电化学检测尿酸的试剂及电化学尿酸试条的制备方法技术

本发明专利技术提供电化学检测尿酸的试剂和含所述试剂的电化学尿酸试条的制备方法。电化学检测尿酸的试剂包括生物活性组分、抗坏血酸消除剂、电子介体、血红蛋白脱氧剂、高分子化合物、稳定剂、表面活性剂和缓冲液，所述血红蛋白脱氧剂为过硫酸钠。本发明专利技术的试条不需要抗坏血酸氧化酶的参与，仅通过试剂层添加一定量的抗坏血酸消除剂就可以实现去抗坏血酸干扰影响的效果；另外，本发明专利技术试条通过在反应试剂层添加一定量的血红蛋白脱氧剂，使得该基于尿酸氧化酶体系的试条受氧分压影响小且使用温度范围宽泛。最后该试条的制备方法简单，容易实现批量化的生产。量化的生产。量化的生产。

【技术实现步骤摘要】
电化学检测尿酸的试剂及电化学尿酸试条的制备方法


[0001]本专利技术属于生化检测
，具体涉及电化学检测尿酸的试剂及电化学尿酸试条的制备方法。

技术介绍

[0002]尿酸是人体内嘌呤代谢过程中的废弃物。人体内尿酸水平是由其合成与清除之间的平衡来决定的。血尿酸水平升高是高尿酸血症和痛风及其相关合并症发生、发展的根本原因。血尿酸长期达标，可明显减少痛风发作频率，预防痛风石形成，防止骨破坏，降低死亡风险及改善患者生活质量，是预防痛风及其相关合并症的关键。因而，建立一种简单、快速的方法来检测血样中尿酸的浓度，对于临床中相关疾病的预防、诊断以及监测具有重要的意义。
[0003]目前，已经报道的测定尿酸的方法主要有：高效液相色谱法、化学发光法、电化学法等。在这些方法中，电化学方法因具有灵敏度高、反应时间短、操作简便等优点而在体外快速检测产品中广泛应用。基于电化学方法的尿酸试条分为无酶反应法和酶反应法。其中，无酶反应法主要利用正电压下尿酸在工作电极表面的氧化反应来实现对尿酸的检测。采用该种方法无需尿酸氧化酶参与反应，反应不受酶活性大小的影响。然而使用该方法测定尿酸时，一些具有氧化还原性的物质在测试时都会有干扰，如抗坏血酸、多巴胺、对乙酰氨基酚等。尽管部分专利，如专利CN102507670A、专利CN108303454A等，通过引用抗坏血酸氧化酶来解决血样中抗坏血酸干扰的影响，但依然很难解决其它氧化还原性物质的影响，尤其是对乙酰氨基酚的影响。酶反应法主要利用尿酸氧化酶对尿酸的特异性催化来实现对尿酸的检测。为解决氧化还原性干扰物的影响问题，目前较常用的酶反应法是尿酸氧化酶和过氧化氢酶双酶催化法，即尿酸在尿酸氧化酶的作用下产生双氧水，双氧水继续在过氧化氢酶作用下氧化还原型催化剂，生成的氧化型催化剂在较负电压下产生相应的响应电流。该种方法由于催化反应电位较负，可以规避到大多数氧化还原性干扰物质的影响。但该方法产生的双氧水容易与血液中的抗坏血酸反应，影响测试结果的准确度。专利CN101349667A中专利技术的传感器通过在电极表面涂覆混合酶层来降低干扰物的影响，混合酶层中包含催化待测生理活性物质氧化的脱氢酶和消除干扰用的氧化酶。该方法引入了消除干扰的抗坏血酸氧化酶，一方面无疑提升了试条成本，另一方面多种活性酶引入也增加试条不稳定性问题，如试条精密度降低，响应电流灵敏度降低、检测线性范围变窄等。另外，基于尿酸氧化酶的酶反应法还受样品中氧分压的影响，进而还会影响试条的温度适用范围。

技术实现思路

[0004]因此，为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种电化学检测尿酸的试剂，所述试剂包括生物活性组分、抗坏血酸消除剂、电子介体、血红蛋白脱氧剂、高分子化合物、稳定剂、表面活性剂和缓冲液，所述血红蛋白脱氧剂为过硫酸钠。
[0005]在一种实施方式中，所述抗坏血酸消除剂为3
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酰胺基
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2,2,5,5
‑
四甲基吡咯
‑
氮氧
化物、2,2,6,6
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四甲基哌啶
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氮氧化物(TEMPO)及其衍生物，优选地为4
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羟基
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2,2,6,6
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四甲基哌啶
‑
氮氧化物、4
‑
羧基
‑
2,2,6,6
‑
四甲基哌啶
‑
氮氧化物，更优选地为4
‑
羧基
‑
2,2,6,6
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四甲基哌啶
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氮氧化物。
[0006]在一种实施方式中，所述生物活性组分为尿酸氧化酶和过氧化氢酶，所述电子介体为亚铁氰化钾、二茂铁或二茂铁衍生物、锇类或锇类衍生物、硫堇、吩噻嗪、导电石墨、碳纳米管中的一种或几种，优选地为亚铁氰化钾和石墨；所述稳定剂为蛋白质分子和/或糖醇类物质中的一种或者多种组合，优选地所述蛋白质分子为牛血清白蛋白、胶原蛋白分子中的一种，所述糖醇类物质为甘露醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇中的一种或几种；所述高分子化合物至少包含一种可溶性纤维类高聚物，优选羟乙基纤维素；所述表面活性剂为曲拉通X
‑
100，所述缓冲溶液为PBS溶液。
[0007]在一种实施方式中，所述尿酸氧化酶浓度为0.5
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2.0IU，所述HRP为0.01
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0.1IU，所述TEMPO
‑
OH质量浓度为0.05
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0.15g/mL、亚铁氰化钾质量浓度为0.1
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30.3g/mL、过硫酸钠质量浓度为0.05
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0.15g/mL、海藻糖质量浓度为0.05
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0.15g/mL、石墨质量浓度为0.05
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0.15g/mL、牛血清白蛋白质量浓度为0.01
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0.1g/mL、羟乙基纤维素质量浓度为0.01～0.05g/mL，曲拉通X
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100质量浓度为0.02
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0.12g/mL
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和PBS缓冲液质量浓度0.07
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0.21g/mL。
[0008]在一种实施方式中，所述尿酸氧化酶浓度为1.0IU，所述HRP浓度为0.05IU，所述TEMPO
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OH质量浓度为0.01g/mL、亚铁氰化钾质量浓度为0.02g/mL、过硫酸钠质量浓度为0.01g/mL、海藻糖质量浓度为0.01g/mL、石墨质量浓度为0.15g/mL、牛血清白蛋白0.05g/mL、羟乙基纤维素质量浓度为0.03g/mL、曲拉通X
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100质量浓度为0.06g/mL和PBS缓冲液质量浓度为0.14g/mL。
[0009]在一种实施方式中，提供一种电化学尿酸试条的制备方法，所述方法包括：
[0010]步骤1：在绝缘基底一侧制作工作电极和对电极，所述工作电极和所述对电极的一侧分别向绝缘基底的另一侧引出工作电极的导线部分和对电极的导线部分，在两个导线部分的末端再分别引出连接外接仪器的工作电极接触垫和对电极接触垫；
[0011]步骤2：在上述制备有电极的基底上制备电绝缘层，所述电绝缘层覆盖除所述工作电极接触垫、所述对电极接触垫、所述工作电极和所述对电极外的其余部分；
[0012]步骤3：在上述制备有电极的基底上制备电绝缘层，所述电绝缘层覆盖除所述工作电极接触垫、所述对电极接触垫、所述工作电极和所述对电极外的其余部分；
[0013]步骤4：在所述制备好的所述工作电极上制备试剂层，所述试剂层包括权利要求1
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5任一所述的电化学检测尿酸的试剂。试剂层可以通过喷涂或者丝网印刷方法固定在工作电极反应区，优选为丝网印刷法。
[0014]在一种实施方式中，在所述工作电极的两侧的电绝缘层上分别粘贴粘合片一和粘合片二，粘合片一和粘合片二的内侧分别粘齐两侧的电绝缘层的内侧；亲水盖片整体覆盖所述粘合片一和所述粘合片二，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.电化学检测尿酸的试剂，其特征在于，所述试剂包括生物活性组分、抗坏血酸消除剂、电子介体、血红蛋白脱氧剂、高分子化合物、稳定剂、表面活性剂和缓冲液，所述血红蛋白脱氧剂为过硫酸钠。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述抗坏血酸消除剂为3
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酰胺基
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2,2,5,5
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四甲基吡咯
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氮氧化物、2,2,6,6
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四甲基哌啶
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氮氧化物(TEMPO)及其衍生物，优选地为4
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羟基
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2,2,6,6
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四甲基哌啶
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氮氧化物、4
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羧基
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2,2,6,6
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四甲基哌啶
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氮氧化物，更优选地为4
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羧基
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2,2,6,6
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四甲基哌啶
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氮氧化物。3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述生物活性组分为尿酸氧化酶和过氧化氢酶，所述电子介体为亚铁氰化钾、二茂铁或二茂铁衍生物、锇类或锇类衍生物、硫堇、吩噻嗪、导电石墨、碳纳米管中的一种或几种，优选地为亚铁氰化钾和石墨；所述稳定剂为蛋白质分子和/或糖醇类物质中的一种或者多种组合，优选地所述蛋白质分子为牛血清白蛋白、胶原蛋白分子中的一种，所述糖醇类物质为甘露醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇中的一种或几种；所述高分子化合物至少包含一种可溶性纤维类高聚物，优选羟乙基纤维素；所述表面活性剂为曲拉通X
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100，所述缓冲溶液为PBS溶液。4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述尿酸氧化酶浓度为0.5
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2.0IU，所述HRP为0.01
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0.1IU，所述TEMPO
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OH质量浓度为0.05
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0.15g/mL、亚铁氰化钾质量浓度为0.1
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0.3g/mL、过硫酸钠质量浓度为0.05
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0.15g/mL、海藻糖质量浓度为0.05
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0.15g/mL、石墨质量浓度为0.05
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0.15g/mL、牛血清白蛋白质量浓度为0.01
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0.1g/mL、所述高分子化合物质...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵敏玲，赵俊才，夏桂芳，徐月，李元光，
申请(专利权)人：北京怡成生物电子技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：