一种多种维生素D类似物检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种多种维生素D类似物检测试剂盒，包括样本稀释液母液和检测卡，检测卡由外壳和检测条组成，检测条包括PVC底板，PVC底板上面依次粘有吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，样本稀释液母液中含有荧光微球标记脂溶性小分子，所述荧光微球与脂溶性小分子之间通过短碳链偶联；所述检测线位置包被有所述脂溶性小分子抗体，本发明专利技术的试剂盒可以及时快速检测质控品中各种形态的维生素D类似物的含量，可以实时快速监测质控品的质量，保证试剂的稳定性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种多种维生素D类似物检测试剂盒及检测方法


[0001]本申请涉及分析检测
，具体而言，涉及一种多种维生素D类似物检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]目前维生素D的免疫测定方法主要有化学发光法、酶联免疫法、荧光免疫法等。主要检测25羟基维生素D总（D2+D3）或者25羟基维生素D3，检测的样本主要是血清或者血浆样本，检测的范围在0
‑
200ng/mL。
[0003]在25羟基维生素D总（D2+D3）或者25羟基维生素D3检测用试剂盒的生产和质控过程中，经常会用到各种形态的维生素D类似物作为质控品来保证试剂盒的质量。例如，在25羟基维生素D总（D2+D3）的试剂盒生产和检测过程中，用25羟基维生素D3和25羟基维生素D2来检测25羟基维生素D总（D2+D3）试剂盒的灵敏度、线性范围、精密度等指标，用维生素D3、1，25
‑
二羟维生素D3、24，25
‑
二羟维生素D3、维生素D2、1，25
‑
二羟维生素D2、24，25
‑
二羟维生素D2来检测25羟基维生素D总（D2+D3）试剂盒的特异性。在25羟基维生素D3的试剂盒生产和检测过程中，用25羟基维生素D3来检测25羟基维生素D3试剂盒的灵敏度、线性范围、精密度等指标，用维生素D3、1，25
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二羟维生素D3、24，25
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二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25
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二羟维生素D2、24，25
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二羟维生素D2等各种形态的维生素D类似物来检测25羟基维生素D3试剂盒的特异性。各种形态的维生素D类似物（25羟基维生素D3、维生素D3、1，25
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二羟维生素D3、24，25
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二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25
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二羟维生素D2、24，25
‑
二羟维生素D2等）对试剂盒的质量控制均有非常重要的作用。
[0004]在25羟基维生素D总（D2+D3）和在25羟基维生素D3的试剂盒生产和检验过程中，质量人员对25羟基维生素D3和25羟基维生素D2质控品质量情况非常重视，但经常会忽略维生素D3、1，25
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二羟维生素D3、24，25
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二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25
‑
二羟维生素D2、24，25
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二羟维生素D2等特异性质控品的质量，从而引起试剂盒的特异性问题，因此检测质控品中不同形态的维生素D类似物的含量具有重要的意义。
[0005]现有技术中检测各个形态维生素D类似物的方法主要是质谱法和免疫试剂盒法，但是质谱法耗时时间长，价格昂贵。而免疫试剂盒检测，只能检测25羟基维生素D总(D2+D3)或者25羟基维生素D3，不能检测干扰物质，例如不能检测维生素D3、1，25
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二羟维生素D3、24，25
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二羟维生素D3、维生素D2、1，25
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二羟维生素D2、24，25
‑
二羟维生素D2等。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种多种维生素D类似物检测试剂盒，包括样本稀释液母液和检测卡，检测卡由外壳和检测条组成，检测条包括PVC底板，PVC底板上面依次粘由吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，所述样本稀释液母液中含有荧光微球标记脂溶性小分子，所述荧光微球与脂溶性小分子之间通过短碳链偶联；所述检测线位置包被有所述脂溶性小分子抗体。
[0007]所述脂溶性小分子为25羟基维生素D3或25羟基维生素D2。
[0008]和/或，所述维生素D类似物为维生素D3、1，25
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二羟维生素D3、24，25
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二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25
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二羟维生素D2、24，25
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二羟维生素D2。
[0009]所述短碳链为包括4
‑
10个碳的短链。具体的，所述短碳链为γ
‑
氨基丁酸、5
‑
氨基戊酸、6
‑
氨基己酸、7
‑
氨基庚酸、8
‑
氨基辛酸、9
‑
氨基壬酸或10
‑
氨基癸酸的一种或多种。
[0010]所述样本稀释液母液的制备方法包括：（1）活化荧光微球的羧基，使其与短碳链的氨基反应，进而将短碳链偶联到荧光微球上；（2）继续活化步骤（1）获得的荧光微球上偶联的短碳链的羧基，使其与脂溶性小分子的氨基反应，将脂溶性小分子偶联到短碳链上，进而形成荧光微球
‑
短碳链
‑
脂溶性小分子结构。
[0011]进一步的，（1）所述样本稀释液母液的制备方法还包括采用封闭剂封闭所述荧光微球
‑
短碳链
‑
脂溶性小分子结构标记过程中剩余的羧基活化位点，所述质控线位置包被对应的封闭剂抗体；优选的，所述封闭剂为BSA；和/或，（2）所述活化是通过添加EDC和NHS溶液反应完成的。
[0012]具体的，所述样本稀释液母液的制备方法包括：（1）每1mL荧光微球中加入200uL 质量百分比浓度为1
‑
5%的EDC、200uL质量百分比浓度为1
‑
5%的NHS,震荡1
‑
5小时，10000
×
g离心30min；（2）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入1
‑
30mg短碳链，震荡1
‑
5小时，10000
×
g离心30min；（3）取沉淀用复溶液复溶到1mL，加入200uL质量百分比浓度为1
‑
5%的EDC，200uL质量百分比浓度为1
‑
5%的NHS，震荡1
‑
5小时，10000
×
g离心30min；（4）沉淀用复溶液复溶到1mL，加入1
‑
30mg 25羟基维生素D3
‑3‑
氨基醚或25羟基维生素D2
‑3‑
氨基醚，震荡1
‑
5小时，加入质量百分比浓度为10%的BSA 100uL，震荡30min，10000
×
g离心30min，沉淀用0.01mol/L pH值为7.0
±
1磷酸缓冲液复溶到10mL，作为样本稀释液母液；所述复溶液为含万分之一体积的tween
‑
20的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。
[0013]进一步的，硝酸纤维素膜检测线位置包被有1mg/ml的25羟基维生素D3抗体或25羟基维生素D2抗体，质控线位置包被有1mg/ml BSA抗体。
[0014]本专利技术还提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多种维生素D类似物检测试剂盒，包括样本稀释液母液和检测卡，检测卡由外壳和检测条组成，检测条包括PVC底板，PVC底板上面依次粘有吸水垫、硝酸纤维素膜、样品垫，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线，其特征在于，所述样本稀释液母液中含有荧光微球标记脂溶性小分子，所述荧光微球与脂溶性小分子之间通过短碳链偶联；所述检测线位置包被有所述脂溶性小分子抗体。2.根据权利要求1所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述脂溶性小分子为25羟基维生素D3或25羟基维生素D2；和/或，所述维生素D类似物为维生素D3、1，25
‑
二羟维生素D3、24，25
‑
二羟维生素D3、25羟基维生素D2、维生素D2、1，25
‑
二羟维生素D2、24，25
‑
二羟维生素D2。3.根据权利要求1所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述短碳链为包括4
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10个碳的短链。4.根据权利要求3所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述短碳链为γ
‑
氨基丁酸、5
‑
氨基戊酸、6
‑
氨基己酸、7
‑
氨基庚酸、8
‑
氨基辛酸、9
‑
氨基壬酸或10
‑
氨基癸酸的一种或多种。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液母液的制备方法包括：（1）活化荧光微球的羧基，使其与短碳链的氨基反应，进而将短碳链偶联到荧光微球上；（2）继续活化步骤（1）获得的荧光微球上偶联的短碳链的羧基，使其与脂溶性小分子的氨基反应，将脂溶性小分子偶联到短碳链上，进而形成荧光微球
‑
短碳链
‑
脂溶性小分子结构。6.根据权利要求5所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，（1）所述样本稀释液母液的制备方法还包括采用封闭剂封闭所述荧光微球
‑
短碳链
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脂溶性小分子结构标记过程中剩余的羧基活化位点，所述质控线位置包被对应的封闭剂抗体；和/或，（2）所述活化是通过添加EDC和NHS溶液反应完成的。7.根据权利要求5所述的多种维生素D类似物检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液母液的制备方法包括：（1）每1mL荧光微球中加入200uL 质量百分比浓度为1
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：郝存，余占江，陈永强，平凡，高巍巍，李凡，韦莹倩，刘先路，赵苓苓，时鸿，
申请(专利权)人：普迈德北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：