一种乳腺癌的环状RNA生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种乳腺癌的环状RNA生物标志物circ

【技术实现步骤摘要】
一种乳腺癌的环状RNA生物标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及乳腺癌诊断
，具体涉及一种环状RNA circ
‑
GLIS1生物标志物在制备乳腺癌的诊断试剂中的应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，是全世界女性癌症死亡的主要原因。目前乳腺癌发病率逐年上升，且其综合治疗手段(包括手术、化疗和放疗)具有较大的个体化差异及毒副作用，对患者生存质量产生很大影响。因此，寻找新的乳腺癌生物标志物，进行靶向治疗和个体化治疗具有极其重要的临床意义。
[0003]环状RNA(circular RNA，circRNA)是一类新型非编码RNA，其结构稳定且具有显著的组织和疾病特异性，研究发现，circRNA参与了多种肿瘤的发生、发展、侵袭和转移，是理想的候选肿瘤生物标志物及肿瘤治疗靶点。在机制上，circRNA的功能包括作为microRNA(miRNA)的海绵调控基因表达以及与RNA结合蛋白(RBPs)结合或翻译成蛋白。CircRNA富含miRNA结合位点，在细胞中起到miRNA海绵的作用，进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用，升高靶基因的表达水平，这一作用机制被称为竞争性内源RNA(ceRNA)机制。
[0004]随着生物信息学的发展，circRNA在胃癌、肺癌肿瘤发生发展中的作用机制研究也取得了重大进展，但circRNA在乳腺癌中的作用机制还有待进一步探索。目前，仍然缺少特异性的circRNA生物标志物高效地检测乳腺癌。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种快速、灵敏、特异性的乳腺癌的诊断指标及其相应的诊断试剂盒。
[0006]为实现上述目的，本专利采取的技术方案包括以下几个方面：
[0007]在第一个方面，本专利技术提供了一种环状RNA circ
‑
GLIS1(hsa_circ_0002079)，所述环状RNA的结构为SEQ No.1所示的核苷酸序列经反向剪接形成的3
’
端和5
’
端首尾相连的环状结构。需要说明的是，本申请的专利技术人首次发现环状RNA circ
‑
GLIS1在基因组定位为chr1:54059780
‑
54065951，对应的线性基因是GLIS1(NM_147193.4)；该环状RNA由基因GLIS1的第2、3个外显子环化而来，长1061个碱基；目前尚无circ
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GLIS1在乳腺癌的功能应用的报道。
[0008]在第二个方面，本专利技术提供了一种乳腺癌的分子标志物，所述分子标志物为环状RNA circ
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GLIS1。本申请的专利技术人经实验发现，circ
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GLIS1在乳腺癌中表达量显著上调，且过表达circ
‑
GLIS1可促进乳腺癌的增殖和转移，表明circ
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GLIS1可作为乳腺癌诊断的新的分子标志物。
[0009]在第三个方面，本专利技术提供了环状RNA circ
‑
GLIS1含量的检测试剂在制备乳腺癌的诊断试剂盒中的应用，其中，所述检测试剂为能扩增出circ
‑
GLIS1的引物对，所述引物对的碱基序列选自如SEQ No.2
–
5中任意两种所示的序列。
[0010]优选地，所述引物对包含上游引物和下游引物，所述上游引物的碱基序列选自如SEQ No.2
–
3中任意一种所示的序列，所述下游引物的碱基序列选自如SEQ No.4
–
5中任意一种所示的序列。
[0011]在第四个方面，本专利技术提供了一种乳腺癌的诊断试剂盒，所述试剂盒含有扩增所述环状RNA circ
‑
GLIS1的引物对，所述环状RNA circ
‑
GLIS1的结构是由SEQ No.1所示的核苷酸序列经反向剪接形成的3
’
端和5
’
端首尾相连的环状结构，所述引物对的碱基序列选自如SEQ No.2
–
5中任意两种所示的序列。
[0012]优选地，所述引物对包含上游引物和下游引物，所述上游引物的碱基序列选自如SEQ No.2
–
3中任意一种所示的序列，所述下游引物的碱基序列选自如SEQ No.4
–
5中任意一种所示的序列。
[0013]需要说明的是，本专利技术中的诊断试剂盒除了含有能扩增circ
‑
GLIS1的引物对外，还包括其他PCR扩增所需要的试剂，如逆转录酶、RNA聚合酶、缓冲液等。
[0014]第五个方面，本专利技术提供了环状RNA circ
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GLIS1在制备抗乳腺癌药物组合物中的用途。所述环状RNA circ
‑
GLIS1的结构是由SEQ No.1所示的核苷酸序列经反向剪接形成的3
’
端和5
’
端首尾相连的环状结构。本专利技术的环状RNA过表达后可显著增加乳腺癌细胞的增殖，并促进其侵袭和乳腺移植瘤的生长。针对本专利技术的环状RNA靶点的药物能够抑制乳腺癌细胞中circ
‑
GLIS1的表达。
[0015]优选地，所述药物针对的靶点的序列如SEQ No.1反向剪接形成的环状RNA，所述药物为寡核苷酸、寡核苷酸表达载体或小分子化合物。
[0016]综上所述，本专利技术的有益效果为：
[0017]本专利技术首次发现并证实了环状RNA(circ
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GLIS1)作为促癌因子在乳腺癌中的作用。
[0018]本专利技术揭示了circ
‑
GLIS1在乳腺癌发生发展中的关键作用，为乳腺癌的诊断及相关靶点药物的研发奠定了基础。此新靶点的发现将为乳腺癌患者精准治疗及高危人群的筛查及预防提供有力手段，对于改善患者生活质量具有重大社会意义。
[0019]本专利技术的circRNA结构稳定并具有组织特异性，基于本专利技术发现的靶点circ
‑
GLIS1开发的乳腺癌诊断和筛查的试剂盒，有助于提高乳腺癌的诊断效率和建立乳腺癌的早期诊断、预防及干预系统，可在极大程度上减轻患者家庭经济负担、提高医疗资源利用效率。
[0020]说明书附图
[0021]图1为本专利技术的circ
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GLIS1结构图谱；
[0022]图2为一代测序结果图；其鉴定出circ
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GLIS1的反向剪接位点；
[0023]图3为本专利技术circ
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GLIS1在正常乳腺细胞MCF
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10A和乳腺肿瘤细胞MCF
‑
7中的差异性表达情况(n＝3；**p<0.01)；
[0024]图4为过表达circ
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GLIS1的pCD5
‑
ciR载体结构图谱；
[0025]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.环状RNA circ
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GLIS1含量的检测试剂在制备乳腺癌的诊断试剂盒中的应用，其中，所述环状RNA circ
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GLIS1的结构是由SEQ No.1所示的核苷酸序列经反向剪接形成的3
’
端和5
’
端首尾相连的环状结构；所述检测试剂包含能够扩增所述环状RNA circ
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GLIS1的引物对，所述引物对的碱基序列选自如SEQ No.2
–
5中任意两种所示的序列。2.一种乳腺癌的诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含有能扩增所述环状RNA circ
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GLIS1的引物对，所述环状RNA circ
‑
GLIS1的结构是由SEQ No.1所示的核苷酸序列经反向剪接形成的3
’
端和5
’
端首尾相连的环状结构，所述引物对的碱基序列选自如SEQ No.2
–
5中任意两种所示的序列。3.根据权利要求1所述的环状RNA circ
‑
GLIS1含量...

【专利技术属性】
技术研发人员：王婷，龙方懿，肖洪涛，张晞倩，林红，
申请(专利权)人：四川省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：