一种优质蛹虫草栽培母种的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种优质蛹虫草栽培母种的制备方法，其中，所述制备方法包括：步骤1，野外采集标本；步骤2，组织块或子囊孢子分离菌种；步骤3，DNA鉴定；步骤4，菌丝形态显微观察；步骤5，驯化、杂交育种和实验室栽培；步骤6，适合大规模栽培；步骤7，缩短生长周期；步骤8，改善子实体生长性能；步骤9，提高转化率；步骤10，蛹虫草优良菌株；步骤11，蛹虫草栽培母种。本发明专利技术针对蛹虫草栽培菌株退化快的问题，通过野外采集标本、组织块或子囊孢子分离菌种、菌丝形态显微观察、DNA鉴定、驯化、杂交育种和实验室栽培等多种技术手段，筛选适于规模化栽培的蛹虫草优良菌株，改善子实体生长性能，提高转化率，缩短生长周期。短生长周期。

【技术实现步骤摘要】
一种优质蛹虫草栽培母种的制备方法


[0001]本专利技术涉及蛹虫草栽培
，具体为一种优质蛹虫草栽培母种的制备方法。

技术介绍

[0002]食用菌产业是集高效农业、循环农业、低碳农业和可持续农业特征于一体的现代农业产业，承载着保障食物供给、促进农民增收、实现农村循环经济、保障国民健康等国家重任，具有重要的战略意义；我国是食用菌栽培大国而非强国，长期科技研发的缺位，使得我国食用菌产业走上资源消耗型的规模扩张之路，形成了“经验多，科学少”。集中表现在自主知识产权品种匮乏，大宗种类总体上盗版品种为主，工厂化生产菌种长期依赖国外进口，已有品种品质亟待提升，珍稀品种驯化、选育、栽培技术落后等成为制约其发展的瓶颈，直接影响产业效益；目前全国各地包括内蒙出现了多家人工培植蛹虫草的厂家，但是多数则是家庭式的人工栽培，农民家庭式的小生产，科技含量低，规模小、利润少，产品的质量难以控制。
[0003]传统的蛹虫草人工栽培中，菌种长期以组织块分离为主，缺乏科学的育种方法，菌种退化严重；栽培方式以农村作坊式为主，生产缺乏规范，导致市场上的蛹虫草产品质量良莠不齐，主要表现在活性成分含量低，农残、重金属等食品安全问题日益突出，因此优质蛹虫草菌种和栽培技术研究势在必行。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种优质蛹虫草栽培母种的制备方法，旨在改善传统的蛹虫草人工栽培中，菌种长期以组织块分离为主，缺乏科学的育种方法，菌种退化严重；栽培方式以农村作坊式为主，生产缺乏规范，导致市场上的蛹虫草产品质量良莠不齐，主要表现在活性成分含量低，农残、重金属等食品安全的问题。
[0005]本专利技术是这样实现的：
[0006]一种优质蛹虫草栽培母种的制备方法，其中，所述制备方法包括：
[0007]步骤1，野外采集标本，所述采集标本需要携带的工具包括标本夹、采集袋、枝剪、标签、小刀等；
[0008]步骤2，组织块或子囊孢子分离菌种，对步骤1所采集的样本进行组织块或子囊孢子进行分离，并且分离下来的组织块和子囊孢子要进行分类存放；
[0009]步骤3，DNA鉴定，步骤2分离下来的子囊孢子进行DNA鉴定，并将鉴定的结果进行分类存放；
[0010]步骤4，菌丝形态显微观察，对步骤2分离下来的组织块放到电子显微镜下进行观察，并将所观察到的图像进行分类保存；
[0011]步骤5，驯化、杂交育种和实验室栽培，将采集到的样本按照随机组合的方式进行杂交育种，并将其放入到实验室进行栽培，并且在培育的过程种要给其提供合适的生长环境；
[0012]步骤6，适合大规模栽培，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将成活率较高的筛选出来；
[0013]步骤7，缩短生长周期，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将生长周期较短的筛选出来；
[0014]步骤8，改善子实体生长性能，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将子实体生长性能较好的筛选出来；
[0015]步骤9，提高转化率，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将转化率较高的筛选出来；
[0016]步骤10，蛹虫草优良菌株，通过对比步骤6、步骤7、步骤 8和步骤9，取其交集并单独筛选出来。
[0017]步骤11，蛹虫草栽培母种，将步骤10中筛选出来的蛹虫草进行单独培育。
[0018]进一步的，在步骤1中，所述采集标本的时间也要根据蛹草虫在不同时间段，生长状态不同的特点分开进行采集，蛹草虫的每个阶段都要采集到，另外不同位置生长的蛹草虫，生长状态也是不同的，需要进行不同地点的采集。
[0019]进一步的，在步骤2中，针对子囊孢子分离的方法采用多孢分离法，将多个孢子接种在同一培养基上使其萌发，随机自由交配，从而获得纯菌种的方法，所述多孢分离法包括斜面划线法和涂布分离法；斜面划线法在无菌条件下，用接种环蘸取少量的孢子，在斜面培养基上自下面上轻轻划线避免划破培养基表面；接种完毕，灼烧试管口，塞上棉塞，25℃恒温培养；待孢子萌发出菌丝，并自由配对结合后，挑选长势旺的菌落，转接于新的试管斜面上继续培养，即可得到纯菌种；涂布分离法按照无菌操作要求，用接种环蘸取少量的孢子，放入装有无菌水的三角瓶中，充分摇匀，制成孢子悬浮液；吸取孢子悬浮液，滴1
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2滴于斜面或平板培养基上，转动试管或培养皿使悬浮液均匀分布于培养基表面，或用接种环将培养基上的悬浮液涂布均匀。25℃恒温培养，挑选长势健壮、生长较快的菌落，移接于斜面培养基上培养，即可得到纯菌种。上述两种方法得到的纯菌种，必须进行出菇试验，从出菇的群体中选择优良个体，进行组织分离，方能获得在栽培生产中使用的菌种。
[0020]进一步的，在步骤3中，在做DNA鉴定的时候，首先需要取样，取样时要选取新鲜的部位，接着是磨样，在磨样时要加入液氮，最后时抽提，抽提时要选取上清液；因为如果选取老的部位时，会含有较多的多糖和酚类物质等杂质，这样加大了纯化的难度；在磨样的时候速度要快，另外需要用酚和氯仿抽提两次，而且在吸取上清液时，一定要小心，不要把白色物质吸入，另外在抽提的时候不要有大力振动，操作也要仔细，尽量避免DNA断裂。
[0021]进一步的，在步骤4中，包括如下步骤，分别是切片、制片、盖片和镜检；其中在切片的时候需要用镊子取一小块菌褶，并将其夹在胡萝卜切条中间，然后用刀片横切，切下的切片放入有蒸馏水的培养皿中，切片要求薄而均匀；在制片的时候，在载玻片中央滴半滴蒸馏水，挑取最薄的切片于载玻片水滴中；在盖片的时候需要用镊子夹盖玻片，避免产生气泡，并对其进行适当按压；在镜检的时候，需要将标本固定载物台上，并且在低倍镜下找到目标，然后使用高倍镜对其进行观察。
[0022]进一步的，在步骤5中，将蛹虫草菌株接种于蛹虫草栽培培养基中，通过4阶段培养条件控制，这4个阶段分别是发菌、原基分化、子实体生长和代谢产物积累；在发菌的过程中，需要让温度维持在15
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23℃，湿度自然，避光培养4
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8天，完成蛹虫草菌株发菌；在原基分
化的过程中，需要给予温差刺激，维持白天温度18
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23℃，夜晚10
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18℃，每天光照10
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16小时，光照强度300
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2000lux，培养6
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12天，蛹虫草子座原基形成；所述温差为24小时内的温差在1
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10℃的范围；在子实体生长的过程中需要将其放置于18
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23℃条件下，每天光照8
‑
12小时，光照强度300
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2000lux，空气相对湿度75
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90％，培养10
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40天，蛹虫草子实体长至6
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10厘米长；在代谢产物积累的过程中，需要维持温度25
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30℃，每天光照8
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12小时，光照强度 300
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6000lux，空气相对湿度75
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90％，继本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种优质蛹虫草栽培母种的制备方法，其中，所述制备方法包括：步骤1，野外采集标本，所述采集标本需要携带的工具包括标本夹、采集袋、枝剪、标签、小刀等；步骤2，组织块或子囊孢子分离菌种，对步骤1所采集的样本进行组织块或子囊孢子进行分离，并且分离下来的组织块和子囊孢子要进行分类存放；步骤3，DNA鉴定，步骤2分离下来的子囊孢子进行DNA鉴定，并将鉴定的结果进行分类存放；步骤4，菌丝形态显微观察，对步骤2分离下来的组织块放到电子显微镜下进行观察，并将所观察到的图像进行分类保存；步骤5，驯化、杂交育种和实验室栽培，将采集到的样本按照随机组合的方式进行杂交育种，并将其放入到实验室进行栽培，并且在培育的过程种要给其提供合适的生长环境；步骤6，适合大规模栽培，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将成活率较高的筛选出来；步骤7，缩短生长周期，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将生长周期较短的筛选出来；步骤8，改善子实体生长性能，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将子实体生长性能较好的筛选出来；步骤9，提高转化率，对步骤5种培养的蛹虫草进行筛选，将转化率较高的筛选出来；步骤10，蛹虫草优良菌株，通过对比步骤6、步骤7、步骤8和步骤9，取其交集并单独筛选出来；步骤11，蛹虫草栽培母种，将步...

【专利技术属性】
技术研发人员：李艳杰，
申请(专利权)人：内蒙古嘉致农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：