一种荧光染料及其制备方法和应用技术

本申请公开了一种荧光染料及其制备方法和应用。本申请的荧光染料具有式一所示的非对称结构，其中，通过R5取代基能够增强荧光染料整体结构的稳定性。本申请的荧光染料对核酸、白细胞、有核红细胞、网织细胞都具有良好的染色作用，在近红外区可以发射出稳定的荧光，可以避免生物自身产生的荧光背景干扰，提高测量的准确性和灵敏度，可广泛应用于流式细胞分类、血液细胞分析。本申请的荧光染料为生物样品染色提供了一种新的荧光背景干扰小、光稳定性好的染色方案和途径。性好的染色方案和途径。性好的染色方案和途径。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光染料及其制备方法和应用


[0001]本申请涉及生物体染色
，特别是涉及一种荧光染料及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]生物体染色主要是指采用荧光染料对细胞或者细胞内的核酸进行染色。目前常用的荧光染料包括新亚甲基蓝，亮甲苯蓝、溴乙锭等；这些荧光染料通过与核酸分子结合形成复合物，在显微镜下可观察明显的荧光；但由于荧光染料本身也可以形成有荧光的复合物，即荧光染料本身具有本底荧光，造成较强的荧光干扰，降低检测的准确性。
[0003]目前已有的一类红色激发荧光染料，该结构的荧光染料可以对细胞内的RNA和/或DNA进行标记、染色。但是，在具体应用过程中发现，这类荧光染料的光稳定性较差，难以满足规模化的生产和应用。
[0004]综上，现有的荧光染料普遍存在背景荧光干扰或光稳定性差等问题。如何降低荧光染料的背景荧光，提高荧光染料的光稳定性，仍然是生物体染色技术的研究重点和难点。

技术实现思路

[0005]本申请的目的是提供一种新的荧光染料及其制备方法和应用。
[0006]为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：
[0007]本申请的第一方面公开了一种荧光染料，该荧光染料具有式一所示的结构；式一
[0008]其中，X为C(CH3)2、C(C2H5)2、CH3CC2H5、O、S或Se；
[0009]R1和R4各自独立的选自H、OH、OR7、巯基、羧基、羰基、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、二氟乙基、三氟甲氧基、磺酸基、亚磷酸基、磷酸基、C
1-C
18
烷基、C
1-C8烷基OR6、C
1-C
18
烷基磺酸基、苄基、苯基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、四氮唑基、噁二唑基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶基、喹啉基、吲哚基、吖啶基、C
1-C4烷基吡啶基、C
1-C
18
卤代烷基、C
1-C
18
烷基磷酸基或C
1-C
18
烷基SR6，其中苄基为以下取代基任选取代的取代苄基：硼酸基、羟基、卤素、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、酰胺基、羧基、磺酸基、氨基、杂环基和烷基氨基；
[0010]R2和R3各自独立选自H、C
1-C
18
烷基COOR7、C
1-C
18
烷基OR7、C
1-C
18
烷基NHR6、C
1-C
18
烷基N(R7)(R7)、C
1-C
18
烷基磺酸基、C
1-C
18
烷基磷酸基、C
1-C
18
烷基酰胺基、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、C
1-C
18
烷基、磺酸基、羰基、羧基、氨基、苯基、苯硼酸基、吡啶基、氰基或苄基；其中苄基为以
下取代基任选取代的取代苄基：羟基、卤素、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、酰胺基、羧基、磺酸基、氨基、杂环基和烷基氨基；
[0011]R5选自OH、OR7、巯基、羧基、羰基、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、二氟乙基、三氟甲氧基、磺酸基、亚磷酸基、磷酸基、C
1-C
18
烷基、C
1-C8烷基OR6、C
1-C
18
烷基磺酸基、苄基、苯基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、四氮唑基、噁二唑基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶基、喹啉基、吲哚基、吖啶基、C
1-C4烷基吡啶基、C
1-C
18
卤代烷基、C
1-C
18
烷基磷酸基或C
1-C
18
烷基SR6，其中苄基为以下取代基任选取代的取代苄基：硼酸基、羟基、卤素、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、酰胺基、羧基、磺酸基、氨基、杂环基和烷基氨基；
[0012]R6为C
1-C
18
烷基、H、羧基、C
1-C4羧基、氨基、羟基、醚基、醚基衍生物、C
1-C6醚基或C
1-C6醚基衍生物；
[0013]R7为C
1-C
18
烷基、H、羧基、C
1-C
18
烷基羧基、氨基、羟基、醚基或者苯基；其中苯基为以下取代基任选取代的取代苯基：羟基、卤素、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、杂环基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺氨基、羰基、羧基、磷酸基和亚磷酸基；
[0014]Y-为单独存在负离子或者官能团本身自带的负离子。
[0015]需要说明的是，本申请的荧光染料为非对称结构，并且通过R5取代基能够增强荧光染料整体结构的稳定性，从而提高荧光染料的光稳定性；本申请的荧光染料对核酸、白细胞、有核红细胞、网织细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和成熟红细胞都具有良好的染色作用；在近红外区可以发射出稳定的荧光，可以避免生物自身产生的荧光背景干扰，提高测量的准确性和灵敏度，可广泛应用于流式细胞分类、血液细胞分析。并且，在本申请的一种实现方式中，R1、R2、R3、R4等基团具有羟基或其他水溶性基团时，还可以增加染料的水溶性，方便在水性体系使用。
[0016]优选的，R1、R4和R5各自独立的选自H、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、C
1-C
18
烷基、C
1-C8烷基OR6、C
1-C
18
烷基磺酸基、苄基，其中苄基为以下取代基任选取代的取代苄基：羟基、卤素、烷基、芳基、烷氧基、羧基、磺酸基和氨基。
[0017]需要说明的是，以上R1、R4和R5的优选基团，可以在提高荧光染料光稳定性的同时，获得更好的水溶性，从而方便荧光染料在水性体系中使用。
[0018]优选的，R2和R3各自独立选自H、C
1-C
18
烷基COOR7、C
1-C
18
烷基OR7、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、C
1-C
18
烷基或苄基，其中苄基为以下取代基任选取代的取代苄基：羟基、卤素、烷基、芳基、烷氧基、羧基、磺酸基和氨基。
[0019]需要说明的是，以上R2和R3的优选基团，能够进一步增强荧光染料的水溶性，从而方便荧光染料在水性体系的使用。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光染料，其特征在于：所述荧光染料具有式一所示的结构；式一式一中，X为C(CH3)2、C(C2H5)2、CH3CC2H5、O、S或Se；R1和R4各自独立的选自H、OH、OR7、巯基、羧基、羰基、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、二氟乙基、三氟甲氧基、磺酸基、亚磷酸基、磷酸基、C
1-C
18
烷基、C
1-C8烷基OR6、C
1-C
18
烷基磺酸基、苄基、苯基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、四氮唑基、噁二唑基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶基、喹啉基、吲哚基、吖啶基、C
1-C4烷基吡啶基、C
1-C
18
卤代烷基、C
1-C
18
烷基磷酸基或C
1-C
18
烷基SR6，其中苄基为以下取代基任选取代的取代苄基：硼酸基、羟基、卤素、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、酰胺基、羧基、磺酸基、氨基、杂环基和烷基氨基；R2和R3各自独立选自H、C
1-C
18
烷基COOR7、C
1-C
18
烷基OR7、C
1-C
18
烷基NHR6、C
1-C
18
烷基N(R7)(R7)、C
1-C
18
烷基磺酸基、C
1-C
18
烷基磷酸基、C
1-C
18
烷基酰胺基、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、C
1-C
18
烷基、磺酸基、羰基、羧基、氨基、苯基、苯硼酸基、吡啶基、氰基或苄基；其中苄基为以下取代基任选取代的取代苄基：羟基、卤素、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、酰胺基、羧基、磺酸基、氨基、杂环基和烷基氨基；R5选自OH、OR7、巯基、羧基、羰基、C
1-C
18
烯基、C
1-C
18
炔基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、二氟乙基、三氟甲氧基、磺酸基、亚磷酸基、磷酸基、C
1-C
18
烷基、C
1-C8烷基OR6、C
1-C
18
烷基磺酸基、苄基、苯基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、三氮唑基、四氮唑基、噁二唑基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶基、喹啉基、吲哚基、吖啶基、C
1-C4烷基吡啶基、C
1-C
18
卤代烷基、C
1-C
18
烷基磷酸基或C
1-C
18
烷基SR6，其中苄基为以下取代基任选取代的取代苄基：硼酸基、羟基、卤素、巯基、氰基、硝基、烷基、芳基、烷氧基、酰胺基、羧基、磺酸基、氨基、杂环基和烷基氨基；R6为C
1-C
18
烷基、H、羧基、C
1-C4羧基、氨基、羟基、醚基、醚基衍生物、C
1-C6醚基或C
1-C6醚基衍生物；R7为C
1-C

【专利技术属性】
技术研发人员：冯剑军，王译责，宋莲，
申请(专利权)人：深圳市瑞图生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：