一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物及应用制造技术

本发明专利技术公开了一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物及应用，所述标志物包括：STAT1、PON1、APOC1、APOC2中的至少一种，和IGHV4

【技术实现步骤摘要】
一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物及应用


[0001]本专利技术属于检测诊断
，具体涉及一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物及应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌(BC)是全世界最常见的癌症之一，占女性癌症的30％。自1970年代中期以来，由于治疗方案的改进，包括化疗、免疫治疗和靶向治疗的发展，死亡率长期下降。然而，在过去十年中，临床结果的改善放缓、肿瘤的转移和复发是导致死亡的主要原因。因此，早期发现对于乳腺患者的治愈和总体生存的改善具有重要临床价值。
[0003]目前，乳腺癌的诊断仍以影像学诊断为主(B超、乳房X线摄片、乳腺MRI等)，传统肿瘤标志物如癌胚抗原(CEA)和糖类蛋白肿瘤标志物CA153、CA125等特异度和灵敏度不高，无法用于乳腺癌患者的临床诊断。当前迫切需要高特异度与灵敏度的血液学诊断手段应用于临床。
[0004]与传统肿瘤组织活检相比，利用患者血液中检测到的生物学信息(如循环肿瘤细胞、循环游离DNA和外泌体)进行液体活检具有最小的侵袭性，减少并发症，并提高纵向监测能力。更重要的是，液体活组织检查比单一局部限制性活组织检查更具信息性，其提供了关于肿瘤异质性、克隆进化和所有癌细胞转移前发展的独特信息。
[0005]外泌体作为液体活检的手段之一，携带有乳腺癌发生发展的大量生物学信息(蛋白质、mRNA、淋巴结cRNA等)，为乳腺癌的诊断提供了良好的载体资源。目前尚无高特异度与灵敏度的患者血液外泌体分子分类器用于乳腺癌的早期临床诊断。

技术实现思路

[0006]为解决现有技术中尚无高特异度和灵敏度的患者血液外泌体分子用于乳腺癌临床诊断的问题，本专利技术提供一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物及应用，所述外泌体标志物组合对于区分乳腺肿瘤良恶性及健康人群的鉴别准确性高，可应用在制备用于鉴别乳腺肿瘤良恶性的诊断试剂、或制备用于乳腺癌的早期诊断试剂中。
[0007]基于上述，本专利技术首先提供了一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物，所述外泌体标志物包括：STAT1、PON1、APOC1、APOC2中的至少一种，和IGHV4
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39、IGHV3
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53、ADD2中的至少一种，以及MMP2。
[0008]优选地，所述外泌体标志物包括：STAT1、PON1、APOC1、APOC2、IGHV4
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39、IGHV3
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53、ADD2和MMP2。
[0009]本专利技术另一方面还提供了前面任一项所述的外泌体标志物在制备乳腺癌早期诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0010]优选地，所述的乳腺癌早期诊断为鉴定受试者的乳腺状况为健康或良性肿瘤或乳腺癌。
[0011]本专利技术另一方面还提供了一种乳腺癌早期诊断的试剂，所述试剂能够检测样本中
前面任一项所述的外泌体标志物的表达水平。
[0012]优选地，所述样本为血清样本。
[0013]优选地，所述试剂通过检测受试者血清中所述外泌体标志物的表达水平来判断受试者是否患有乳腺癌。
[0014]本专利技术另一方面还提供了一种乳腺癌早期诊断的试剂盒，所述试剂盒包括前面所述的试剂。
[0015]优选地，所述试剂盒还包括提取试剂和本专利技术所述的外泌体标志物的标准品。
[0016]相对于现有技术，本专利技术的有益效果是：
[0017](1)本专利技术通过sEVs蛋白质组分析及差异蛋白分析，从数千种蛋白中挖掘出一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物，所述外泌体标志物能够用于区分乳腺肿瘤良恶性及健康人群的检测和诊断。
[0018](2)本专利技术基于DIA MS分析、差异蛋白分析、分类器构建和验证等工作流程，挖掘并验证了一个由8个蛋白组成的分类器，该分类器特异度好、敏感度高，且高效实用、无创，易于医疗机构的临床推广，可以避免过度组织活检。
[0019](3)本专利技术提出的组合标志物不仅包括存在于乳腺癌sEVs中的蛋白，还包括那些富集在良性肿瘤和健康人群sEVs的蛋白，进一步支持癌症与非癌症区分的概念，提高了本专利技术标志物诊断乳腺癌、良性乳腺肿瘤和健康人群的特异度和灵敏度。
附图说明
[0020]图1为本专利技术提取和筛选乳腺癌早期诊断的外泌体标志物的流程和方法，其中，
[0021]A表示本专利技术筛选用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物的流程示意图；
[0022]B表示入组患者的临床数据总结；
[0023]C表示本专利技术提取血液中外泌体的操作流程。
[0024]图2为实施例1提取的外泌体的鉴定结果，其中，
[0025]A表示外泌体的NTA检测结果；
[0026]B表示外泌体的透射电镜图；
[0027]C表示外泌体相关外泌体标志物指标的表达情况。
[0028]图3为乳腺癌特异性蛋白质组学鉴定结果，其中，
[0029]A表示三类样本的sEVs中检测到的蛋白质数量的维恩图；
[0030]B表示在全球范围内检测到的蛋白质的动态范围跨越八个数量级。
[0031]图4为乳腺癌外泌体蛋白特异性富集通路分析结果，其中，
[0032]A表示167份样本里1734种蛋白的主成分分析(PCA)；
[0033]B表示三类样本各自生物学通路的部分差异表达蛋白的表达热图。
[0034]图5为实施例2分类器用于区分乳腺肿瘤良恶性及健康人群的检测结果；其中，
[0035]A表示该分类器的8种蛋白质的训练集(70％)和测试集(30％)的分类误差矩阵；
[0036]B表示受试者相关标志物的基因表达热图；
[0037]C表示该分类器对早期乳腺癌诊断效果的训练集ROC曲线；
[0038]D表示该分类器对早期乳腺癌诊断效果的测试集ROC曲线。
[0039]图6为实施例2中6种标志物蛋白的临床组织石蜡切片检测图。
具体实施方式
[0040]以下将结合附图和实施例对本专利技术的技术方案做进一步的说明。
[0041]术语说明
[0042]本专利技术所述“外泌体”“外泌体蛋白”“sEVs蛋白”“sEVs”可互换使用。
[0043]如前所述，鉴于现有技术的不足，本专利技术首先提供了一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物，所述外泌体标志物包括：STAT1、PON1、APOC1、APOC2中的至少一种，和IGHV4
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39、IGHV3
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53、ADD2中的至少一种，以及MMP2。其中：STAT1、PON1、APOC1 APOC2蛋白在良性乳腺肿瘤人群中富集；IGHV4
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39、IGHV3
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53、ADD2蛋白在健康人群中富集；MMP2蛋白在乳腺癌患者中富集。
[0044]优选地，所述外泌体标志物包括：STAT1、PON1、APOC1、APOC2、IGHV4
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39、IGHV3
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53、ADD2和MMP2。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物，其特征在于，所述外泌体标志物包括：STAT1、PON1、APOC1、APOC2中的至少一种，和IGHV4
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39、IGHV3
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53、ADD2中的至少一种，以及MMP2。2.如权利要求1所述的一组用于乳腺癌早期诊断的外泌体标志物，其特征在于，所述外泌体标志物包括：STAT1、PON1、APOC1、APOC2、IGHV4
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39、IGHV3
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53、ADD2和MMP2。3.权利要求1
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2中任一项所述的外泌体标志物在制备乳腺癌早期诊断试剂或试剂盒中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红霞，杜少倩，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：