本发明专利技术提供一种液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺，所述液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺过程：活化枯草芽孢杆菌菌种，扩培，制备菌悬液；取一定体积的菌悬液发酵培养，过滤发酵产物，得到滤液，测定发酵液中燕麦ACE抑制肽率，再用凝胶色谱分离滤液，得到燕麦ACE抑制肽产物。肽产物。
【技术实现步骤摘要】
一种液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺
[0001]本专利技术涉及方便食品及其加工
，具体涉及一种液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺。
技术介绍
[0002]我国对燕麦蛋白抑制肽的研究起步较晚，2007年以后才开始展开相关研究，目前仍处于起步阶段，燕麦活性抑制肽的大规模制备和工业化的生产尚属空白。我国是燕麦的主要生产国，燕麦产量高，价格相对低廉，随着人们对植物活性肽的日益重视，燕麦蛋白抑制肽的开发与研究逐渐会成为热点。
[0003]天然食源性降压肽的研穷一直是植物源蛋白肽的研究重点。食源性ACE抑制肽安全无副作用，易吸收，对血压正常者毫无影响，不仅能够降低血压，还具有一定的减肥功效，因此，燕麦ACE抑制肽的研究具有重要意义。
[0004]制备燕麦ACE抑制肽最常用的方法是直接对燕麦蛋白进行酶解，微生物发酵法尚无研究。微生物是重要的酶试剂来源，寻找合适的微生物对燕麦进行发酵，可以极大降低成本，为以后工业化生产燕麦ACE抑制肽提供参考。
技术实现思路
[0005]针对上述问题，本专利技术提供一种液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺。
[0006]本专利技术的目的采用以下技术方案来实现：一种液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺，包括以下步骤：S1、菌种活化制备活化培养基：酵母粉0.4mg/100mL，牛肉膏4g/100mL，蛋白胨2g/100mL，NaCl0.6g/mL，葡萄糖0.4g/100mL，琼脂3g/100mL。将保藏的菌种转接至所述培养基中，于38℃生化恒温培养箱中培养48h，取长势好的单菌落重新在斜面上划线培养，转接2-4次，观察是否充分活化；S2、菌种扩培取S1相同方法制得的培养基100mL，将已活化的单菌落3-4环接种于培养基中，在38℃、180r/min的恒温震荡摇床中扩大培养28h；S3、菌悬液制备将种子液于5℃、5000Xg离心30min，倾去上清液，提前准备好的无菌生理盐水冲洗沉底3次，得到枯草芽孢杆菌菌悬液通过血球计数板计数，将菌悬液浓度调整为1.0
×
108个/mL，在5℃冷藏备用；S4、发酵培养制备培养基：裸燕麦粉6%，蒸馏水100mL，灭菌。从种子液中取出20mL的菌悬液放入所述培养基中，在38℃、180r/min的恒温振荡培养箱中培养10h，将发酵产物在5℃、5000Xg离心15min，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液；
S5、发酵液中燕麦抑制肽率测定取8mmol/L的马尿酰-组胺酰亮氨酸(HHL)溶液100μL与过滤后的发酵液100μL混合，置于38℃水浴中，预热7min，加入0.2U/mL ACE溶液10μL,于38℃恒温水浴中反应20min.向反应体系中加入1mol/L HCI 100μL用于终止反应，再加入2.2mL乙酸乙酯漩涡混合均匀，5℃下1200r/min离心15min 后吸取2mL酯层溶液转入另一支试管中， 80℃烘干冷却后重新溶于4mL超纯水中，于228nm处测定吸光值。进而求得样品中ACE抑制率为59.8%；ACE抑制率=
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100%A：ACE和ACE抑制肽同时存在时的OD值B：不加抑制肽时的OD值(用去离子水代替水解液)C： ACE与ACE抑制肽均不参与时所测的吸光度(用去离子水代替水解液，并在反应前加HCI终止反应)S6、凝胶色谱分离燕麦ACE抑制肽采用葡聚糖凝胶Sephadex G-25对燕麦ACE抑制肽进行分级纯化。用去离子水充分浸泡葡聚糖凝胶Sephadex G-25至完全膨胀，然后反复清洗，直至除去不溶性杂质。将预处理后的葡聚糖凝胶装进1.6
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50cm玻璃层析柱待用，待平衡后，缓慢加入样品2mL,洗脱条件为: 0.2mol/L NaCl；流速0.4mL/min；检测波长280nm。收集各洗脱峰，真空冷冻干燥。
[0007]优选的，所述活化培养基的成分为：酵母粉0.4mg/100mL，牛肉膏4g/100mL，蛋白胨2g/100mL，NaCl0.6g/mL，葡萄糖0.4g/100mL，琼脂3g/100mL。
[0008]优选的，在38℃生化恒温培养箱中培养48h，后需要转接2-4次。
[0009]优选的，所述离心条件均为5℃、5000Xg。
[0010]本专利技术的有益效果为：微生物发酵工艺与纯酶水解法制备燕麦抑制肽相比优势明显，本专利技术使用成本更为低廉利用燕麦粉而不是燕麦蛋白），发酵效率高，抑制肽的品质好（主要为短肽链），解决了燕麦蛋白水解产生的苦味以及色素的问题，并且为微生物发酵法是极具潜力的抑制肽制备工艺提供实验依据。
具体实施方式
[0011]结合以下实施例对本专利技术作进一步描述。
[0012]本专利技术的实施例涉及一种液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺，包括以下步骤：S1、菌种活化制备活化培养基：酵母粉0.4mg/100mL，牛肉膏4g/100mL，蛋白胨2g/100mL，NaCl0.6g/mL，葡萄糖0.4g/100mL，琼脂3g/100mL。将保藏的菌种转接至所述培养基中，于38℃生化恒温培养箱中培养48h，取长势好的单菌落重新在斜面上划线培养，转接2-4次，观察是否充分活化；S2、菌种扩培取S1相同方法制得的培养基100mL，将已活化的单菌落3-4环接种于培养基中，在38℃、180r/min的恒温震荡摇床中扩大培养28h；S3、菌悬液制备
将种子液于5℃、5000Xg离心30min，倾去上清液，提前准备好的无菌生理盐水冲洗沉底3次，得到枯草芽孢杆菌菌悬液通过血球计数板计数，将菌悬液浓度调整为1.0
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108个/mL，在5℃冷藏备用；S4、发酵培养制备培养基：裸燕麦粉6%，蒸馏水100mL，灭菌。从种子液中取出20mL的菌悬液放入所述培养基中，在38℃、180r/min的恒温振荡培养箱中培养10h，将发酵产物在5℃、5000Xg离心15min，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液；S5、发酵液中燕麦抑制肽率测定取8mmol/L的马尿酰-组胺酰亮氨酸(HHL)溶液100μL与过滤后的发酵液100μL混合，置于38℃水浴中，预热7min，加入0.2U/mL ACE溶液10μL,于38℃恒温水浴中反应20min.向反应体系中加入1mol/L HCI 100μL用于终止反应，再加入2.2mL乙酸乙酯漩涡混合均匀，5℃下1200r/min离心15min 后吸取2mL酯层溶液转入另一支试管中， 80℃烘干冷却后重新溶于4mL超纯水中，于228nm处测定吸光值。进而求得样品中ACE抑制率为59.8%；ACE抑制率=
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100%A：ACE和ACE抑制肽同时存在时的OD值B：不加抑制肽时的OD值(用去离子水代替水解液)C： ACE与ACE抑制肽均不参与时所测的吸光度(用去离子水代替水解液，并在反应前加HCI终止反应)S6、凝胶色谱分离燕麦ACE抑制肽采用葡聚糖凝胶Sephadex G-25对燕麦ACE抑制肽进行分级纯化。用去离子水充分浸泡葡聚糖凝胶Sephadex G-25至完全膨胀，然后反复清洗，直至本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种液态发酵法制备燕麦ACE抑制肽的工艺，其特征在于，包括以下步骤：S1、菌种活化制备活化培养基：酵母粉0.4mg/100mL，牛肉膏4g/100mL，蛋白胨2g/100mL，NaCl0.6g/mL，葡萄糖0.4g/100mL，琼脂3g/100mL。将保藏的菌种转接至所述培养基中，于38℃生化恒温培养箱中培养48h，取长势好的单菌落重新在斜面上划线培养，转接2-4次，观察是否充分活化；S2、菌种扩培取S1相同方法制得的培养基100mL，将已活化的单菌落3-4环接种于培养基中，在38℃、180r/min的恒温震荡摇床中扩大培养28h；S3、菌悬液制备将种子液于5℃、5000Xg离心30min，倾去上清液，提前准备好的无菌生理盐水冲洗沉底3次，得到枯草芽孢杆菌菌悬液通过血球计数板计数，将菌悬液浓度调整为1.0
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108个/mL，在5℃冷藏备用；S4、发酵培养制备培养基：裸燕麦粉6%，蒸馏水100mL，灭菌。从种子液中取出20mL的菌悬液放入所述培养基中，在38℃、180r/min的恒温振荡培养箱中培养10h，将发酵产物在5℃、5000Xg离心15min，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到滤液；S5、发酵液中燕麦抑制肽率测定取8mmol/L的马尿酰-组胺酰亮氨酸(HHL)溶液100μL与过滤后的发酵液100μL混合，置于38℃水浴中，预热7min，加入0.2U/mL ACE溶液10μL,于38℃恒温水浴中反应20min.向反应体系中加入1mol/L HCI 100μL用于终止反应，再加入2.2mL乙酸乙酯漩涡混合均匀，5℃下1200r...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨成东，
申请(专利权)人：南京素汇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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