一种新鲜植物样品中ACC的测定方法技术

本发明专利技术提供一种新鲜植物样品中氨基环丙烷羧酸(ACC：l

【技术实现步骤摘要】
一种新鲜植物样品中ACC的测定方法


[0001]本专利技术属于植物激素测定
，具体涉及一种新鲜植物样品中ACC的测定方法。

技术介绍

[0002]植物激素通常为小分子有机化合物，在植物生长发育中发挥重要作用。乙烯是传统的六大类植物激素之一，对植物的生命活动起着重要的调节作用，从种子萌发到果实成熟等一系列的生命过程，几乎都有乙烯的踪迹，如促进果实的成熟，加速叶、花及果实的脱落，诱导雌花的分化以及增加木本植物的乳液排泌等。但是乙烯是一种气体，要准确测定相当困难。而ACC是乙烯的前体物质，且是一种比较稳定的小分子有机化合物，如果能通过准确测定植物组织中ACC的含量，就可以推断出各植物组织中乙烯的准确含量。这样，即简化了乙烯测定的实验步骤，又能得到准确的实验结果。而文献报道的ACC的测定方法主要有：液相色谱
‑
质谱法[Nancy Chauvaux，Walter Van Dongen，Eddy L.Esmans，Henri A.Van Onckelen.Quantitative analysis of 1
‑
aminocyclopropane
‑1‑
carboxylic acid by liquid chromatography coupled to electrospray tandem mass spectrometry.Journal of Chromatography A.775(1997)143
–
150]气相色谱
‑
质谱法[Rafael Smets，Veerle Claes，Henri A.Van Onckelen，Els Prinsen*.Extraction and quantitative analysis of 1
‑
aminocyclopropane
‑1‑
carboxylic acid in plant tissue by gas chromatography coupled to mass spectrometry.Journal of Chromatography A,993(2003)79
‑
87]等。
[0003]但是，这些方法的前处理方法比较复杂，并且需要做衍生化。

技术实现思路

[0004]为避免上述现有技术所存在的不足，本专利技术提供一种新鲜植物样品中ACC的测定方法。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种新鲜植物样品中ACC的测定方法，包括如下步骤：
[0007](1)取研磨好的新鲜植物样品，加入ACC同位素内标，然后加入溶剂提取液超声混匀、旋涡振荡，得到ACC提取液，并冷冻离心浓缩至干；
[0008](2)对步骤(1)所得的ACC提取液复溶后，以有机溶剂作为萃取剂进行除杂，进而得到植物样品中ACC的待测溶液，从而实现植物样品中ACC的前处理；
[0009](3)将步骤(2)所得的ACC待测溶液冷冻离心浓缩至干，用溶剂复溶后过滤，通过超高效液相色谱
‑
三重四极杆质谱法进行检测。
[0010]进一步地，所述步骤(3)中，色谱检测条件为：色谱柱为Universil AQ
‑
C
18
柱，150
×
1.8mm，2.2μm，流动相A为0.05％的乙酸水溶液，流动相B为甲醇；质谱检测条件为：电喷雾电离源，扫描方式为正离子扫描，检测方式为多反应监测。
[0011]进一步地，所述步骤(1)中的新鲜植物样品重量为100mg，所述溶剂提取液为80～100％的乙腈，所述新鲜植物样品与所述溶剂提取液的质量比为10:1。
[0012]进一步地，所述步骤(1)中的ACC同位素内标为0.2μg l
‑
Aminocyclopropane
‑
2,2,3,3
‑
d4
‑
carboxylic Acid。
[0013]进一步地，所述步骤(1)中旋涡振荡时间为1小时。
[0014]进一步地，所述步骤(2)中使用的复溶剂为超纯水，体积为200μL；所述萃取剂为乙酸乙酯、正己烷或石油醚中的一种。
[0015]进一步地，所述步骤(3)中的复溶剂为80％乙腈，体积为100μL。
[0016]进一步地，所述步骤(3)中过滤使用的滤膜为0.22μm孔径的尼龙膜。
[0017]进一步地，所述步骤(3)中色谱检测条件为：进样体积为5μL；柱温为30℃；流速为0.2mL
·
min
‑1；流动相A为0.05％的乙酸水溶液，流动相B为甲醇，按照下表梯度洗脱：
[0018][0019][0020]进一步地，所述步骤(3)中质谱检测条件为：
[0021]DL温度为150℃，Heat Block温度为400℃，Nebulizing Gas流速为3L.min
‑1，Grying Gas流速为12L.min
‑1；毛细管电压为4.5kV；荷质比和MRM参数如下表：
[0022][0023]所述新鲜植物样品可以是各种果实，且需要研磨成粉末状或匀浆。
[0024]步骤(2)优选地步骤为：首先除去步骤(1)所得ACC提取液中的溶剂，用超纯水复溶后加入乙酸乙酯萃取除杂，水相冷冻离心浓缩至干，然后用80％的乙腈复溶，即为ACC的待测溶液。
[0025]本专利技术在上述前处理方法的基础上还提供了一种新鲜植物样品中ACC的定量检测方法；将通过该前处理方法所得的植物样品中的ACC样品溶液，通过分析仪器采集信号，采用内标法定量，从而得到样品中的ACC含量。
[0026]按照上述方案，分析仪器可以是液相色谱仪、液相色谱
‑
质谱联用仪等。优选地，采用超高效液相色谱
‑
电喷雾离子源
‑
三重四级杆质谱联用仪。
[0027]具体地，一种新鲜植物样品中氨基环丙烷羧酸(ACC)的超高效液相色谱
‑
三重四极杆质谱测定方法，具体操作步骤如下：
[0028]1)精确称取ACC、D4‑
ACC(ACC的同位素内标)标准品用适量水溶解，均配制成浓度为1000μg
·
mL
‑1的标准母液，然后各取适量配制成15μg
·
mL
‑1和2μg
·
mL
‑1的单标溶液，溶剂为80％乙腈，放置于
‑
20℃冰箱中密封保存备用；
[0029]2)从步骤1)取适量单标溶液混合，配制成含有ACC浓度分别为1500ng
·
mL
‑1、750ng
·
mL
‑1、300ng
·
mL
‑1、150ng
·
mL
‑1、75ng
·
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
Gas流速为12L.min
‑1；毛细管电...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖浪涛，童建华，赵文魁，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：