]1.1.2.5搅拌加入BSA:2克、PEG20000:1克、ProClin-300:0.2毫升；
[0027]1.2检测板制备工艺；
[0028]1.2.1装配检测板，取塑料盒底盖,放置吸水层,在吸水层上放置硝酸纤维素膜，盖上塑料盒面盖，压紧；
[0029]1.2.2检测点抗体：兔抗H因子抗体(或者也可以是羊、马、鼠抗GPI抗体或单克隆抗体)(1.0mg/mL)1.0毫升加入1.0M NaHCO3:0.1毫升，混匀；
[0030]1.2.3取检测点抗体2.0uL，点加在检测板反应孔中心的硝酸纤维素膜上制成检测板；
[0031]1.3配制封闭液及洗涤液；
[0032]1.3.1配制封闭液，1.0％牛血清白蛋白,0.02M pH7.0～7.5磷酸盐溶液；
[0033]1.3.2配制洗涤液，0.05％Tween-20,0.05M pH7.0～7.5Tris-HCl溶液；
[0034]1.4正常参考范围确定，以H因子抗原测定试剂盒的正常参考范围H因子抗原含量274mg/L—508mg/L为依据，由于本法为定性检测，样品H因子抗原含量在正常参考范围内检测点不显色，故选择以H因子抗原含量约274mg/L的样品做灵敏度检测；
[0035]1.4.1实验方法：
[0036]1、使用前先将试剂和样品取出，在室温中放置15～30分钟，使其恢复至室温；
[0037]2、取出检测板；
[0038]3、在检测板反应孔中心加入封闭液2滴，待封闭液完全渗入；
[0039]4、用移液器在检测板反应孔中心加入待测样品40微升，待样品完全渗入；
[0040]5、在检测板反应孔中心加入洗涤液4滴，待洗涤液完全渗入；
[0041]6、在检测板反应孔中心加入胶体金结合物3滴，待胶体金结合物完全渗入；
[0042]7、在检测板反应孔中心加入洗涤液4滴，待洗涤液完全渗入，目测结果；
[0043]【检验结果判读】
[0044]使用者在进行样品检测时，可能会出现如下情况：
[0045]a.检测板反应孔中心检测点有红色斑点，为阳性结果；
[0046]b.检测板反应孔中心检测点无红色斑点，为阴性结果。
[0047]【参考值(参考范围)】
[0048]以H因子抗原测定试剂盒的正常参考范围H因子抗原含量274mg/L—508mg/L为依据，样品H因子抗原含量在正常参考范围内检测板反应孔中心检测点无红色斑点，显示阴性
[0049]结果；
[0050]正常参考范围：显示阴性结果(提示H因子抗原含量274本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.H因子抗体在制备检测血液透析、腹膜透析、腹膜炎或者胶质瘤的试剂盒中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的试剂盒包括检测板、兔抗H因子抗体、由胶体金标记的羊抗H因子抗体结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品，所述的检测板由一个塑料盒底盒组成，所述的塑料盒底盒中设置有一层吸水层，所述的吸水层上设置有一层硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上面覆盖一层滤网，所述的滤网上设置有一个塑料盒面盖，所述的塑料盒面盖中央设置有一个检测反应孔，在检测反应孔对应的硝酸纤维素膜上点加兔抗H因子抗体和胶体金标记的羊抗H因子抗体结合物，所述的封闭液是含有牛血清白蛋白的磷酸盐溶液，磷酸盐溶液的pH7.0～7.5 之间，牛血清白蛋白在磷酸盐溶液中的重量百分比为1.0%，所述的洗涤液是含有Tween-20 的Tris-HCl 溶液，Tris-HCl 溶液的pH 在7.0～7.5 之间，Tween-20 在Tris-HCl 溶液中的重量百分...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱梅珍，刘颖冰，
申请(专利权)人：上海怡珏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：