抗H1N1流感病毒核蛋白单克隆抗体ZJU-NP-A1及其在检测中的应用制造技术

本发明专利技术提供抗H1N1流感病毒核蛋白单克隆抗体ZJU

【技术实现步骤摘要】
抗H1N1流感病毒核蛋白单克隆抗体ZJU
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NP
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A1及其在检测中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及抗H1N1流感病毒核蛋白单克隆抗体的制备及应用，是利用细胞工程、抗体工程技术，获得分泌抗核蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，通过同品系的小鼠诱导腹水，制备抗核蛋白的单克隆抗体ZJU
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NP
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A1，鉴定为IgG2a、κ型，再通过亲和纯化、电泳、免疫等技术实现对该抗体的应用。

技术介绍

[0002]自2009年甲型H1N1流感爆发以来，其已成为全球包括我国的主要流感病毒毒株，是WHO和FDA等国际组织倡导的全球应共同防控的疫情，甲型H1N1流感感染后易发展为重症病例，对人类的生命健康造成严重威胁。目前治疗H1N1流感方法主要是神经氨酸酶抑制剂(奥司他韦)。而早期治疗成为关键，在症状出现超过5天后才开始抗病毒治疗时，死亡风险增加。因此，快速准确的诊断对降低病死率至关重要。
[0003]对于甲型流感病毒不同亚型的检测，目前已有多种方法，基于检测标靶物的不同，这些方法又分为病毒分离检测，核酸检测，抗原检测，抗体检测等。但是上述方法都需要特殊设备和条件，对于某些条件落后的地区并不适合。因而开发一种快速、灵敏、廉价的H1N1病毒检测产品势在必行，这能促进更早更广泛的发现H1N1感染，减少重症病例发生，降低病死率。
[0004]综上所述，开发H1N1流感病毒单克隆抗体，用于快速灵敏检测方法的建立迫在眉睫。基于以上背景，本项目选定核蛋白为靶抗原，采用融合杂交瘤技术建立稳定分泌抗核蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并大量制备、纯化和鉴定这些单克隆抗体。该单克隆抗体的成功获得，为建立新型的H1N1流感病毒病诊断方法——基于免疫学技术的诊断奠定物质基础。同时对疾病发病机理、预后及疗效判定等方面的研究起到重要作用。
[0005]本专利技术用到杂交瘤细胞技术。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以建立分泌均质抗体的杂交瘤细胞系，也称为单克隆抗体技术。该技术涉及到动物免疫、细胞培养、细胞融合、细胞克隆培养和免疫测定等一系列方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种抗H1N1流感病毒核蛋白单克隆抗体，能识别H1N1流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG2a、κ型，命名为ZJU
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NP
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A1，能特异性识别流感病毒的核蛋白。
[0007]序列如下：
[0008]SEQ ID No.1
[0009]Heavy chain:DNA sequence(360bp)
[0010]Signal sequence
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FR1
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CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4
[0011]GACGTGAGGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTTACTATACCATGTCTTGGGTTCGCCAGACTCCGGAGAAGAGGCTGGAGTGGGTCGC
AACCATTAGTTATGGTGATAGTTCGACCTTCTATCCAGACAGTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCGAGAACACCCTGTACCTGGTAATGACCAGTCTGAAGTCTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTACAAGAGCGTCTTTCGACGGGGCCGCCTGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
[0012]SEQ ID No.2
[0013]Heavy chain:Amino acid sequence(120AA)
[0014]Signal peptide
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FR1
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CDR1
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FR2
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CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4
[0015]DVRLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSYYTMSWVRQTPEKRLEWVATISYGDSSTFYPDSVKGRFTISRDNAENTLYLVMTSLKSEDTAMYYCTRASFDGAAWFAYWGQGTLVTVSA
[0016]SEQ ID No.3
[0017]Light chain:DNA sequence(339bp)
[0018]Signal sequence
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FR1
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CDR1
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FR2
‑
CDR2
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FR3
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CDR3
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FR4
[0019]GACATTGTGATGACACAGTCTCCACCCTCCCTGAGTGTGTCAGCAGGAGAGAAGGTCACTATGAGCTGCAAGTCCAGTCAGAGTCTGTTAAGTAGTGGAAATCAAAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCTAAACTGTTGATCTACGGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGAACCGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTGTGCTGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGAATGAGCATAGTTATCCGTATACGTTCGGAGGGGGGATCAAGCTGGAAATAAAA
[0020]SEQ ID No.4
[0021]Light chain:Amino acid sequence(113AA)
[0022]Signal peptide
‑
FR1
‑
CDR1
‑
FR2
‑
CDR2
‑
FR3
‑
CDR3
‑
FR4
[0023]DIVMTQSPPSLSVSAGEKVTMSCKSSQSLLSSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVLAEDLAVYYCQNEHSYPYTFGGGIKLEIK
[0024]本专利技术的第二个目的提供抗H1N1流感病毒核蛋白单克隆抗体的制备方法，通过以下步骤和技术方案实现：
[0025](1)动物的免疫：选择6周龄的BALB/C小鼠，以纯化的H1N1流感病毒核蛋白对小鼠进行免疫。
[0026](2)小鼠骨髓瘤细胞的培养：培养小鼠骨髓瘤细胞SP2/0并使本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗H1N1流感病毒核蛋白单克隆抗体ZJU
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NP
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A1，该单克隆抗体亚型为IgG2a、κ型，能与流感病毒核蛋白抗原特异结合。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体ZJU
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NP
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A1，其特征在于：抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体ZJU
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NP
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A1，其特征在于：所述抗体由杂交瘤细胞产生。4.根据权利要求3所述的单克隆抗体ZJU
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NP
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A1，其特征在于：由免疫的BALB/C小鼠脾淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0经融合、筛选、克隆、传代和反复冻存、复苏后获得的杂交瘤细胞系ZJU

【专利技术属性】
技术研发人员：吴南屏，张筱荻，吴海波，杨帆，姚航平，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：