一株马胃葡萄球菌在防治果蔬病害上的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株马胃葡萄球菌在防治果蔬病害上的应用，该菌株被命名为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1，其保藏号为CGMCC No.21658；所述果蔬病害为苹果树腐烂病菌、梨树腐烂病菌、桃褐腐病菌、苹果炭疽叶枯病菌或苹果轮纹病菌。本发明专利技术还提供由菌株F1发酵上清液或菌株F1菌悬液制备的苹果树腐烂病生防菌剂以及诱导果树枝条抗病性的方法。所述马胃葡萄球菌F1对苹果树腐烂病有显著的防治效果，可有效抑制苹果树腐烂病菌的菌丝生长和孢子萌发，也可用于果树腐烂病等病害的提前预防，从而大幅度降低果树发病率和治疗成本。从而大幅度降低果树发病率和治疗成本。从而大幅度降低果树发病率和治疗成本。

【技术实现步骤摘要】
一株马胃葡萄球菌在防治果蔬病害上的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，特别涉及一株马胃葡萄球菌在防治果蔬病害上的应用。

技术介绍

[0002]由黑腐皮壳菌(Vslsa mali)引起的苹果树腐烂病，是对苹果产业威胁最大的一种毁灭性病害，该病可危害苹果树主枝和主干，导致皮层腐烂，造成死枝死树，甚至毁园。2008年，全国范围内调查发现，我国苹果主产区腐烂病的整体发病率为52％，部分地区发病率高达85％以上；2011年，苹果树腐烂病在我国烟台苹果产区再次猖獗发生，造成严重经济损失。自1961年，苹果树腐烂病在我国首次发现以来，该病已经造成了4次大流行，相关研究者指出我国苹果产业正面临腐烂病第5次大流行的威胁。
[0003]目前，生产上尚无腐烂病抗病种植资源可利用，而且外科手术治疗也无法有效控制病害发生。腐烂病菌是典型丝体营养型菌，主要通过剪据口、各种微伤口及表皮死组织等侵染或长期潜伏，依靠化学药剂进行防治很难实现。最近，研究发现腐烂病菌可以在苹果树木质部内快速生长，进行纵向扩展，但不表现明显的外部症状，直至病菌到达皮层组织后才能导致树体发病；由于病菌存在于木质部，通过刮治等外科手术仅能去除皮层的病原菌，而无法去除木质部内菌丝，这也是导致腐烂病病疤重犯的主要原因。
[0004]由于缺乏针对性强、效果好的防治策略和技术，腐烂病一直是我国苹果生产上的重大防治难题。药剂涂干可以有效预防苹果树腐烂病的发生，但药剂持效期不能维持果树的整个生长期，此项措施费时费工，在很多苹果产区的应用受到限制，且化学农药大量使用不符合我国现代农业减肥减药的发展战略。
[0005]采用生防菌剂防治苹果树腐烂病对环境友好，可以避免化学防治带来的一系列问题。但是，目前现有技术中还没有利用马胃葡萄球菌防治苹果树腐烂病的报道。如何解决上述问题，是目前微生物领域需要解决的技术问题。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供一株马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1在果树病害防治上的应用，马胃葡萄球菌F1对多种果蔬病害(如苹果树腐烂病菌、梨树腐烂病菌、桃褐腐病菌、苹果炭疽叶枯病菌以及苹果轮纹病菌)具有高效抑菌效果，抑菌谱较广，可广泛应用于果蔬病害的防治，具有防治效果稳定，对环境友好的优点。
[0007]本专利技术的技术方案具体如下：
[0008]第一方面，本专利技术提供一株马胃葡萄球菌在防治果蔬病害上的应用，其该菌株被命名为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1，其保藏号为CGMCC No.21658；所述果蔬病害为苹果树腐烂病菌、梨树腐烂病菌、桃褐腐病菌、苹果炭疽叶枯病菌或苹果轮纹病菌。
[0009]马胃葡萄球菌F1于2021年1月18日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通
微生物中心，其保藏号为CGMCC No.21658，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0010]第二方面，本专利技术还提供一种利用所述马胃葡萄球菌F1制备的生防菌剂在果蔬病害防治上的应用，所述生防菌剂的活性成分为菌株F1发酵上清液或菌株F1菌悬液。所述果蔬病害包括苹果树腐烂病、梨树腐烂病、桃褐腐病、苹果炭疽叶枯病和苹果轮纹病。
[0011]本专利技术还提供苹果树腐烂病生防菌剂，活性成分为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1的发酵上清液或菌悬液。
[0012]优选地，所述苹果树腐烂病生防菌剂中，马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)菌株F1的浓度为105‑
109cfu
·
mL
‑1。
[0013]进一步优选地，苹果树腐烂病生防菌剂是浓度为109cfu
·
mL
‑1的马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)菌株F1菌悬液。
[0014]本专利技术所提供的苹果树腐烂病生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0015](1)将菌株F1划线接种在PDA培养基中，于28℃恒温活化培养24h，得到活化的菌株F1单菌落a；
[0016](2)将所述活化的菌株F1单菌落a，接种于装瓶量80mL/250mL的PDB培养基中，180r
·
min
‑1，28℃恒温震荡培养48h，得到菌株F1发酵种子液b；
[0017](3)将所述发酵种子液b按1:100的接种量，接种到PDB培养基中扩大培养，28℃恒温震荡培养48h，得到109cfu
·
mL
‑1F1菌株的细胞培养液c；
[0018](4)将109cfu
·
mL
‑1F1菌株的细胞培养液c，在4℃条件下，12000r
·
min
‑1离心15min，收集的上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，得到菌株F1发酵上清液，即为生防菌剂；收集F1菌体沉淀用无菌水重新悬浮，得到109cfu
·
mL
‑1的F1菌悬液，即为生防菌剂。
[0019]第三方面，本专利技术还提供一种诱导果树枝条抗病性的方法，该方法为：向果树枝条表面施用前述的马胃葡萄球菌的菌液。
[0020]优选地，所述诱导果树枝条抗病性的方法中，具体施用方法为：向果树枝条表面进行喷洒或者将涂抹上述的马胃葡萄球菌的菌液。
[0021]优选地，采用的马胃葡萄球菌的菌液的浓度不低于109cfu
·
mL
‑1。
[0022]有益效果：
[0023]1、本专利技术提供的马胃葡萄球菌F1对苹果树腐烂病有显著的防治效果，实施例的研究表明，菌株F1可有效抑制苹果树腐烂病菌的菌丝生长和孢子萌发，对苹果树腐烂病的防效可达65％以上；菌株F1能够诱导苹果组织内多种防御相关酶活性增加，提高果树抗病相关基因表达水平。
[0024]2、本专利技术提供的苹果树腐烂病生防菌剂具有防治效果稳定，对环境友好等特点，适合进行大规模生产，发酵工艺简单，生产成本低廉，具有很好的市场前景。
[0025]3、本专利技术提供的诱导果树枝条抗病性的方法操作简单，成本低，可广泛用于果树腐烂病等病害的提前预防，从而大幅度降低果树发病率和治疗成本。
附图说明
[0026]图1为菌株F1在LB培养基上的菌落形态；
[0027]图2为菌株F1提取DNA的16S rDNA序列PCR扩增示意图；
[0028]其中，图中M为核酸Marker DL2000；图中1为菌株F1基因组DNA的16S rDNA序列扩
增结果；
[0029]图3为菌株F1对苹果树腐烂病菌菌丝生长(a)和孢子萌发(b)的影响；
[0030]其中，图中A为菌株F1对苹果树腐烂病菌的抑制效果；图中B为菌株F1菌体和上清液对腐烂病菌孢子萌发的影响；
[0031]图4为菌株F1上清液对苹果树腐烂病的防治效果；
[0032]其中，图中A为苹果枝条接种PDB培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株马胃葡萄球菌在防治果蔬病害上的应用，其特征在于，该菌株被命名为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1，其保藏号为CGMCC No.21658；所述果蔬病害为苹果树腐烂病菌、梨树腐烂病菌、桃褐腐病菌、苹果炭疽叶枯病菌或苹果轮纹病菌。2.一种苹果树腐烂病生防菌剂，其特征在于，苹果树腐烂病生防菌剂的活性成分为马胃葡萄球菌(Staphylococcus equorum)F1的发酵上清液或菌悬液，其保藏号为CGMCC No.21658。3.根据权利要求2所述的苹果树腐烂病生防菌剂，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩霞，郝柏慧，许宇昕，李世昱，孙子豪，李保华，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：