一种诊断早期流产的miRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种用于早期流产诊断的新的生物标志物，具体涉及hsa

【技术实现步骤摘要】
一种诊断早期流产的miRNA标志物及其应用
所属

[0001]本专利技术属于生物检测与诊断领域，具体涉及一种妊娠早期流产诊断用的miRNA生物标志物及其应用。

技术介绍

[0002]流产是一个普遍的问题，会影响39岁以下25％怀孕妇女。据统计流产影响大约三分之一的妊娠妇女，并且最常发生在孕中期和早孕期。近年来，早期流产发病逐年增长，尽管随着早期干预方法及药物治疗的发展，对早期流产的预防取得一定的效果，然而，早期流产预测及诊断方法的缺乏使得该妊娠疾病难以有效防控。
[0003]母胎间正常交流是维持成功和健康怀孕的基础。子宫内膜间质细胞(ESCs)的不断增殖与分化，在妊娠初期达到蜕膜化状态。ESCs蜕膜功能失调阻碍了滋养层细胞侵入子宫内膜，可导致包括不育，早期流产，宫内发育迟缓和先兆子痫等妊娠相关疾病。有研究表明，HOXA10、IL
‑
6可调节ESCs细胞增殖和蜕膜化。此外，类固醇激素和粘附分子也参与ESCs细胞增殖和蜕膜化的调节，并进一步影响胚胎植入和早期妊娠。但是，导致蜕膜化缺陷的分子机制及其在早期流产中发挥的作用目前仍然不清楚。
[0004]微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA，能通过与靶向mRNA的3'
‑
UTR结合来负调控基因的表达。研究发现，在蜕膜化过程和胚胎植入的窗口期中，miRNA在子宫内膜中存在差异表达。已证实miR
‑
98通过靶向大鼠子宫中的Bcl
‑
xl来调控ESCs的增殖与凋亡。最新一项研究显示，流产患者的蜕膜组织中miR
‑
24下调，并通过调节ESCs的增殖和凋亡影响妊娠结局。但是，仍有许多未知的miRNA参与调控ESCs的蜕膜化过程。据报道，miR
‑
29a能诱导滋养层细胞凋亡并调节滋养层细胞在流产和胎盘增生中的功能。另一项研究表明，miR
‑
29a通过靶向多囊卵巢综合征中的芳香化酶表达和雌二醇生物合成促进颗粒细胞增殖。此外，已证实miR
‑
29a
‑
5p通过靶向TPX2抑制子宫内膜癌细胞增殖。值得注意的是，miR
‑
29a能通过靶向凋亡因子抑制ESCs的凋亡并参与调控在胚胎植入过程。然而，miR
‑
29a影响ESCs的增殖和蜕膜化的作用及其作为早期流产分子标志物的潜在应用仍有待阐明。
[0005]目前，早期流产没有有效的分子标志物，由于现有治疗与干预技术的仍然不足，接受流产后的治疗不尽人意，本专利技术的一种包含miR
‑
29a调控ESCs的增殖和蜕膜化作用及评估了不同妊娠时期及早期流产中miR
‑
29a的表达水平，并评估了miR
‑
29a应用于早期流产的诊断价值。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对现有技术的不足，提供一种一种妊娠早期流产诊断用的miRNA生物标志物及其应用。
[0007]在本专利技术中，所述miRNA生物标志物为hsa
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miR
‑
29a
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3p(MIMAT0000086)。
[0008]所述hsa
‑
miR
‑
29a
‑
3p的序列为：UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA。
[0009]优选的，所述hsa
‑
miR
‑
29a
‑
3p为蜕膜组织miRNA生物标志物。
[0010]本专利技术的蜕膜组织miRNA生物标志物，可用于妊娠早期流产的检测，也可用于不同妊娠周期的监测。
[0011]本专利技术提供所述蜕膜组织miRNA生物标志物在筛选或制备早期流产诊断药物中的用途。
[0012]本专利技术提供一组早期流产诊断所用miRNA引物，所述miRNA引物为hsa
‑
miR
‑
29a
‑
3p引物。
[0013]所述hsa
‑
miR
‑
29a
‑
3p引物序列为：miR
‑
29a
‑
3p正向引物:5
’‑
TGCGCTAGCACCATCTGAAATC
‑3’
和反向引物:5
’‑
CCAGTGCAGGGTCCGAGGTATT
‑3’
。
[0014]优选的，所述miRNA标志物、引物及组合在治疗早期流产的应用。
[0015]本专利技术的目的是按以下技术方案来实现的：
[0016]本专利技术通过系统的研究不同妊娠周期及流产患者蜕膜组织miR
‑
29a表达差异。发现分泌期子宫内膜相比增生期子宫内膜组织miR
‑
29a显著上调。与正常早期妊娠相比，早期流产子宫内膜蜕膜组织miR
‑
29a的表达显著降低。与临床组织样本一致，细胞实验证明本专利技术所述miR
‑
29a在ESCs蜕膜化模型中的表达上调。而miR
‑
29a的下调显着抑制了蜕膜化ESCs的细胞增殖以及蜕膜化标志物PRL和IGFBP1的表达水平。本方法可以有效的预测不同妊娠周期及早期流产。研究结果为早期流产的预测和诊断提供了依据，同时为早期流产分子治疗在临床上的应用奠定了基础。
附图说明
[0017]图1为不同时期子宫内膜或蜕膜组织miR
‑
29a的表达差异。
[0018]图2为蜕膜化的ESCs中miR
‑
29a表达变化。
[0019]图3为miR
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29a下调对蜕膜化ESCs的细胞增殖影响。
[0020]图4A
‑
B为miR
‑
29a下调对蜕膜化ESCs的蜕膜标志物PRL和IGFBP1的蛋白水平及相对定量的影响。
[0021]具体实施案例
[0022]为使本专利技术更加容易理解，下面将进一步阐述本专利技术的具体实施例。
[0023]实施例1：qRT
‑
PCR检测不同妊娠周期子宫内膜、早期流产患者蜕膜组织miR
‑
29a的表达水平
[0024](1)RNA提取：
[0025]用手术剪剪取部分组织置于含1mL的Trizol的匀浆管中，使用电动匀浆机充分研磨后(冰上操作)，温育5min，12000rpm，离心10min。吸上清于新的1.5mL离心管中，加入200μL的氯仿，摇匀，室温静置2min，4℃，12000rpm，离心10min。吸取上清于新的1.5mL离心管中，加入600μL的异丙醇，混合均匀，室温静置15min，4℃，12000rpm，离心15min，弃上清。加入1mL75％的无水乙醇(750μL无水乙醇和250μLDEPC水)漂洗沉淀，4℃，12000rpm，离心5m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种早期流产诊断所用miRNA标志物，所述miRNA标志物为hsa
‑
miR
‑
29a
‑
3p。2.根据权利要求1所述的miRNA标志物，其特征在于：所述miRNA标志物为蜕膜组织miRNA标志物。3.根据权利要求1
‑
2任一权利要求所述的miRNA标志物在筛选或制备早期流产诊断药物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘爱霞，王迪民，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属妇产科医院，
类型：发明
国别省市：