一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及药物化学领域，特别是涉及一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸。本发明专利技术提供一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有氯法拉滨亚磷酰胺单体基团。本发明专利技术将核苷药物氯法拉滨和/或吉西他滨设计合成为可用于固相合成的亚磷酰胺单体，使用固相合成技术实现氯法拉滨和/或吉西他滨对寡聚核苷酸上的定点精准功能化，制备获得的氯法拉滨和/或吉西他滨修饰的寡聚核苷酸可以在核酸酶的作用下释放氯法拉滨，对肿瘤细胞仍具有较高的细胞毒性，保留了氯法拉滨和/或吉西他滨的药物活性，具有良好的产业化前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸


[0001]本专利技术涉及药物化学领域，特别是涉及一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸。

技术介绍

[0002]氯法拉滨是一种嘌呤核苷抗代谢药，与其他嘌呤核苷类似物不同的是氯法拉滨的嘌呤环中存在氯，核糖部分中存在氟。氯法拉滨通过干扰核酸的合成来阻止细胞产生DNA和RNA，从而阻止癌细胞的生长。氯法拉滨通过脱氧胞苷激酶在细胞内代谢为活性5'-单磷酸代谢物，并通过单和二磷酸激酶代谢为5'-三磷酸代谢物。从而达到对核糖核苷酸还原酶的抑制作用，以及终止DNA链的延伸并通过竞争性抑制DNA聚合酶来抑制修复，进而抑制了DNA的合成。在临床前模型中，氯法拉滨已显示出通过在修复过程中掺入DNA链来抑制DNA修复的能力。氯法拉滨5'-三磷酸酯还破坏线粒体膜的完整性，导致促凋亡线粒体蛋白，细胞色素C和凋亡诱导因子的释放，导致程序性细胞死亡。目前，氯法拉滨已在全球多个国家被批准用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的临床治疗。
[0003]寡聚核苷酸是短的单链或双链DNA或RNA分子，在分子生物学中正发挥着越来越重要的作用，其可以用于核酸序列检测的探针、单碱基多样性分析、反义寡聚核苷酸等，是一种非常有效的研究工具。通过对寡聚核苷酸进行功能化修饰，可以赋予寡聚核苷酸新的功能，拓宽寡聚核苷酸的应用范围。

技术实现思路

[0004]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，用于解决现有技术中的问题。
[0005]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有氯法拉滨亚磷酰胺单体基团。
[0006]在本专利技术一些实施方式中，所述核酸适配体片段修饰有一个或多个氯法拉滨亚磷酰胺单体基团，所述氯法拉滨亚磷酰胺单体基团修饰于核酸适配体片段的5
’
端和/或修饰于核酸适配体片段的3
’
端和/或添加于核酸适配体片段的中间。
[0007]在本专利技术一些实施方式中，所述氯法拉滨亚磷酰胺单体基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二脂键连接。
[0008]在本专利技术一些实施方式中，修饰于核酸适配体片段的5
’
端的氯法拉滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0009][0010]添加于核酸适配体片段的中间的氯法拉滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0011][0012]修饰于核酸适配体片段的3
’
端的氯法拉滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0013][0014]在本专利技术一些实施方式中，所述核酸适配体片段还修饰有吉西他滨亚磷酰胺单体基团。
[0015]在本专利技术一些实施方式中，所述核酸适配体片段修饰有一个或多个吉西他滨亚磷酰胺单体基团，所述吉西他滨亚磷酰胺单体基团修饰于核酸适配体片段的5
’
端和/或修饰于核酸适配体片段的3
’
端和/或添加于核酸适配体片段的中间。
[0016]在本专利技术一些实施方式中，所述吉西他滨亚磷酰胺单体基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二脂键连接。
[0017]在本专利技术一些实施方式中，修饰于核酸适配体片段的5
’
端的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0018][0019]添加于核酸适配体片段的中间的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0020][0021]修饰于核酸适配体片段的3
’
端的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0022][0023]在本专利技术一些实施方式中，所述核酸适配体片段的多核苷酸序列包括如SEQ ID NO.11～20其中之一所示的序列。
[0024]在本专利技术一些实施方式中，所述氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸的多核苷酸序列包括如SEQ ID NO.1～10其中之一所示的序列。
[0025]本专利技术另一方面提供上述的氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸的制备方法，包括：
[0026]将氯法拉滨亚磷酰胺单体通过固相合成法与核酸适配体片段连接。
[0027]在本专利技术一些实施方式中，固相合成法的反应温度为15～35℃，反应时间为1～20分钟，空气湿度为30％～70％。
[0028]在本专利技术一些实施方式中，所述氯法拉滨亚磷酰胺单体的化学结构式如下所示：
[0029][0030]在本专利技术一些实施方式中，所述吉西他滨亚磷酰胺单体的化学结构式如下所示：
[0031][0032]本专利技术另一方面提供所述的氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸在制备药物中的用途。
附图说明
[0033]图1显示为本专利技术实施例3中氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸质谱鉴定结果示意图。
[0034]图2显示为本专利技术实施例3中氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸质谱鉴定结果示意图。
[0035]图3显示为本专利技术实施例3中氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸质谱鉴定结果示意图。
[0036]图4显示为本专利技术实施例4中吉西他滨和氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸对于癌细胞抑制实验结果示意图。
[0037]图5显示为本专利技术实施例5中氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸对于癌细胞特异性结合实验结果示意图。
具体实施方式
[0038]为了使本专利技术的专利技术目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容容易地了解本申请专利技术的其他优点及功效。
[0039]本专利技术专利技术人经过大量实践研究后意外地发现，修饰有氯法拉滨的寡聚核苷酸不仅可以保持氯法拉滨原有的药物活性，还可以增加药物的靶向性、减少毒副作用并提高生物利用度，在此基础上完成了本专利技术。
[0040]本专利技术第一方面提供一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有氯法拉滨亚磷酰胺单体基团。氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸通常可以由氯法拉滨亚磷酰胺单体通过固相合成法制备获得，制备获得的氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸可以包括由氯法拉滨亚磷酰胺单体所对应形成的氯法拉滨亚磷酰胺单体基团、以及与氯法拉滨亚磷酰胺单体基团连接的核酸适配体片段。
[0041]本专利技术所提供的氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸中，可以包括氯法拉滨亚磷酰胺单体基团。氯法拉滨亚磷酰胺单体基团的具体结构通常与所使用的氯法拉滨亚磷酰胺单体是相对应的。在本专利技术一具体实施例中，所使用的氯法拉滨亚磷酰胺单体的化学结构式如下所示：
[0042][0043]本专利技术所提供的氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸中，氯法拉滨亚磷酰胺单体基团可以修饰于核酸适配体片段的各个位置，例如，氯法拉滨亚磷酰胺单体基团可以修饰于核酸适配体片段的5
’
端，也可以修饰于核酸适配体片段的3
’
端，也可以添加于核酸适配体片段的中间。核酸适配体片段可以修饰有一个或多个氯法拉滨亚磷酰胺单体基团，例如，含60个碱基的寡聚核苷酸序列可以修饰有1-11个、1个、2个、3个、4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有氯法拉滨亚磷酰胺单体基团。2.如权利要求1所述的一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，其特征在于，所述核酸适配体片段修饰有一个或多个氯法拉滨亚磷酰胺单体基团，所述氯法拉滨亚磷酰胺单体基团修饰于核酸适配体片段的5
’
端和/或修饰于核酸适配体片段的3
’
端和/或添加于核酸适配体片段的中间。3.如权利要求2所述的一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，其特征在于，所述氯法拉滨亚磷酰胺单体基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二脂键连接；和/或，修饰于核酸适配体片段的5
’
端的氯法拉滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：添加于核酸适配体片段的中间的氯法拉滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：修饰于核酸适配体片段的3
’
端的氯法拉滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：4.如权利要求1所述的一种氯法拉滨修饰的寡聚核苷酸，其特征在于，所述核酸适配体片段还修饰有吉西他滨亚磷酰胺单体基团。5.如权利要求4所述的一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，其特征在于，所述核酸适配体片段修饰有一个或多个吉西他滨亚磷酰胺单体基团，所述吉西他滨亚磷酰胺单体基团修饰于核酸适配体片段的5
’
端和/或修饰于核酸适配体片段的3
’
端和/或添加于核酸适配体...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚泓，王雪强，何嘉轩，彭天欢，司马颖钰，符婷，
申请(专利权)人：湖南大学，
类型：发明
国别省市：