敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。本发明专利技术通过敲低CLEC4D能够抑制CLEC4D蛋白表达，改善心肌缺血再灌注后心功能，降低心肌缺血再灌注后心脏纤维化，改善心肌缺血再灌注后心肌细胞肥大。心肌缺血再灌注后心肌细胞肥大。心肌缺血再灌注后心肌细胞肥大。

【技术实现步骤摘要】
敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。

技术介绍

[0002]心肌缺血再灌注损伤指冠状动脉部分或完全急性阻塞后，在一定时间又重新获得再通时，缺血心肌虽然得以恢复正常灌注，但其组织损伤反而呈进行性加重的病理过程。缺血期引起的心肌超微结构、能量代谢、心功能和电生理等一系列损伤性变化，在血管再通后表现得更为突出，甚至可发生严重的心律失常而导致猝死。心内直视手术、冠状动脉搭桥术、冠状动脉腔内成形术、溶栓术后以及心肌内侧支循环血量突然增加等情况下，都可发生心肌缺血后再灌注损伤。对其发生机制认为主要与细胞内氧自由基的大量产生、钙离子超负荷、白细胞的炎症作用及高能磷酸化合物缺乏等有关。除了心脏，缺血再灌注损伤还可见于脑、肺、肝、胰、肾及胃肠道等器官。
[0003]C型凝集素结构域家族4成员D(C
‑
type lectin domain family 4member D,CLEC4D)基因，其表达的蛋白属于C型凝集素受体，可作为固有免疫细胞上的模式识别受体，识别核苷酸、糖类、脂多糖、以及其他病原体成分和自身配体，通过细胞粘附、细胞
‑
细胞信号传导、内吞抗原、糖蛋白转换等方式，诱发原始宿主防御的复杂信号级联反应，释放炎症细胞因子、炎症趋化因子、诱导免疫应答，对体内平衡和宿主抗病原菌中起重要作用。
[0004]目前，CLEC4D蛋白在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制尚未有任何相关的研究和报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用，增加CLEC4D的医药用途。
[0006]本专利技术提供了敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。
[0007]优选的，所述心肌缺血再灌注损伤包括心室病理性重构和/或心力衰竭。
[0008]优选的，所述试剂包括敲低CLEC4D基因表达的shRNA。
[0009]优选的，所述shRNA的正链核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反链核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]优选的，所述试剂包括CLEC4D抑制剂。
[0011]优选的，所述CLEC4D抑制剂的活性成分包括AAV
‑
shCLEC4D。
[0012]优选的，所述药物还包括药学可接受的辅料。
[0013]优选的，所述药学可接受的辅料选自缓冲剂、包囊剂、填充剂、粘合剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂和吸附载体中的一种或多种
组合。
[0014]本专利技术提供了一种心肌缺血再灌注损伤药物，所述药物的有效成分包括敲低或抑制CLEC4D的试剂。
[0015]本专利技术提供了敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。动物实验表明，敲低CLEC4D能够改善心肌缺血再灌注后心功能，降低心肌缺血再灌注后心脏纤维化，改善心肌缺血再灌注后心肌细胞肥大。本专利技术首次明确CLEC4D能够改善心肌缺血再灌注损伤和/或心力衰竭，为心肌缺血再灌注损伤和/或心力衰竭的诊断及治疗提供新的防治药物研发途径和药物作用靶点，具有十分重要的药用价值。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0017]图1为干扰载体pHBAAV
‑
U6
‑
MCS
‑
CMV
‑
EGFP载体图谱；
[0018]图2为AAV9
‑
shCLEC4D测序结果；
[0019]图3为敲低CLEC4D干预心肌缺血再灌注损伤小鼠心功能的超声心动图检测结果；
[0020]图4为RT
‑
qPCR动物水平验证AAV9
‑
shCLEC4D效率结果；
[0021]图5为敲低CLEC4D干预心肌缺血再灌注损伤小鼠心脏纤维化的马松染色结果；
[0022]图6为敲低CLEC4D干预心肌缺血再灌注损伤小鼠心肌细胞横截面积的HE染色结果；
[0023]图7为敲低CLEC4D干预心肌缺血再灌注损伤小鼠心肌细胞横截面积的WGA染色结果。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。
[0025]在本专利技术中，所述心肌缺血再灌注损伤优选包括心室病理性重构和/或心力衰竭。本专利技术所述心肌缺血再灌注优选包括心血管疾病诱发的心肌缺血再灌注。
[0026]在本专利技术中，所述试剂优选包括敲低CLEC4D基因表达的shRNA。本专利技术所述敲低CLEC4D基因表达的shRNA的正链核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反链核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0027]本专利技术所述各核苷酸序列的碱基序列，从5
’‑3’
依次如下：
[0028]SEQ ID NO.1：AATTCGCTTCCAGTCTAACTGTTACTTCTCGAGAAGTAACAGTTAGACTGGAAGTTTTTTG；
[0029]SEQ ID NO.2：GATCCAAAAAACTTCCAGTCTAACTGTTACTTCTCGAGAAGTAACAGTTAGACTGGAAGCG。
[0030]本专利技术所述shRNA存在茎环(5
’‑
CTCGAG
‑3’
)结构，将反向重复序列分隔开，形成发夹结构，从而达到敲低CLEC4D基因表达的效果。
[0031]在本专利技术中，所述试剂优选包括CLEC4D抑制剂。本专利技术所述CLEC4D抑制剂的活性成分优选包括AAV
‑
shCLEC4D，进一步优选为AAV9
‑
shCLEC4D。本专利技术对所述AAV
‑
shCLEC4D的
来源没有严格要求，采用常规构建质粒的方式，将上述敲低CLEC4D基因表达的shRNA重组到腺病毒载体，得到重组腺病毒AAV9
‑
shCLEC4D即可。本专利技术所述腺病毒载体的优选为AAV9，更优选为pHBAAV
‑
U6
‑
MCS
‑
CMV
‑
EGFP。
[0032]得重组腺病毒AAV9
‑
shCLEC4D后，本专利技术优选对重组腺病毒AAV9
‑
shCLEC4D进行包装。本专利技术对所述包装的方式不做具体的限定，将重组腺病毒AAV9
‑
shCLEC4D的滴度确定为1
×
10
11
～1
×
10
12
个病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.敲低或抑制CLEC4D的试剂在制备心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述心肌缺血再灌注损伤包括心室病理性重构和/或心力衰竭。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括敲低CLEC4D基因表达的shRNA。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述shRNA的正链核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反链核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括CLEC4D抑制剂。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖俊杰，周秋莲，刘利，孟丹妮，
申请(专利权)人：上海大学，
类型：发明
国别省市：