一种蜡样芽胞杆菌噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及芽胞杆菌技术领域，具体公开了一种噬菌体及其应用，本发明专利技术的噬菌体为蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)，所述蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)已于2020年9月18日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 61196

【技术实现步骤摘要】
一种蜡样芽胞杆菌噬菌体及其应用


[0001]本专利技术涉及芽胞杆菌
，尤其是涉及一种蜡样芽胞杆菌噬菌体及其应用。

技术介绍

[0002]蜡样芽胞杆菌是一种产芽胞的革兰氏阳性条件致病菌，广泛分布于环境中。作为最重要的食源性致病菌之一，蜡样芽胞杆菌已被发现存在于各类食品中，如米、面等主食，以及奶与奶制品、蔬菜、水产品和速冻食品等。蜡样芽胞杆菌产生的芽胞是高度耐热的休眠体，能够耐受普通的食品加工温度，因此加剧了蜡样芽胞杆菌的传播和污染风险。在世界各地，每年都有大量因蜡样芽胞杆菌污染导致的食品中毒事件的爆发。蜡样芽胞杆菌也是我国常见食源性致病菌，在我国致病菌导致的食物中毒事件排名中位列第三，危害严重。食源性蜡样芽胞杆菌的常见感染症状为腹泻和呕吐，主要由能够产生腹泻型毒素和呕吐型毒素的蜡样芽胞杆菌所导致。腹泻型毒素包括溶血性肠毒素(HBL)、非溶血性肠毒素(NHE)、肠毒素FM(EntFM)和细胞毒素K(CytK)，会引起腹泻、腹痛或其他类型的皮肤感染。而致呕型蜡样芽胞杆菌分泌的呕吐毒素在具有高毒力的同时也具有高度的耐热性和耐酸性，使其难以在食品加工过程中失活，从而引起急性呕吐等症状。此外，部分蜡样芽胞杆菌还可能携带炭疽毒素，造成类似炭疽芽胞杆菌感染等更为严重的潜在风险。目前应对蜡样芽胞杆菌污染的有效方法还是抗生素治疗，但由于蜡样芽胞杆菌基因组已可编码β内酰胺酶，能够天然耐受大多数β内酰胺类抗生素。此外，由于抗生素的滥用，能够抵抗多种抗生素的多重耐药菌已经出现，使得抗生素治疗在应对耐药性蜡样芽胞杆菌感染时无法取得满意的治疗效果，甚至完全失效。因此，寻求其他更为合理的治疗方法变得迫在眉睫。
[0003]相比于抗生素疗法，噬菌体对细菌的杀灭效果具有高度特异性，减小了治疗过程对其他微生物的影响，有利于维持机体微生态环境的平衡。同时噬菌体能够与宿主细菌共同进化，有助于应对细菌产生的抗性问题。此外，通过组合不同类型和宿主范围的噬菌体，可以配制噬菌体组合剂(或噬菌体鸡尾酒)，扩大噬菌体的应用范围，或将噬菌体与抗生素联用，提高治疗效果。由于多重耐药性蜡样芽胞杆菌的出现和快速发展，作为抗生素的替代疗法之一，噬菌体治疗越来越受到广泛关注。目前能够特异性裂解多重耐药性蜡样芽胞杆菌的噬菌体仍较为有限。同时，蜡样芽胞杆菌丰富的遗传多样性也使得单独一种或几种特异性噬菌体无法满足杀灭蜡样芽胞杆菌的需求。
[0004]因此，亟需一种特异性强、稳定性高的蜡样芽胞杆菌噬菌体及包含该蜡样芽胞杆菌噬菌体的抑菌制剂和噬菌体组合物。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种蜡样芽胞杆菌噬菌体及其应用，本专利技术的噬菌体对携带多重毒力基因和多重耐药性的蜡样芽胞杆菌具有特异性裂解效果，同时具有良好的热稳定性、pH稳定性、离子浓度和有机溶剂耐受性，可作为单一抑菌制剂或噬菌体组合剂成分用于抑制食品与临床中蜡样芽胞杆菌的生长。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0007]本专利技术的第一目的提供了一种噬菌体，将噬菌体命名为蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)DLc1，所述蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereusbacteriophage)DLc1已于2020年9月18日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：中国广州市先烈中路100号广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC61196-B1。
[0008]本专利技术人从广东省广州市荔湾区黄沙水产市场采集的污水水样中经过大量研究及试验分离得到蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)DLc1，本专利技术的噬菌体属于短尾噬菌体科烈性噬菌体，不携带毒力因子和抗生素耐药基因，具有较佳的生物安全性；本专利技术的噬菌体在不同温度、pH、盐离子浓度和有机溶剂中都具有较高的稳定性，有利于实际应用中的加工处理；本专利技术的噬菌体能够有效裂解携带多种毒力因子和耐药性的蜡样芽胞杆菌分离菌株，且具有较窄的宿主范围，能够特异性裂解分子型别为ST4的蜡样芽胞杆菌。
[0009]经过基因组相似性比对，发现本专利技术的噬菌体与现有的噬菌体的相似性比较低(<50％)，扩大了针对蜡样芽胞杆菌的噬菌体库的范围。
[0010]本专利技术的第二目的提供了上述噬菌体在裂解蜡样芽胞杆菌中的应用。
[0011]本专利技术的第三目的提供了上述噬菌体在制备抑菌制剂中的应用。
[0012]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述抑菌制剂为蜡样芽胞杆菌抑菌制剂。
[0013]本专利技术的第四目的提供了一种抑菌制剂，所述抑菌制剂包括上述的蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)，所述蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacilluscereus bacteriophage)保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC61196-B1，本专利技术的抑菌制剂还可以包括蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereusbacteriophage)与其他病原菌噬菌体的组合，例如其他病原菌噬菌体可以为大肠杆菌噬菌体或铜绿假单胞菌噬菌体等。
[0014]本专利技术的第五目的提供了一种噬菌体组合物，包括上述蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)。
[0015]本专利技术的第六目的提供了上述噬菌体组合物在裂解蜡样芽胞杆菌中的应用。
[0016]本专利技术的第七目的提供了上述噬菌体组合物在制备抑菌制剂中的应用。
[0017]在本专利技术的技术方案中，本专利技术人首次分离得到蜡样芽胞杆菌噬菌体 (Bacillus cereus bacteriophage)DLc1，通过电镜观察，发现本专利技术的蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)DLc1的头部长度约为64.2nm，头部宽度约为33.1nm，尾部长度约为37.6nm，尾部宽度约为3.8nm；蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)DLc1在温度范围为4～55℃、pH范围为5～11、盐离子浓度50～1000mM以及≤75％乙醇溶液和氯仿中都能保持稳定的效价，因此，蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)DLc1具有较高的稳定性，并且蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)DLc1能够有效裂解携带多重毒力因子和多重耐药性的ST4型蜡样芽胞杆菌，特异性佳。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0019]本专利技术首次分离得到蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage) DLc1，该噬菌体对携带多重毒力基因和多重耐药性的蜡样芽胞杆菌具有特异性裂解效果，
同时具有良好的热稳定性、pH稳定性、离子浓度和有机溶剂耐受性，可作为单一抑菌制剂或噬菌体组合剂成分用于抑制食品与临本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)，所述蜡样芽胞杆菌噬菌体(Bacillus cereus bacteriophage)已于2020年9月18日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 61196-B1。2.如权利要求1所述的噬菌体在裂解蜡样芽胞杆菌中的应用。3.如权利要求1所述的噬菌体在制备抑菌制剂中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抑菌制...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁郁，李淳，王涓，吴清平，袁晓鸣，李娜，韦献虎，杨小鹃，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：