一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，包括如下步骤：S1、裂解处理：向流感病毒抗原样品和流感病毒抗原血凝滴度参考品中分别加入裂解剂进行裂解，得裂解流感病毒抗原样品和裂解流感病毒抗原血凝滴度参考品；所述流感病毒抗原样品为流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序产生的中间体；S2、血凝滴度检测：分别检测裂解流感病毒抗原样品的血凝滴度和裂解流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度；S3、计算流感病毒抗原样品的血凝滴度标准值。本申请的检测方法精密度较好、重复性较好、准确度较好，能够用于流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序中间体的质量控制评价。质量控制评价。

【技术实现步骤摘要】
一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种生物制剂的检测方法，特别是涉及一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法。

技术介绍

[0002]据统计，全球每年约有5％～15％人口感染流感病毒，并导致300～500万的严重病例和50万的死亡病例，接种流感疫苗是预防流感病毒感染的最有效的预防措施。血凝滴度作为评价病毒尿囊收获液的质量评价指标，具有方法简便、灵活性好等优点。目前常采用常规血凝法检测流感病毒尿囊收获液的血凝滴度，常规血凝法的原理为流感病毒、副流感病毒等选择性地凝集个别动物的红细胞。常规血凝法测定血凝滴度所需材料有：1v％鸡血红细胞悬液，0.9wt％氯化钠溶液，微量血凝板(U型)。常规血凝法测定血凝滴度的步骤为：微量血凝板各孔中加入50μL 0.9wt％氯化钠溶液，第一孔加入被检样品病毒液，用移液器反复吹吸混匀，吸出50μL移至第二孔；以此类推，等体积倍比稀释直至第12孔，从第12孔中吸出50μL弃去，以此方法对病毒稀释；另设两孔，每孔加入50μL 0.9wt％氯化钠溶液为阴性对照，每孔加入50μL 1v％鸡血红细胞悬液，混匀后静置30min，后判定血凝试验检测结果。
[0003]流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程主要包括病毒接种和培养、病毒收获、尿囊收获液合并、病毒灭活、超滤浓缩、纯化、病毒裂解、裂解后纯化、除菌过滤等步骤。如何实现对流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序中间体的质量控制评价是非常重要的。
[0004]但本申请人在研究过程中发现常规血凝法用于检测流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序中间体的血凝滴度存在如下不足：1)检测用鸡血球质量、浓度、贮存时间等因素对常规血凝法检测结果有影响；2)由于病毒浓缩液、纯化液、裂解液、原液等各工序中间体的病毒抗原物理状态与病毒尿囊收获液相比，发生了较大变化，样品状态对常规血凝法检测结果影响很大。因此无法利用常规血凝法对流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程各工序中间体进行准确客观的质量控制评价。

技术实现思路

[0005]为了解决常规血凝法不能对流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程各工序中间体进行准确客观的质量控制评价，本申请提供一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法。
[0006]第一方面，本申请提供一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，采用如下技术方案实现：一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，包括如下步骤：S1、裂解处理：向流感病毒抗原样品和流感病毒抗原血凝滴度参考品中分别加入裂解剂进行裂解，得裂解流感病毒抗原样品和裂解流感病毒抗原血凝滴度参考品；所述流感病毒抗原样品为流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序产生的中间体；S2、血凝滴度检测：分别检测裂解流感病毒抗原样品的血凝滴度和裂解流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度，得流感病毒抗原样品的血凝滴度检测值和流感病毒抗原
血凝滴度参考品的血凝滴度检测值；S3、计算流感病毒抗原样品的血凝滴度标准值：以流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度标准值与流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度检测值之间的比值作为修正系数，对流感病毒抗原样品的血凝滴度检测值进行修正，得流感病毒抗原样品的血凝滴度标准值。
[0007]通过采用上述技术方案，本申请通过对流感病毒抗原样品进行裂解，进而达到流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序产生的中间体物理性质的一致性，有效避免了流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序产生的中间体的状态对常规血凝法检测结果的影响，提高了检测准确性，更精准地控制和评价流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序中间体的质量。同时流感病毒抗原样品和流感病毒抗原血凝滴度参考品同步进行裂解，有效减少了操作过程对检测结果的影响。此外，本申请血凝滴度的检测过程中利用流感病毒抗原血凝滴度参考品有效消除了鸡血球质量、浓度、贮存时间等因素对检测结果的影响，提高了检测结果的稳定性。
[0008]优选的，所述流感病毒抗原样品包括流感病毒收获液、流感病毒脱糖纯化液、流感病毒裂解液、流感病毒裂解后纯化液或流感病毒裂解疫苗单价原液中的任一种。
[0009]本申请中，所述流感病毒收获液为流感病毒裂解疫苗单价原液生产工序中超滤浓缩工序后得到的样品，具体为：鸡胚尿囊腔接种稀释的工作种子(流感病毒)培养48～72h；培养后筛选活鸡胚，收获尿囊于容器内并对每个收获容器内的尿囊收获液进行检定，将检定合格的尿囊液合并，得单价流感病毒合并液；向单价流感病毒合并液中加入浓度不高于200μg/mL的甲醛，进行病毒灭活，得灭活后单价流感病毒合并液；对灭活后单价流感病毒合并液离心后采用超滤法浓缩，得流感病毒收获液。
[0010]本申请中，所述流感病毒脱糖纯化液为流感病毒裂解疫苗单价原液生产工序中纯化工序后得到的样品，具体为：对流感病毒收获液采用蔗糖密度梯度离法进行纯化，得流感病毒脱糖纯化液。
[0011]本申请中，所述流感病毒裂解液为流感病毒裂解疫苗单价原液生产工序中病毒裂解工序后得到的样品，具体为：将流感病毒脱糖纯化液加入裂解剂进行病毒裂解，得流感病毒裂解液。
[0012]本申请中，所述流感病毒裂解后纯化液为流感病毒裂解疫苗单价原液生产工序中裂解后纯化工序后得到的样品，具体为：对流感病毒裂解液采用柱色谱法或蔗糖密度梯度离心法等方法进行再纯化，得流感病毒裂解后纯化液。
[0013]本申请中，所述流感病毒裂解疫苗单价原液为流感病毒裂解疫苗单价原液生产工序中除菌过滤工序后得到的样品，具体为：对流感病毒裂解后纯化液除菌，得流感病毒裂解疫苗单价原液。
[0014]本申请提供的流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，可以准确地分析流感病毒收获液的血凝滴度、流感病毒脱糖纯化液的血凝滴度、流感病毒裂解液的血凝滴度、流感病毒裂解后纯化液的血凝滴度和流感病毒裂解疫苗单价原液的血凝滴度。
[0015]优选的，所述流感病毒裂解疫苗单价原液包括H1N1型流感病毒单价原液、H3N2型流感病毒单价原液、BV型流感病毒单价原液或BY型流感病毒单价原液中的任一种。
[0016]本申请中，所述流感病毒收获液包括H1N1型流感病毒收获液、H3N2型流感病毒收
获液、BV型流感病毒收获液或BY型流感病毒收获液中的任一种。
[0017]本申请中，所述流感病毒脱糖纯化液包括H1N1型流感病毒脱糖纯化液、H3N2型流感病毒脱糖纯化液、BV型流感病毒脱糖纯化液或BY型流感病毒脱糖纯化液中的任一种。
[0018]本申请中，所述流感病毒裂解液包括H1N1型流感病毒裂解液、H3N2型流感病毒裂解液、BV型流感病毒裂解液或BY型流感病毒裂解液中的任一种。
[0019]本申请中，所述流感病毒裂解后纯化液包括H1N1型流感病毒裂解后纯化液、H3N2型流感病毒裂解后纯化液、BV型流感病毒裂解后纯化液或BY型流感病毒裂解后纯化液中的任一种。
[0020]本申请提供的流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，对各种流感病毒均有较优的检测效果，检测结果的稳定性高，检测结果可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、裂解处理：向流感病毒抗原样品和流感病毒抗原血凝滴度参考品中分别加入裂解剂进行裂解，得裂解流感病毒抗原样品和裂解流感病毒抗原血凝滴度参考品；所述流感病毒抗原样品为流感病毒裂解疫苗单价原液生产过程中各工序产生的中间体；S2、血凝滴度检测：分别检测裂解流感病毒抗原样品的血凝滴度和裂解流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度，得流感病毒抗原样品的血凝滴度检测值和流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度检测值；S3、计算流感病毒抗原样品的血凝滴度标准值：以流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度标准值与流感病毒抗原血凝滴度参考品的血凝滴度检测值之间的比值作为修正系数，对流感病毒抗原样品的血凝滴度检测值进行修正，得流感病毒抗原样品的血凝滴度标准值。2.根据权利要求1所述的一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，其特征在于，所述流感病毒抗原样品包括流感病毒收获液、流感病毒脱糖纯化液、流感病毒裂解液、流感病毒裂解后纯化液或流感病毒裂解疫苗单价原液中的任一种。3.根据权利要求2所述的一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，其特征在于，所述流感病毒裂解疫苗单价原液包括H1N1型流感病毒单价原液、H3N2型流感病毒单价原液、BV型流感病毒单价原液或BY型流感病毒单价原液中的任一种。4.根据权利要求1所述的一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，其特征在于，所述S1步骤中，所述流感病毒抗原样品在裂解前的血凝素含量为10~50μg/mL；所述流感病毒抗原血凝滴度参考品在加入裂解剂之前需要用0.5mL灭菌注射用水复溶，得流感病毒抗原血凝滴度参考品溶液。5.根据权利要求4所述的一种流感病毒抗原样品血凝滴度的检测方法，其特征在于，所述裂解剂选自Triton X
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100、聚山梨酯80、Triton N101或ZWITTERGENT
®3‑
14 Detergent中的任一种。6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏文全，闫秀琦，任克达，于艳，孙非非，杨俊伟，毛昱，吴琼，廖辉，周荔葆，高军，张庶民，
申请(专利权)人：辽宁成大生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：