一种用于培养神经干细胞的无血清培养基及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种用于培养神经干细胞的培养基及其用途。本发明专利技术提供的所述培养基中含有干性因子A、干性因子B和干性因子C；所述干性因子A选自如下至少一种：乙酸盐、二氯乙酸盐和HMG

【技术实现步骤摘要】
一种用于培养神经干细胞的无血清培养基及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种用于培养神经干细胞的无血清培养基及其用途。

技术介绍

[0002]神经退行性疾病会导致神经细胞的持续退化或死亡。随着世界人口老龄化，以痴呆等为代表的神经退行性疾病患病率呈明显上升趋势，但目前对该类疾病缺乏有效治疗方案。新近研究表明，干细胞疗法有望成为神经退行性疾病新的治疗办法，通过分化神经细胞或分泌神经营养因子延缓疾病进展。
[0003]神经干细胞的一个特性是自我更新和多能性，即它们可以产生神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。动物试验发现移植的神经干细胞可以在体内分化为有功能的神经元。因此，它们对神经功能障碍的治疗和受损神经系统的修复具有重要意义。在正常情况下，成人脑内神经干细胞数目太少，且大部分处于静息状态，所以面对较难解决的神经退行性疾病，例如阿尔茨海默病，则可从移植体外培养的自体或异体神经干细胞入手，研究和解决神经损伤疾病和神经功能缺失的问题。
[0004]目前，对神经干细胞进行增殖培养的常用培养基为含1％B27的Neurobasal培养基或者DMEM/F12培养基。但经过含1％B27的Neurobasal培养基培养的神经干细胞增殖能力较弱。另外，现有的神经干细胞的培养基中除了多添加使用B27添加剂外，还含有动物提取蛋白
‑
牛血清白蛋白，存在引入动物源性病原微生物的风险。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种用于培养神经干细胞的无血清培养基及其用途。
[0006]第一方面，本专利技术要求保护一种用于培养神经干细胞的培养基。
[0007]本专利技术所要求保护的用于培养神经干细胞的培养基含有干性因子A、干性因子B和干性因子C；所述干性因子A可选自如下中的至少一种：乙酸盐、二氯乙酸盐和HMG
‑
CoA还原酶抑制剂。
[0008]其中，所述乙酸盐可如乙酸钠；所述二氯乙酸盐可如二氯乙酸钠（DCA）；所述HMG
‑
CoA还原酶抑制剂可如洛伐他汀（Lovastatin）。
[0009]所述干性因子B可为N
‑
乙酰半胱氨酸（NAC）。
[0010]所述干性因子C可选自如下中的至少一种：色氨酸、色氨酸代谢物（如5
‑
甲氧基色氨酸）和褪黑素。
[0011]进一步地，所述培养基中还可含有神经维持因子。
[0012]更进一步地，所述神经维持因子可为三碘甲状腺原氨酸。
[0013]进一步地，所述培养基中还可含有体外培养生长因子；所述体外培养生长因子可由如下b1）和b2）组成：
b1）碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）；b2）表皮生长因子（EGF）或肝素结合性表皮生长因子（HB
‑
EGF）。
[0014]在所述培养基中，乙酸盐（如乙酸钠）的浓度可为5μM~50mM（如5mM）；二氯乙酸盐（如二氯乙酸钠）的浓度可为1
‑
10mM（如5mM）；HMG
‑
CoA还原酶抑制剂（如洛伐他汀）的浓度可为5
‑
20μM（如10μM）；N
‑
乙酰半胱氨酸（NAC）的浓度可为150μM；色氨酸或色氨酸代谢物或褪黑素的浓度可为100μM；三碘甲状腺原氨酸的浓度可为1
‑
2μM（如0.5μM）；碱性成纤维细胞生长因子的浓度可为20μg/L；表皮生长因子或肝素结合性表皮生长因子的浓度可为20μg/L。
[0015]更进一步地，所述培养基可由如下组成：c1）基础培养基；c2）前文所述干性因子A；c3）前文所述干性因子B；c4）前文所述干性因子C；c5）前文所述神经维持因子；c6）前文所述体外培养生长因子；c7）白蛋白；c8）氨基酸；c9）转移蛋白；c10）缓冲剂；c11）抗氧化剂；c12）糖类化合物；c13）黏连蛋白；c14）脂类化合物；c15）多胺；c16）维生素；c17）黄体酮和胰岛素；c18）无机盐。
[0016]其中，所述基础培养基可为如下d1）和d2）中的至少一种：d1）DMEM培养基或DMEM/F12培养基；d2）Neurobasal培养基。所述白蛋白可为重组人血清白蛋白。所述氨基酸由非必需氨基酸和L
‑
谷氨酰胺组成。所述转移蛋白可为重组人转铁蛋白。所述缓冲剂可为4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）。所述抗氧化剂可为L
‑
抗坏血酸（维生素 C葡萄糖苷）或谷胱甘肽。所述糖类化合物可为肝素或肝素钠。所述黏连蛋白可为纤连蛋白。所述脂类化合物可为亚油酸、亚麻酸、卵磷脂和胆碱中的全部或部分。所述多胺可由乙醇胺和丁二胺（腐胺）组成。所述维生素可由维生素B12和维生素E组成。所述无机盐可由亚硒酸钠、丙酮酸钠、硫酸亚铁和氯化锌组成。
[0017]在本专利技术的具体实施方式中，所述基础培养基具体由DMEM/F12培养基和Neurobasal培养基按照1:1的体积比混合而成。
[0018]在所述培养基中，乙酸盐（如乙酸钠）的浓度可为5μM~50mM（如5mM）；二氯乙酸盐（如二氯乙酸钠）的浓度可为1
‑
10mM（如5mM）；HMG
‑
CoA还原酶抑制剂（如洛伐他汀）的浓度可为5
‑
20μM（如10μM）；N
‑
乙酰半胱氨酸（NAC）的浓度可为150μM；色氨酸、色氨酸代谢物和/或褪黑素的浓度可为100μM；三碘甲状腺原氨酸的浓度可为1
‑
2μM（如0.5μM）；碱性成纤维细胞生长因子的浓度可为20μg/L；表皮生长因子或肝素结合性表皮生长因子的浓度可为20μg/L；重组人血清白蛋白的浓度可为2g/L；所述非必需氨基酸的体积百分含量可为1%；L
‑
谷氨酰胺的浓度可为150mg/L；重组人转铁蛋白的浓度可为10mg/L，4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸的浓度可为1000mg/L；L
‑
抗坏血酸的浓度可为50mg/L；谷胱甘肽的浓度可为1
‑
200μM；肝素或肝素钠的浓度可为200μg/L；纤连蛋白的浓度可为1mg/L；亚油酸的浓度可为0.4mg/L；亚麻酸的浓度可为0.5mg/L；卵磷脂的浓度可为0.5mg/L；胆碱的浓度可为30nmol/L；乙醇胺的浓度可为3mg/L；丁二胺的浓度为1.6mg/L；维生素B12的浓度可为20μmol/L；维生素E的浓度可为30μg/L；黄体酮的浓度可为7μg/L；胰岛素的浓度可为13.6μg/L；亚硒酸钠的浓度可为13.6μg/L；丙酮酸钠的浓度可为150mg/L；硫酸亚铁的浓度可为0.8 mg/L；氯化锌的浓度可为0.4 mg/L。
[0019]在一些情况下，本专利技术所要保护的培养基也可以为在上述配方的基础上各组分浓度等倍增大后得到的浓缩液。在另一些情况下，本专利技术所要保护的培养基也可以为将上述配方的所述培养基冻干后得到的冻干粉。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于培养神经干细胞的培养基，其特征在于：所述培养基中含有干性因子A、干性因子B和干性因子C；所述干性因子A选自如下中的至少一种：乙酸盐、二氯乙酸盐和HMG
‑
CoA还原酶抑制剂；所述干性因子B为N
‑
乙酰半胱氨酸；所述干性因子C选自如下中的至少一种：色氨酸、色氨酸代谢物和褪黑素。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述培养基中还含有神经维持因子和/或体外培养生长因子；所述神经维持因子为三碘甲状腺原氨酸；所述体外培养生长因子由如下b1）和b2）组成：b1）碱性成纤维细胞生长因子；b2）表皮生长因子或肝素结合性表皮生长因子。3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于：在所述培养基中，乙酸盐的浓度为5μM~50mM，二氯乙酸盐的浓度为1
‑
10mM，HMG
‑
CoA还原酶抑制剂的浓度为5
‑
20μM；在所述培养基中，N
‑
乙酰半胱氨酸的浓度为150μM；在所述培养基中，色氨酸、色氨酸代谢物和/或褪黑素的浓度为100μM；在所述培养基中，三碘甲状腺原氨酸的浓度为1
‑
2μM；在所述培养基中，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为20μg/L；表皮生长因子或肝素结合性表皮生长因子的浓度为20μg/L。4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于：所述培养基由如下c1）
‑
c18）组成：c1）基础培养基；c2）所述干性因子A；c3）所述干性因子B；c4）所述干性因子C；c5）所述神经维持因子；c6）所述体外培养生长因子；c7）白蛋白；c8）氨基酸；c9）转移蛋白；c10）缓冲剂；c11）抗氧化剂；c12）糖类化合物；c13）黏连蛋白；c14）脂类化合物；c15）多胺；c16）维生素；c17）黄体酮和胰岛素；c18）无机盐。5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于：所述基础培养基为如下d1）和d2）中的至少一种：d1）DMEM培养基或DMEM/F12培养基；d2）Neurobasal培养基；所述白蛋白为重组人血清白蛋白；所述氨基酸由非必需氨基酸和L
‑
谷氨酰胺组成；所述转移蛋白为重组人转铁蛋白；所述缓冲剂为4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸；所述抗氧化剂为L
‑
抗坏血酸或谷胱甘肽；所述糖类化合物为肝素或肝素钠；所述黏连蛋白为纤连蛋白；所述脂类化合物为亚油酸、亚麻酸、卵磷脂和胆碱中的至少一种；所述多胺由乙醇胺和丁二胺组成；所述维生素由维生素B12和维生素E组成；所述无机盐由亚硒酸钠、丙酮酸钠、硫酸亚铁和氯化锌组成。6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于：在所述培养基中，重组人血清白蛋白的浓度为2g/L，所述非必需氨基酸的体积百分含量为1%，L
‑
谷氨酰胺的浓度为150mg/L，重组人转铁蛋白的浓度为10mg/L，4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸的浓度为1000mg/L，L
‑
抗坏血酸的浓度
为50mg/L，谷胱甘肽的浓度为1
‑
200μM，肝素或肝素钠的浓度为200μg/L，纤连蛋白的浓度为1mg/L，亚油酸的浓度为0.4mg/L，亚麻酸的浓度为0.5mg/L，卵磷脂的浓度为0.5mg/L，胆碱的浓度为30nmol/L，乙醇胺的浓度为3mg/L，丁二胺的浓度为1.6mg/L，维生素B12的浓度为20μmol/L，维生素E的浓度为30μg/L，黄体酮的浓度为7μg/L，胰岛...

【专利技术属性】
技术研发人员：ꢀ七四专利代理机构，
申请(专利权)人：华科星河北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：