一种酶标仪检测过氧化氢的方法技术

本发明专利技术涉及检测技术领域，尤其涉及一种酶标仪检测过氧化氢的方法。其包括以下步骤：将氮掺杂碳量子点溶液、四甲基联苯胺的乙醇溶液和pH3.2乙酸盐缓冲溶液的混合溶液中分成3份以上，分别加入不同浓度的过氧化氢溶液，在35℃下反应15～25min后移取到孔板中放入酶标仪中进行检测，制定标准曲线；在相同浓度的混合溶液中加入待测过氧化氢溶液，在35℃下反应15～25min后移取到孔板中放入酶标仪中进行检测，确定待测过氧化氢溶液的浓度。本发明专利技术的酶标仪检测过氧化氢的方法，由于采用氮掺杂量子点(N

【技术实现步骤摘要】
一种酶标仪检测过氧化氢的方法


[0001]本专利技术涉及检测
，尤其涉及一种酶标仪检测过氧化氢的方法。

技术介绍

[0002]过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)，俗称双氧水，一种应用领域极为广泛的强氧化剂。在环境治理中，H2O2常常用于处理工业和生活废水。但是过氧化氢用量过多也可能会造成环境污染，影响水体中微生物的正常生长代谢活动，一旦水体中的过氧化氢进入人体，就会危害人体健康。在人体中，H2O2以活性氧形式存在，参与人体多种生理代谢过程,高浓度的H2O2会扰乱人体正常代谢功能甚至造成细胞损伤。因此，过氧化氢的检测被赋予了重要的现实意义。目前对于过氧化氢的检测方法主要有滴定法、电化学法、光度法、荧光/化学发光法、折射率法和微波法。显色光度法通常使用四甲基联苯胺(TMB)作为显色剂来测定辣根过氧化物酶等，操作简单且具有高灵敏度和低检出限。但生物酶容易失活，成本高，寻找人工酶成为当前的研究热点。
[0003]碳量子点(CQDs)是一种新型的碳纳米荧光材料，具有制作成本低、生物稳定性良好，良好的光化学性能以及低细胞毒性的特点，尺寸通常约在10nm以下，并且在其表面含有丰富的含氧官能团，具有良好的亲水性能，可调控性强，可用于相关物质的检测。目前碳量子点的合成方法有水热合成法、电化学、化学氧化法等等，而微波法是一种省时省力、快速简便的制取方法，受到了研究者的广泛关注。如王诗琪等为探索制备掺氮碳点的快速制备采用微波法制备N
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CDs并用作探针检测铁离子。李满秀等采用微波法制备碳量子点与壳聚糖复合后用于槲皮素检测。
[0004]在公开号为CN202110468257.X的专利中公开了一种氮掺杂石墨烯量子点及其制备和检测过氧化氢的应用，其采用氮掺杂石墨烯量子点作为检测过氧化氢的阳极电化学发光探针。碳源化合物为1,3
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二硝基萘，掺杂剂为鲁米诺。

技术实现思路

[0005](一)要解决的技术问题
[0006]鉴于现有技术的上述缺点、不足，本专利技术提供一种氮掺杂碳量子点作为过氧化氢模拟酶的酶标仪检测过氧化氢的方法，是一种操作简单、成本低廉，快速的检测方法。
[0007](二)技术方案
[0008]为了达到上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：
[0009]第一方面，本专利技术实施例提供一种酶标仪检测过氧化氢的方法，其包括以下步骤：
[0010]S1标准曲线制备：将氮掺杂碳量子点溶液、四甲基联苯胺的乙醇溶液和pH3.2乙酸盐缓冲溶液的混合溶液中分成3份以上，分别加入不同浓度的过氧化氢溶液，在35℃下反应15～25min后移取到孔板中放入酶标仪中进行检测，制定标准曲线；
[0011]S2与步骤S1中相同浓度的混合溶液中加入待测过氧化氢溶液，在35℃下反应15～25min后移取到孔板中放入酶标仪中进行检测，确定待测过氧化氢溶液的浓度。
[0012]本专利技术酶标仪检测过氧化氢的方法可选地方案中，混合溶液中柠檬酸浓度为0.04～0.06g/ml，尿素浓度为0.02～0.04g/ml。
[0013]本专利技术酶标仪检测过氧化氢的方法可选地方案中，氮掺杂碳量子点的制备方法包括以下步骤：将柠檬酸和尿素的混合溶液在微波中微波2.5～4min，加入超纯水溶解，离心后取上清液，用0.22μm滤膜过滤，在置于1000Kd透析袋中透析得到的溶液经干燥得到氮掺杂碳量子点。
[0014](三)有益效果
[0015]本专利技术的有益效果是：本专利技术的酶标仪检测过氧化氢的方法，由于采用氮掺杂量子点(N
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CDs)作为过氧化氢模拟酶，以四甲基联苯胺(TMB)为显色剂，通过酶标仪进行定量过氧化氢检测，成本廉价、快速、简便、具有灵敏性和特异性，可用于检测水体中过氧化氢。
[0016]本专利技术由于采用柠檬酸和尿素的混合溶液制得氮掺杂碳量子点用于检测过氧化氢，其相对于CN202110468257.X的专利中所述的氮掺杂石墨烯量子点具有显著更好的稳定性。
附图说明
[0017]图1为四种不同微波时间得到的N
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CDs的紫外光谱吸收图；
[0018]图2为四种不同微波时间得到的N
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CDs的日常光下的碳点水溶液照片和在365nm紫外灯照射下的荧光显像照片；
[0019]图3为四种不同微波时间所得到的N
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CDs的紫外光谱吸收图；
[0020]图4为四种不同微波时间所得到的N
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CDs水溶液于傅里叶红外光谱中进行扫描得到的图谱；
[0021]图5为微波3.5min所得到的N
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CDs粉末的XRD表征图；
[0022]图6为微波4min所得到的N
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CDs粉末的XRD表征图；
[0023]图7为微波4min所得到的N
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CDs粉末的XPS表征图；
[0024]图8为微波4min所得到的N
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CDs粉末的C1s高分辨图谱；
[0025]图9为微波4min所得到的N
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CDs粉末的N1s高分辨图谱；
[0026]图10为微波4min所得到的N
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CDs粉末的O1s高分辨图谱；
[0027]图11为微波3.5min所得到的N
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CDs对过氧化氢的催化作用；
[0028]图12为不同微波时间的N
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CDs对过氧化氢的催化作用；
[0029]图13为不同N
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CDs浓度对过氧化氢的检测结果；
[0030]图14为不同TMB浓度对过氧化氢的检测结果；
[0031]图15为不同反应pH对过氧化氢的检测结果；
[0032]图16为不同反应温度对过氧化氢的检测结果；
[0033]图17为不同反应时间对过氧化氢的检测结果；
[0034]图18为紫外分光光度法测定过氧化氢浓度的颜色变化；
[0035]图19为紫外分光光度法测定0.5～200μmol/L过氧化氢浓度的标准曲线；
[0036]图20为紫外分光光度法测定0.5～2.5μmol/L过氧化氢浓度的标准曲线；
[0037]图21为紫外分光光度法测定100～200μmol/L过氧化氢浓度的标准曲线；图22为0.5～200μmol/L反应20min酶标仪测定H2O2和OD值之间的线性图；
[0038]图23为0.5～2.5μmol/L反应20min酶标仪测定H2O2和OD值之间的线性图；
[0039]图24为100～200μmol/L反应20min酶标仪测定H2O2和OD值之间的线性图；
[0040]图25为0.5～200μmol/L反应15min酶标仪测定H2O2和OD值之间的线性图；
[0041]图26为0.5～5μmol/L反应15min酶标仪测定H2O2和OD值之间的线性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种过氧化氢的检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：S1标准曲线制备：将氮掺杂碳量子点、四甲基联苯胺的乙醇溶液和pH3.2乙酸盐缓冲溶液的混合溶液中分成3份以上，分别加入不同浓度的过氧化氢溶液，在35℃下反应15～25min后移取到孔板中放入酶标仪中进行检测，制定标准曲线；S2与步骤S1中相同浓度的混合溶液中加入待测过氧化氢溶液，在35℃下反应15～25min后移取到孔板中放入酶标仪中进行检测，确定待测过氧化氢溶液的浓度。2....

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳君，方艺津，张剑平，
申请(专利权)人：福建技术师范学院，
类型：发明
国别省市：