触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条及其制备方法和检测卡、试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条及其制备方法和检测卡、试剂盒。该试纸条的检测线上包被有混和抗体；混和抗体包括第一抗人触珠蛋白单克隆抗体、第一抗人血红蛋白单克隆抗体和第一抗人转铁蛋白单克隆抗体；质控线上包被有质控抗体；金标垫上包被有胶体金标记的抗体；胶体金标记的抗体包括胶体金标记的第二抗人触珠蛋白单克隆抗体、胶体金标记的第二抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记的第二抗人转铁蛋白单克隆抗体；混和抗体与胶体金标记的抗体分别结合对应检测蛋白的不同抗原表位；胶体金标记的抗体还能够与质控抗体结合。本发明专利技术具有极高的敏感性，可检测4ng/mL的触珠蛋白，且兼顾特异性。且兼顾特异性。且兼顾特异性。

【技术实现步骤摘要】
触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条及其制备方法和检测卡、试剂盒


[0001]本专利技术属于免疫检测领域，涉及一种触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条及其制备方法和检测卡、试剂盒。

技术介绍

[0002]消化道出血是临床常见症状之一，可以分为上消化道出血和下消化道出血。而部分消化道出血比较微量，粪便外观无异常改变，肉眼难以发现，导致绝大多数早期消化道恶性肿瘤患者无法及时发现并早期干预治疗，从而延误了治疗的最佳时机。粪便隐血试验是检测急、慢性消化道出血和消化道恶性肿瘤的重要方法之一，是目前唯一通过随机临床试验证实的、可以降低结肠癌和直肠癌所致死亡的检查项目，如何准确检测出消化道出血，对于结肠癌和直肠癌患者的早期诊治异常重要。
[0003]大便潜隐血，又称大便潜血，是指消化道少量出血，红细胞被破坏，粪便外观没有异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。它的意义主要是检测各种原因所致的消化道出血、消化道恶性肿瘤，早期诊断的重要筛查指标，也是发现潜血变的有效方法。对于消化道肿瘤的患者，早期有20％的患者可出现潜血试验阳性，晚期病人的潜血试验阳性，甚至可达到90％以上，而且呈现可持续性的阳性。因此它可以作为消化道肿瘤筛查的一项指标。对于消化道出血，消化道溃疡的病人粪便潜血实验大多数是阳性的，或者出现阶段性的阳性。
[0004]便隐血即便潜血在目前临床上主要检测方法有化学法和免疫学方法。化学法由于特异性低，敏感度差，受饮食和药物的影响大，结果不易判别，所以采用率低。而免疫学中的胶体金法，将血红蛋白或转铁蛋白作为抗原、与试纸上预置的抗血红蛋白或转铁蛋白抗体发生免疫反应，检测粪便中的血红蛋白或转铁蛋白。在灵敏度、特异性方面都有了很大的提高，在临床上已得到广泛应用。前者可检出下消化道任何部位的出血，而后者能检出上消化道的出血，因上消化道的出血经消化酶作用后，其红细胞基质尽被消化，不再有免疫反应。因为转铁蛋白主要存在于血浆中，在健康人的粪便中几乎不存在，而在消化道出血时的粪便中大量存在。同时转铁蛋白稳定性明显高于血红蛋白。针对上消化道出血，在检测血红蛋白的同时检测转铁蛋白，其中一项检测出为阳性即为阳性，这样可以起到优势互补的作用，检出率较单项检测法更高，可有效降低假阴性结果。
[0005]触珠蛋白(Hp)即结合珠蛋白是一种分子量为85000的酸性糖蛋白，主要在肝脏合成。主要功能是与游离血红蛋白(Hb)结合成稳定的复合物，呈现出新的抗原决定簇，可被单核细胞、巨噬细胞表面的血红蛋白清除受体(CD163)所识别并结合，之后被吞噬降解，从而除去了血循环中游离的血红蛋白。临床上测定触珠蛋白主要用于诊断溶血性贫血。各种溶血性贫血触珠蛋白含量都明显减低，甚至低到测不出的程度。轻度溶血时，血浆中游离血红蛋白全部与触珠蛋白结合而被清除，此时血浆中测不出游离血红蛋白，仅见触珠蛋白减少。当游离血红蛋白量超过触珠蛋白结合能力时方被查出。因此，触珠蛋白可作为早期提示便
隐血出现的一项敏感指标。
[0006]临床上一般采用联合检测的检测方式，目前市场上已有血红蛋白
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转铁蛋白联检试剂盒、血红蛋白
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触珠蛋白联检试剂盒等。比如：专利技术专利CN101965515A提供了一种用于检测潜血的方法和装置，包括检测在GI样品中的转铁蛋白(Tf)和血红蛋白(Hb)，以及将检测到的转铁蛋白和血红蛋白的量与转铁蛋白和血红蛋白的各自的预定值相比较，并提供使用横向流动三明治免疫测定装置来实现对转铁蛋白和血红蛋白的检测，该技术方案缺少触珠蛋白检测。专利技术专利CN111879924A提供了一种快速诊断血红蛋白、结合珠蛋白
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血红蛋白复合物的胶体金免疫层析检测试纸及制备方法，该技术方案缺少转铁蛋白的检测，并且无法检测出游离的触珠蛋白。消化道出血时除了能在粪便中有血红蛋白、转铁蛋白、还有触珠蛋白。触珠蛋白只有在消化道出血时才会进入到消化道中，与血红蛋白结合时能形成结合珠蛋白
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血红蛋白复合物。
[0007]而触珠蛋白的加入对于前两种检测方法都是一种不可忽视的助力：少量出血和大便中结合珠蛋白形成复合物，而抗血红蛋白抗体不能对这种复合物进行识别，检测结果呈阴性。检测触珠蛋白不仅能识别消化道中游离的触珠蛋白，而且能识别触珠蛋白
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血红蛋白复合物，有效避免极微量隐血的漏检，大大提高便隐血检测的灵敏度。
[0008]CN111879924A采用了结合珠蛋白
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血红蛋白复合物作为消化道出血的一个指标，复合物结构如图1所示。由于形成复合物之后原先的抗原表位c和d被覆盖，抗原表位b也有很大一部分被覆盖，只有抗原表位a完全露在外面供抗体识别。因此，针对该复合物的抗体识别的抗原表位是以a为主，b为辅的，与游离的结合珠蛋白(触珠蛋白)的抗原表位差别很大，无法识别游离的结合珠蛋白。该专利技术对于该指标(结合珠蛋白
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血红蛋白复合物)的检测是采用抗触珠抗体和抗复合物抗体进行夹心捕获，辅助作为消化道出血检测，选用的是特异性识别结合珠蛋白和识别复合物的抗体对，对于游离的结合珠蛋白无法识别。当血红蛋白被破坏或者含量极低时，即使有出血导致粪便中有触珠蛋白也无法被检测出，即使与血红蛋白、转铁蛋白联合检测也会造成一定程度的漏检。
[0009]以上专利所涉及的产品均非共线混合抗体划线，而是分别划线。

技术实现思路

[0010]为了尽早发现消化道病变，高敏感性地检测大便潜隐血，需要一种既能能够检测人粪便样本中游离触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白，又能够检测相关复合物的检测试剂和检测方法，本专利技术解决这样的问题。
[0011]一方面，本专利技术公开了一种触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条，包括金标垫和与金标垫端部重叠连接的检测垫；检测垫上设置有检测线和质控线；检测线上包被有混和抗体；混和抗体包括第一抗人触珠蛋白单克隆抗体、第一抗人血红蛋白单克隆抗体和第一抗人转铁蛋白单克隆抗体；质控线上包被有质控抗体；金标垫上包被有胶体金标记的抗体；胶体金标记的抗体包括胶体金标记的第二抗人触珠蛋白单克隆抗体、胶体金标记的第二抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记的第二抗人转铁蛋白单克隆抗体；
[0012]第一抗人触珠蛋白单克隆抗体和胶体金标记的第二抗人触珠蛋白单克隆抗体分别与触珠蛋白的不同抗原表位结合；第一抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记的第二抗人血红蛋白单克隆抗体分别与血红蛋白的不同抗原表位结合；第一抗人转铁蛋白单克隆抗
体和胶体金标记的第二抗人转铁蛋白单克隆抗体分别与转铁蛋白的不同抗原表位结合；
[0013]胶体金标记的抗体还能够与质控抗体结合。
[0014]在一些实施方案中，质控抗体为抗鼠IgG；胶体金标记的抗体均属于鼠抗人单克隆抗体。进一步地，混和抗体均属于鼠抗人单克隆抗体。进一步地，所述抗鼠IgG选自羊抗鼠IgG、兔抗鼠IgG和马抗鼠IgG中的一种或多种。
[0015]在一些实施方案中，检测垫通过如下方法制备获得：将硝酸纤维素膜浸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条，其特征在于，包括金标垫和与所述金标垫端部重叠连接的检测垫；所述检测垫上设置有检测线和质控线；所述检测线上包被有混和抗体；所述混和抗体包括第一抗人触珠蛋白单克隆抗体、第一抗人血红蛋白单克隆抗体和第一抗人转铁蛋白单克隆抗体；所述质控线上包被有质控抗体；所述金标垫上包被有胶体金标记的抗体；所述胶体金标记的抗体包括胶体金标记的第二抗人触珠蛋白单克隆抗体、胶体金标记的第二抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记的第二抗人转铁蛋白单克隆抗体；所述第一抗人触珠蛋白单克隆抗体和所述胶体金标记的第二抗人触珠蛋白单克隆抗体分别与触珠蛋白的不同抗原表位结合；所述第一抗人血红蛋白单克隆抗体和所述胶体金标记的第二抗人血红蛋白单克隆抗体分别与血红蛋白的不同抗原表位结合；所述第一抗人转铁蛋白单克隆抗体和所述胶体金标记的第二抗人转铁蛋白单克隆抗体分别与转铁蛋白的不同抗原表位结合；所述胶体金标记的抗体还能够与所述质控抗体结合。2.如权利要求1所述的触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条，其特征在于，所述质控抗体为抗鼠IgG；所述胶体金标记的抗体均属于鼠抗人单克隆抗体。3.如权利要求1所述的触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条，其特征在于，所述检测垫通过如下方法制备获得：将硝酸纤维素膜浸入4％
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6％BSA溶液中，干后，在其上包被所述混和抗体形成所述检测线，在其上包被所述质控抗体形成所述质控线；所述检测线与所述质控线间存在间隔。4.如权利要求1所述的触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条，其特征在于，所述混合抗体需用磷酸盐包被稀释液4号稀释到设定的浓度后再包被到所述检测垫上形成所述检测线；所述磷酸盐包被稀释液4号制备1L量时的配方为：Na2HPO
4 0.23g、NaH2PO41.15g、NaCl 9g、蔗糖30g、Proclin300 0.4ml、BSA 1g、S9 1.041g，调pH至7.45，加水至1L。5.如权利要求1所述的触珠蛋白、血红蛋白、转铁蛋白共线检测试纸条，其特征在于，所述第一抗人血红蛋白单克隆抗体、所述第一抗人转铁蛋白单克隆抗体和所述第一抗人触珠蛋白单克隆抗体的浓度各自独立地为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴长龙，吴玉章，徐晓锋，胥美芳，
申请(专利权)人：无锡市孚维尔生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：