一种用于药物递送的血小板制剂及其制备、检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于药物递送的血小板制剂及其制备、检测方法。本发明专利技术的用于药物递送的血小板制剂包括：带有连接子的药物，与药物偶联的血小板，血小板制剂上偶联的药物包括至少一种，血小板制剂上药物与血小板连接的连接子包括至少一种。本发明专利技术通过质谱检测的方式确定了偶联剂与药物最优的修饰比例，提高了药物的偶联效率，并为与血小板结合提供准确的数值参考。利用本发明专利技术的方法制备得到血小板制剂能同时偶联两种药物，其呈递效果好，生物活性高。高。高。

【技术实现步骤摘要】
一种用于药物递送的血小板制剂及其制备、检测方法


[0001]本专利技术涉及生物医学工程
，特别涉及一种用于药物递送的血小板制剂及其制备、检测方法。

技术介绍

[0002]目前，临床使用较为广泛的药物包括蛋白质类、活性肽类、有机药物、生物活性因子等多种。许多药物都存在体外实验效果好，但是活体实验效果差的问题，这是由于许多药物在进入活体后存在被分解或无法精准靶向病灶所造成的。因而，需要借助呈递系统将药物精准而高效的递送至病灶区域。
[0003]已公开的呈递系统大多分为泵入呈递系统，胶囊呈递系统以及借助于可生物降解的生物材质(如囊泡，细胞膜或血小板等)的呈递系统。
[0004]血小板，作为血液系统中最小的细胞，由于其重要的凝血作用而被熟知。然而，血小板在血栓形成、肿瘤发生发展以及疾病的炎症反应中也发挥着重要的作用。血小板体积小、无核、炎症性疾病的靶向性以及在病理环境中能够被激活并释放血小板粒子的特点使其成为药物载体的理想候选。
[0005]血小板偶联药物技术是通过化学方法，利用化学连接子将大分子药物连接到未活化的血小板上，利用血小板的靶向性将药物运送到病灶部位并通过激活释放药物，达到治疗目的。这一技术的优势在于，利用血小板的自身特点，
①
可降低大分子药物的免疫原性，避免在血液运输过程中被免疫系统清除失活；
②
提高药物的靶向性，特异性增加病灶部位的药物浓度，在减少药物用量的同时减少药物副反应的发生；
③
由于血小板的体内寿命10
‑r/>14天，因此可减少药物在体内的非必要的累积。
[0006]目前，已有报道利用血小板作为免疫检查点抑制剂(如PD1)的呈递介质，为了确保血小板与免疫检查点抑制剂的有效结合，首先需要对药物进行偶联剂的连接后再与经巯醇化处理的血小板进行偶联。
[0007]但是，由于药物与偶联剂的连接应用的是非定点偶联技术，因而，在药物上偶联的偶联剂的量不能准确确定，进而，会对后期与血小板偶联的数量的准确控制和连接稳定性造成较大影响，故无法在过程中控制最后的血小板偶联抗体质量。此外，在现有技术中，对血小板偶联药物的定量方法，大多采用传统的Elisa检测方法，该方法不能明确偶联到血小板上的抗体是否损失抗原抗体的结合活性，同时由于需要超声破碎血小板释放抗体，血小板破碎程度的差异性也会影响对药物浓度的准确定量。

技术实现思路

[0008]为克服上述缺点，本专利技术的目的在于提供一种用于药物递送的血小板制剂及其制备方法和应用。
[0009]本专利技术提供了一种用于药物递送的血小板制剂，通过将药物偶联于血小板得到，包括：药物，所述药物上具有经过偶联剂处理后连接的连接子；血小板，所述血小板经过预
处理后与带有连接子的药物进行偶联，所述连接子通过偶联剂与药物进行连接；所述血小板制剂上偶联的药物包括至少一种，所述血小板制剂上药物与血小板连接的连接子包括至少一种，血小板与药物的偶联比例按照如下方法确定：比较偶联剂与药物在不同摩尔比的条件下偶联效率的差异性，并通过质谱检测的方式来确定最优的修饰比例，偶联剂与药物的偶联效率通过质谱检测得到的谱图丰度值计算得到。利用本专利技术的方法，通过质谱的分析结果对药物与偶联剂的连接效率进行计算，结果准确度高。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述血小板制剂上同时偶联至少两种药物。通过在血小板上同时偶联两种及以上的药物，能实现联合负载，并完成联合给药，提高了药物的治疗效果。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，同一血小板制剂的药物与血小板通过相同种类的偶联剂进行偶联。
[0012]在本专利技术的一些其他的实施方式中，同一血小板制剂的药物与血小板通过不同种类的偶联剂进行偶联。本专利技术分别采用SMCC连接子或通过双链接子的click反应，对药物进行与偶联剂的偶联，增加了药物偶联的多样性和灵活性，经过实验验证，均能实现药物与偶联剂的高效偶联。
[0013]在本专利技术的一些其他的实施方式中，所述偶联剂选自单功能偶联剂、双功能偶联剂或三功能偶联剂中的至少一种。在一些实施方式中，偶联剂上具有能通过氨基反应，并与
‑
NH2发生反应的基团，如NHS酯、亚氨酸酯、五氟苯酯、羟甲基膦、芳香叠氮；在其他可能的实施方式中，偶联剂上具有能通过巯基反应，并与
‑
SH发生反应的基团，如碘乙酰基(Iodoacetyl)、马来酰亚胺(Maleimide)、吡啶二巯基(Pyridyl disulfide)、乙烯基砜(HBVS)；在其他可能的实施方式中，偶联剂上具有能通过羧基
‑
氨基反应，并与
‑
COOH发生反应的基团，如碳二亚胺(EDC)；在其他可能的实施方式中，偶联剂上具有能通过醛基反应，并与
‑
CHO基团发生反应的基团，如酰肼、烷氧基胺、NHS酯；在其他可能的实施方式中，偶联剂上具有能通过光反应与药物和(或)血小板进行偶联的基团，如双吖丙啶、芳香叠氮；在其他可能的实施方式中，偶联剂上具有能通过羟基反应，并与
‑
OH进行偶联的基团，如异氰酸盐类偶联剂；在其他可能的实施方式中，偶联剂上具有能通过叠氮反应，并与
‑
N3进行偶联的偶联剂，如炔烃类、膦类。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述异型双功能偶联剂选自以下偶联剂中的至少一种：通过氨基
‑
巯基反应的NHS
‑
卤代乙酰基类偶联剂；通过氨基
‑
巯基反应的NHS
‑
马来酰亚胺类偶联剂；通过氨基
‑
巯基反应性的NHS
‑
吡啶二巯基类偶联剂；通过羧基
‑
氨基反应的碳二亚胺或NHS酯类偶联剂；通过化学选择性连接的NHS酯和叠氮化物
‑
膦或炔烃类偶联剂；通过光反应性连接的NHS酯和芳香叠氮化物、苯基叠氮化物类、双吖丙啶类、补骨脂或光反应氨基酸类偶联剂。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述异型双功能偶联剂为通过氨基
‑
巯基反应的NHS
‑
卤代乙酰基类偶联剂，包括但不限于以下偶联剂：SIA(碘代乙酸琥珀酰亚胺酯)、SBAP(琥珀酰亚氨基3
‑
(溴乙酰氨基丙酸酯)、SIAB(N
‑
琥珀酰亚氨基(4
‑
碘乙酰基)氨基苯甲酸甲酯)、Sulfo
‑
SIAB(磺基琥珀酰亚氨基(4
‑
碘乙酰基)氨基苯甲酸甲酯)。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述异型双功能偶联剂为通过氨基
‑
巯基反应的NHS
‑
马来酰亚胺类偶联剂，包括但不限于以下偶联剂：AMAS(N
‑
α
‑
马来酰亚胺乙酸琥珀酰亚
胺酯)、BMPS(N
‑
β
‑
马来酰亚胺丙酸琥珀酰亚胺酯)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于药物递送的血小板制剂，通过将药物偶联于血小板得到，其特征在于，包括：药物，所述药物上具有经过偶联剂处理后连接的连接子；血小板，所述血小板经过预处理后与带有连接子的药物进行偶联，所述连接子通过偶联剂与药物进行连接；所述血小板制剂上偶联的药物包括至少一种，所述血小板制剂上药物与血小板连接的连接子包括至少一种，血小板与药物的偶联比例按照如下方法确定：比较偶联剂与药物在不同摩尔比的条件下偶联效率的差异性，并通过质谱检测的方式来确定最优的修饰比例，偶联剂与药物的偶联效率通过质谱检测得到的谱图丰度值计算得到。2.根据权利要求1所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，所述血小板制剂上同时偶联至少两种药物。3.根据权利要求2所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，同一血小板制剂的药物与血小板通过相同种类的偶联剂进行偶联。4.根据权利要求2所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，同一血小板制剂的药物与血小板通过不同种类的偶联剂进行偶联。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，所述偶联剂选自单功能偶联剂、双功能偶联剂或三功能偶联剂中的至少一种。6.根据权利要求5所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，所述异型双功能偶联剂选自以下偶联剂中的至少一种：通过氨基
‑
巯基反应的NHS
‑
卤代乙酰基类偶联剂；通过氨基
‑
巯基反应的NHS
‑
马来酰亚胺类偶联剂；通过氨基
‑
巯基反应性的NHS
‑
吡啶二巯基类偶联剂；通过羧基
‑
氨基反应的碳二亚胺或NHS酯类偶联剂；通过化学选择性连接的NHS酯和叠氮化物
‑
膦或炔烃类偶联剂；通过光反应性连接的NHS酯和芳香叠氮化物、苯基叠氮化物类、双吖丙啶类、补骨脂或光反应氨基酸类偶联剂。7.根据权利要求5所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，所述异型双功能偶联剂选自以下偶联剂中的至少一种：通过氨基
‑
氨基反应分别与血小板和药物的NHS酯类偶联剂；通过氨基
‑
氨基反应分别与血小板和药物的亚氨酸酯或二氟类偶联剂；通过巯基
‑
巯基反应分别与血小板和药物的马来酰亚胺类偶联剂。8.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，所述药物选自以下药物中的至少一种：细胞因子类药物、蛋白质类药物、多肽药物、多糖药物、有机药物、核酸分子。9.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的用于药物递送的血小板制剂，其特征在于，所述药物选自以下药物中的至少一种：抗肿瘤药物、抗生素药物、心血管药物、抗糖尿病药物和非甾体抗炎药物。10.根据权利要求1
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金刚，徐欢天，顾臻，刘晓曦，
申请(专利权)人：上海臻上医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：