人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法技术

本发明专利技术涉及人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法。本发明专利技术涉及抗FcRH5抗体，包括包含FcRH5结合域和CD3结合域的抗FcRH5抗体(例如抗FcRH5T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体)及其使用方法。(TDB)抗体)及其使用方法。(TDB)抗体)及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法
[0001]本申请是申请日为2016年06月16日、中国申请号为201680038433.3、专利技术名称为“人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法”的专利技术申请的分案申请。
[0002]序列表
[0003]本申请含有序列表，已经以ASCII格式电子提交且据此通过援引完整收录。2016年6月14日创建的所述ASCII拷贝命名为50474
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134WO2_Sequence_Listing_6_14_16_ST25，而且大小为133,004个字节。
专利

[0004]本专利技术涉及抗FcRH5抗体及其使用方法。
[0005]专利技术背景
[0006]细胞增殖性病症(诸如癌症)的特征在于细胞亚群的生长不受控制。它们是发达世界的首位死亡原因和发展中国家的第二位死亡原因，每年诊断超过1400万例新癌症病例且发生超过800万例癌症死亡。(美国)国家癌症学会估计2016年超过50万美国人会死于癌症，占全国死亡人数的接近四分之一。由于老龄人口增加，因此癌症的发病率伴随升高了，因为发生癌症的概率在70岁后要高超过两倍。如此，癌症护理构成一项重大的且不断变大的社会负担。
[0007]Fc受体样5(FcRH5，也称作FcRL5或IRTA2)基因属于六种最近鉴定的免疫球蛋白超家族(IgSF)基因的家族。这个基因家族与具有保守基因组结构，胞外Ig域组成，和免疫受体基于酪氨酸的抑制性(ITIM)和免疫受体基于酪氨酸的激活性(ITAM)样信号传导基序的Fc受体密切相关(Davis et al.Eur.J.Immunol.35：674
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80，2005)。FcRH/IRTA受体家族的六个成员已有描述：FcRH1/IRTA5，FcRH2/IRTA4，FcRH3/IRTA3，FcRH4/IRTA1，FcRH5/IRTA2，和FcRH6(Polson et al.Int.Immunol.18(9)：1363
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1373，2006)。FcRH cDNA编码I型跨膜糖蛋白，其具有多个Ig样胞外域和含有共有免疫受体基于酪氨酸的激活性和/或抑制性信号传导基序的胞质域。FcRH基因是结构相关的，而且它们的蛋白质产物彼此分享28
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60％胞外同一性。它们还与其最近的FcR亲属分享15
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31％同一性。不同FcRH之间存在高度同源性。
[0008]FcRH5的配体未知，但是已经将FcRH5与抗原引发的B细胞发育期间增强的增殖和下游同种型表达联系起来(Dement
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Brown et al.J.Leukoc.Biol.91：59
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67，2012)。FcRH5基因座具有三种主要mRNA同等型(FcRH5a，FcRH5b，和FcRH5c)。由这些转录物编码的主要FcRH5蛋白质同等型分享共同的氨基酸序列，直至残基560，其特征在于共同的信号肽和六个胞外Ig样域。FcRH5a代表一种759个氨基酸的分泌型糖蛋白，其具有八个Ig样域，接着是其C端处的13个独特的，主要为极性的氨基酸。FcRH5b在氨基酸残基560处不同于FcRH5a且延伸一小段32个另外的残基，其疏水性与其经GPI锚停泊至质膜相容。FcRH5c是最长的同等型，其序列在氨基酸746处不同于FcRH5a。FcRH5c编码一种977个氨基酸的I型跨膜糖蛋白，其具有包含八个潜在N连接的糖基化位点的九个胞外Ig型域，23个氨基酸的跨膜域，和具有三个共有SH2结合基序(其具有ITIM共有)的104个氨基酸的胞质域。
[0009]FcRH基因在染色体1的1q21
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23区中的经典FcR基因(FcγRI，FcγRII，FcγRIII，
和FcεRI)中部聚簇在一起。这个区含有与造血肿瘤，尤其是多发性骨髓瘤中的恶性表型有关的最频繁的次要染色体异常之一(Hatzivassiliou et al.Immunity.14：277
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89，2001)。FcRH5只在B细胞谱系中表达，早至前B细胞开始，但是直至成熟B细胞阶段才获得完全表达。与大多数已知的其它B细胞特异性表面蛋白质(例如CD20，CD19，和CD22)不同，FcRH5在浆细胞中继续表达，而其它B细胞特异性标志物下调(Polson et al.Int.Immunol.18：1363
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73，2006)。另外，FcRH5 mRNA在具有1q21异常的多发性骨髓瘤细胞系中过表达，如通过寡核苷酸阵列检测的(Inoue Am.J.Pathol.165：71
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81，2004)。表达样式指示FcRH5可以成为用于治疗多发性骨髓瘤的基于抗体的疗法的靶物。多发性骨髓瘤是浆细胞的一种恶性，其特征在于骨骼损害，肾衰竭，贫血，和高钙血症，而且它本质上是通过当前疗法不可治愈的。当前用于多发性骨髓瘤的药物治疗包括蛋白酶体抑制剂硼替佐米免疫调控剂来那度胺和类固醇地塞米松的组合。
[0010]基于单克隆抗体(单抗)的疗法已经成为癌症的一种重要的治疗模态。基于FcRH5c特异性抗体的疗法和检测方法可能是特别有效的，因为它们特异性识别靶细胞，膜结合FcRH5而非识别FcRH5的可溶性和膜同等型二者的抗体。然而，只有FcRH5的最后一个Ig样域(Ig样域9)是在FcRH5的三种主要同等型(例如FcRH5a，FcRH5b，和FcRH5c)之间有区别的独特胞外区，而且FcRH5内的Ig样域之间存在显著同源性。而且，最后一个Ig样域在FcRH1，FcRH2，FcRH3，和FcRH5之间高度保守。任何特异性靶向FcRH5的基于抗体的疗法应当具有最小限度的与其它FcRH的交叉反应性以避免不利脱靶效应(例如，FcRH3在正常NK细胞上表达)。
[0011]鉴于上述，本领域对用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤)的安全且有效的药剂存在未满足的需求。
[0012]专利技术概述
[0013]本专利技术提供抗FcRH5抗体(例如双特异性抗体，例如FcRH5T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体)，组合物，和使用其治疗细胞增殖性病症(例如癌症，例如FcRH5阳性癌症，例如多发性骨髓瘤)的方法。
[0014]在第一个方面，本专利技术特征在于一种抗Fc受体样5(FcRH5)抗体，其包含包含下述六种高变区(HVR)的结合域：(a)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的HVR
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H1，(b)包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列的HVR
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H2，(c)包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列的HVR
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H3，(d)包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的HVR
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L1，(e)包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列的HVR
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L2，和(f)包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列的HVR
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L3。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含：包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的重链可变(VH)域和包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的轻链可变(VL)域；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含：包含SEQ ID NO:133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列的VL域。2.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含：包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的VL域；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含：包含SEQ ID NO:133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列的VL域；其中该抗FcRH5臂和该抗CD3臂各自包含N297G突变，依照EU编号方式。3.一种结合FcRH5和CD3的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含：(a)包含第一结合域的抗FcRH5臂，该第一结合域包含：包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列的VL域；和(b)包含第二结合域的抗CD3臂，该第二结合域包含：包含SEQ ID NO:133的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:134的氨基酸序列的VL域；其中该抗FcRH5臂包含N297G突变和T366W突变且该抗CD3臂包含N297G突变、T366S突变，L368A突变，和Y407V突变，依照EU编号方式。4.权利要求1的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体包含无糖基化点突变。5.权利要求4的抗FcRH5抗体，其中该无糖基化点突变：(a)是替代突变；或(b)降低该抗FcRH5抗体的效应器功能。6.权利要求5的抗FcRH5抗体，其中该替代突变在氨基酸残基N297，L234，L235，D265，和/或P329处，依照EU编号方式。7.权利要求6的抗FcRH5抗体，其中该替代突变选自由N297G，N297A，L234A，L235A，D265A，和P329G组成的组。8.权利要求7的抗FcRH5抗体，其中该替代突变是N297G突变。9.权利要求1的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5臂包含T366W替代突变且该抗CD3臂包含T366S，L368A，和Y407V替代突变，依照EU编号方式。10.权利要求1
‑
9任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体结合FcRH5的Ig样域9中的表位。11.权利要求10的抗FcRH5抗体，其中：(a)该表位包含SEQ ID NO:114的氨基酸745
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850的一部分；或(b)该结合域结合人FcRH5或食蟹猴FcRH5或二者。12.权利要求1
‑
9任一项的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域结合CD3上包含CD3氨基酸残基Glu6的表位。13.权利要求12的抗FcRH5抗体，其中该表位：(a)包含一个或多个选自由CD3的Gln1，Asp2，和Met7组成的组的另外的氨基酸残基；(b)包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，和Glu6；
(c)包含CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7；(d)并不包含CD3的氨基酸残基Glu5；(e)并不包含CD3的氨基酸残基Gly3和Glu5；或(f)由CD3的氨基酸残基Gln1，Asp2，Glu6，和Met7组成。14.权利要求12的抗FcRH5抗体，其中该第二结合域能够结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽，其中该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽：(a)分别是人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽；或(b)分别是人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。15.权利要求1
‑
9任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体是：(a)单克隆，人，人源化，或嵌合抗体；(b)IgG抗体；(c)抗体片段；或(d)全长抗体。16.权利要求15的抗FcRH5抗体，其中该抗体片段选自由bis
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Fab，Fab，Fab
’‑
SH，Fv，scFv，和(Fab
’
)2片段组成的组。17.权利要求16的抗FcRH5抗体，其中该抗体片段是bis
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Fab片段。18.权利要求1
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9任一项的抗FcRH5抗体，其中该抗FcRH5抗体在静脉内注射后具有介于10ml/kg/d至35ml/kg/d之间的清除率。19.分离的核酸，其编码权利要求1
‑
18任一项的抗FcRH5抗体。20.载体，其包含权利要求19的分离的核酸。21.宿主细胞，其包含权利要求20的载体。22.权利要求21的宿主细胞，其中该宿主细胞是：(a)哺乳动物细胞；或(b)原核细胞。23.权利要求22的宿主细胞，其中：(a)该哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞；或(b)该原核细胞是大肠杆菌细胞。24.一种生成权利要求1
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18任一项的抗FcRH5抗体的方法，该方法包括在培养基中培养权利要求21的宿主细胞。25.权利要求24的方法，其中该方法进一步包括自该宿主细胞或该培养基回收该抗FcRH5抗体。26.一种组合物，其包含权利要求1
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18任一项的抗FcRH5抗体。27.权利要求26的组合物，其进一步包含：(a)药学可接受赋形剂或稀释剂；或(b)PD
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1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂。28.权利要求27的组合物，其中该药学可接受赋形剂是缓冲剂，载剂，稳定剂，或防腐剂。29.权利要求28的组合物，其中该组合物是药物组合物。30.权利要求1
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18任一项的抗FcRH5抗体或权利要求26
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29任一项的组合物在制造供下
述方法使用的药物中的用途：(a)在有所需要的受试者中治疗FcRH5阳性癌症或延迟其进展；或(b)在具有FcRH5阳性癌症的受试者中增强免疫功能，该方法包括对该受试者施用有效量的权利要求1
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18任一项的抗FcRH5抗体或权利要求26
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29任一项的组合物。31.权利要求30的用途，其中该FcRH5阳性癌症是B细胞癌症。32.权利要求31的用途，其中该B细胞癌症选自由多发性骨髓瘤(MM)，慢性淋巴样白血病(CLL)，套细胞淋巴瘤(MCL)，...

【专利技术属性】
技术研发人员：I，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：