鼻咽癌相关尿液标志物组合的检测试剂的应用制造技术

本发明专利技术属于医学检验技术领域，具体涉及鼻咽癌相关尿液标志物组合的检测试剂的应用，该应用具体是在制备用于鼻咽癌诊断和/预后的产品中的应用，该标志物组合为Methyl(1

【技术实现步骤摘要】
鼻咽癌相关尿液标志物组合的检测试剂的应用


[0001]本专利技术属于医学检验
，具体涉及鼻咽癌相关尿液标志物组合的检测试剂的应用。

技术介绍

[0002]鼻咽癌的主要发病因素包括遗传易感性，饮食因素和EB病毒(Epstein
‑
Barrvirus,EBV)感染，其发病机制的研究包括基因的突变、代谢组学、蛋白质组学、基因组学等方面。尽管如此，目前仍然难以全面理解鼻咽癌的发生、发展，这给其治疗带来了困难。
[0003]一般来说，鼻咽癌的诊断还是以鼻咽镜检查为主，但是价格贵，而且对人体有伤害；鼻咽癌的进一步确诊依然需要靠组织的病理诊断，但组织的活检具有侵袭性，患者比较痛苦。同时对于隐匿性鼻咽癌或者黏膜下型鼻咽癌有可能需要多次，如此反复的组织活检必然增加患者的经济负担和心理负担，也非常不利于大规模筛查。血浆EBV DNA检测在鼻咽癌早期诊断和筛查，复发和转移诊断，预后判断以及个体化治疗等方面具有较大的价值。据报道，鼻咽癌患者血浆中存在持续阳性的EBV DNA，其拷贝数与肿瘤的分期相关，有效治疗后迅速下降，复发和转移时再次升高。然而EB病毒检测敏感性和特异性均不高。因此，如何寻找到有效的、高效的、特异性、无创性的鼻咽癌肿瘤标志物(Bio
‑
markers)对于提高患者的生存率至关重要。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术基于代谢组学技术，在尿液中筛选出能较好区分正常人对照和早期鼻咽癌的标志物组合，并提供了鼻咽癌相关尿液标志物组合的检测试剂在制备用于鼻咽癌诊断和/预后的产品中的应用，所述标志物组合为Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
‑3‑
carbonyl)
‑
l
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valinate、Stachydrine、Decanoyl
‑
l
‑
carnitine和Octanoylcarnitine，CAS号依次为：1971007
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94
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9、471
‑
87
‑
4、1492
‑
27
‑
9和25243
‑
95
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2。
[0005]进一步的，相对于正常健康人对照，鼻咽癌患者尿液中Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
‑3‑
carbonyl)
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l
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valinate、Stachydrine、Decanoyl
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l
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carnitine和Octanoylcarnitine的组合中，Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
‑3‑
carbonyl)
‑
l
‑
valinate和Stachydrine的量升高，而Decanoyl
‑
l
‑
carnitine和Octanoylcarnitine的量降低。
[0006]更进一步的，利用所述试剂检测所述标志物组合的方法，包括以下步骤：
[0007]1)获得受试者的尿液样本；
[0008]2)尿液样本采用超高效液相色谱系统HILIC色谱柱进行分离；
[0009]3)分离后的尿液样本，用质谱仪进行样本一级、二级谱图的采集，获得Wiff格式的原始数据，原始数据经ProteoWizard转换成.mzXML格式，然后采用XCMS软件进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积，得到受试者的尿液样本中Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
‑3‑
carbonyl)
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l
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valinate、Stachydrine、Decanoyl
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l
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carnitine和Octanoylcarnitine的定量结果。
[0010]更进一步的，步骤1)中，尿液样本在4℃环境下解冻后，取样本加入预冷的体积比为2：2：1的甲醇/乙腈/水溶液，涡旋混合，低温超声30min，
‑
20℃静置10min，14000g，4℃离心20min，取上清真空干燥，质谱分析时加入100μL乙腈水溶液，乙腈和水的体积比为1:1，复溶，涡旋，14000g，4℃离心15min，待用。
[0011]更进一步的，步骤2)中，采用Agilent1290InfinityLC超高效液相色谱系统HILIC色谱柱进行分离；柱温25℃；流速0.5mL/min；进样量2μL；流动相组成A：水+25mM乙酸铵+25mM氨水，B：乙腈；梯度洗脱程序如下：0
‑
0.5min，95％B；0.5
‑
7min，B从95％线性变化至65％；7
‑
8min，B从65％线性变化至40％；8
‑
9min，B维持在40％；9
‑
9.1min，B从40％线性变化至95％；9.1
‑
12min，B维持在95％；整个分析过程中样品置于4℃自动进样器中。
[0012]更进一步的，步骤3)中，采用ABTripleTOF6600质谱仪进行样本一级、二级谱图的采集，得到原始Wiff格式的原始数据；样品经用Agilent1290InfinityLC超高效液相色谱系统分离后，用TripleTOF6600质谱仪进行质谱分析，分别采用电喷雾电离正离子和负离子模式进行检测，ESI源设置参数如下：雾化气辅助加热气1：60，辅助加热气2：60，气帘气：30psi，离子源温度：600℃，喷雾电压
±
5500V；一级质荷比检测范围：60
‑
1000Da，二级子离子质荷比检测范围：25
‑
1000Da，一级质谱扫描累积时间：0.20s/spectra,二级质谱扫描累积时间0.05s/spectra；二级质谱采用数据依赖型采集模式获得，并且采用峰强度值筛选模式，去簇电压：
±
60V，碰撞能量：35
±
15eV，IDA设置如下：动态排除同位素离子范围：4Da，每次扫描采集10个碎片图谱
[0013]本专利技术的有益效果如下：
[0014]本专利技术研究首次发现，相对正常健康人对照，鼻咽癌患者的尿液中Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鼻咽癌相关尿液标志物组合的检测试剂在制备用于鼻咽癌诊断和/预后的产品中的应用，其特征在于，所述标志物组合为Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
‑3‑
carbonyl)
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valinate、Stachydrine、Decanoyl
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carnitine和Octanoylcarnitine，CAS号依次为1971007
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94
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9、471
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87
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4、1492
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27
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9和25243
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95
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2。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，相对于正常健康人对照，鼻咽癌患者的尿液中的Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
‑3‑
carbonyl)
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valinate和Stachydrine的量升高，而Decanoyl
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l
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carnitine和Octanoylcarnitine的量降低。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用所述试剂检测所述标志物组合的方法，包括以下步骤：1)获得受试者的尿液样本；2)尿液样本采用超高效液相色谱系统HILIC色谱柱进行分离；3)分离后的尿液样本，用质谱仪进行样本一级、二级谱图的采集，获得Wiff格式的原始数据，原始数据经ProteoWizard转换成.mzXML格式，然后采用XCMS软件进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积，得到受试者的尿液样本中Methyl(1
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(cyclohexylmethyl)
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1h
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indole
‑3‑
carbonyl)
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valinate、Stachyd rine、Decanoyl
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【专利技术属性】
技术研发人员：饶军，李金高，廖朝晖，卢天柱，钟方炎，
申请(专利权)人：江西省肿瘤医院江西省第二人民医院，江西省癌症中心，
类型：发明
国别省市：