本发明专利技术公开了一种重组改性ULP1蛋白酶及其制备方法，所述蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述蛋白酶的制备方法包括如下步骤：构建所述蛋白酶的载体；构建基因工程菌并进行培养得所述蛋白酶；进行所述蛋白酶的纯化。本发明专利技术公开的这种重组改性ULP1蛋白酶可以有效地进行切除SUMOstar标签。有效地进行切除SUMOstar标签。有效地进行切除SUMOstar标签。
【技术实现步骤摘要】
一种重组改性ULP1蛋白酶及其制备方法
[0001]本专利技术属于生物
，具体而言属于一种重组改性ULP1蛋白酶及其制备方法。
技术介绍
[0002]近年来，重组蛋白表达技术日新月异，蛋白融合表达技术的优势越发突显，SUMO标签由于其具有良好的促融促表达效果，已经广泛运用于现在重组蛋白的表达，但融合蛋白的表达，最终需要切除融合标签，目前原核表达系统常用的是基于酵母的SUMO
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ULP1体系，但由于真核宿主本身会表达ULP1的同源蛋白酶，会造成融合蛋白在真核系统使用时，表达过程中就会将融合标签切除，针对这个问题，已有研究者开发出了相应的SUMO标签的突变体SUMOstar，但该突变体不能用ULP1蛋白酶切除，因此亟需一种可以切除所述突变标签的蛋白酶。
[0003]有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种重组改性ULP1蛋白酶，所述蛋白酶是通过在现有的ULP1蛋白酶基础上通过某些位点的突变而得到的，其可以用于SUMOstar标签的切除。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供上述重组改性ULP1蛋白酶的制备方法，提供的本方法用于制备上述蛋白酶，该方法操作简单，成本低廉，可以有效的制备上述蛋白酶，适用于推广应用。
[0006]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0007]本专利技术公开的重组改性ULP1蛋白酶氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。其中相较于原ULP1蛋白酶，本专利技术的蛋白酶氨基酸序列为第54号氨基酸突变为Arg氨基酸。
[0008]并且本专利技术还提供了一种试剂盒，其包含了上述重组改性ULP1蛋白酶。
[0009]本专利技术还提供了编码该蛋白酶的核酸。
[0010]本专利技术还提供了核酸的载体。
[0011]本专利技术提供的蛋白酶的制备方法包括如下步骤：
[0012]首先构建所述重组改性ULP1蛋白酶。也即是运用定点突变技术对ULP1蛋白酶表达载体进行突变，并筛选突变成功的重组转化子，进行测序验证其序列是否符合要求。
[0013]构建所述重组改性ULP1蛋白酶的基因工程菌，并对所述基因工程菌进行克隆培养可得所述蛋白酶。
[0014]培养结束后进行所述蛋白酶的纯化。
[0015]其中构建基因工程菌包括如下步骤：
[0016]首先转化感受态细胞BL21(DE3)，转化成功后挑选含有重组质粒的转化后细胞进行接种至培养基培养，在37℃，220rpm的条件下进行初步培养，初步培养结束后，将细胞进行1：100的放大培养，培养条件依然是37℃，220rpm。
[0017]放大培养至一定条件后，降温至10℃
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25℃，优选为16℃，降温持续时间为0.5
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2h，优选为1h；使用IPTG进行诱导，诱导时间为18h
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22h，优选为20h；而后，在8000rpm转速下离心5min
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10min，优选为8min，收集菌体，并放置于
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80℃保存。
[0018]所述蛋白酶的纯化包括如下步骤：
[0019]对所述基因工程菌依次进行重悬、菌体破碎和离心后，过滤得粗酶液，使用亲和层析和离子交换层析对所述粗酶液进行纯化。
[0020]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0021](1)可以有效的切除SUMO标签的突变体SUMOstar标签。
[0022](2)制备方法简单便捷，利于操作，成本低。
具体实施方式
[0023]下面将结合具体实施方式对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0024]本专利技术中所使用的术语“含有”、“包含”和“包括”是同义词，其是包容性或开放式的，不排除额外的、未被引述的成员、元素或方法步骤。
[0025]本专利技术中用端点表示的数值范围包括该范围内所包含的所有数值及分数，以及所引述的端点。
[0026]本专利技术中涉及浓度数值，其含义包括在一定范围内的波动。比如，可以在相应的精度范围内波动，比如2％，可以允许
±
0.1％范围内波动。对于数值较大或无需过于精细控制的数值，还允许其含义包括更大波动，比如100mM，可以允许
±
1％、
±
2％、
±
5％等范围内的波动。涉及分子量，允许其含义包括
±
10％的波动。
[0027]本专利技术中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
[0028]本专利技术中，“优选”、“更好”、“更佳”、“为宜”仅为描述效果更好的实施方式或实施例，应当理解，并不构成对本专利技术保护范围的限制。
附图说明
[0029]通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本专利技术的限制。而且在整个附图中，用相同的参考符号表示相同的部件。在附图中：
[0030]图1为本专利技术实施例提供的亲和层析纯化电泳示意图；其中图1中1为Pellet of cell lysate破菌离心后沉淀；2为Supernatant of cell lysate破菌离心后上清液；3为Flow through Ni柱纯化后流穿组分；4为Wash fraction with 20mM imidazole使用20mM咪唑洗脱后组分；5、6、7分别为Elute fraction with 30mM imidazole、Elute fraction with 50mM imidazole、Elute fraction with 250mM imidazole也即是使用30mM、50mM、
250mM咪唑洗脱后组分；M为Marker；
[0031]图2为本专利技术实施例提供的离子交换层析纯化电泳示意图；其中图2中1为Before loaded onto HiTrap Q 10ml纯化前样品；8
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18、27
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28、40
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41、52、62分别为Elute fraction of Peak 1、Elute fraction of Peak 2、Elute fraction of Peak 3、Elute fraction of Peak 4、Elute fraction of Peak 5，均为洗脱样品；
[0032本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种重组改性ULP1蛋白酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的重组改性ULP1蛋白酶。3.编码权利要求1所述蛋白酶的核酸。4.包含权利要求3所述核酸的载体。5.权利要求1所述的蛋白酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：构建所述蛋白酶的载体；构建基因工程菌并进行培养得所述蛋白酶；进行所述蛋白酶的纯化。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，构建基因工程菌包括如下步骤：转化感受态细胞；将转换后细胞进行培养；进行降温并诱导、离心收集菌体。7.根据权利要求5所述的方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨宇清，刘婷，沈坚，
申请(专利权)人：嘉兴维亚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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