脆弱拟杆菌及其两性离子荚膜多糖在制备用于治疗呼吸系统肿瘤药物中的应用技术方案

本发明专利技术公开了脆弱拟杆菌和/或其两性离子荚膜多糖在制备用于治疗呼吸系统肿瘤的药物中的应用，本发明专利技术的脆弱拟杆菌，特别是保藏编号为CGMCC No.10685的脆弱拟杆菌ZY

【技术实现步骤摘要】
脆弱拟杆菌及其两性离子荚膜多糖在制备用于治疗呼吸系统肿瘤药物中的应用
[0001]本专利技术在实施过程中所使用的微生物菌种已于2015年4月2日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)(北京市朝阳区北辰西路1号院3号)保藏。分类命名：脆弱拟杆菌ZY
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312(bacteroides fragilis ZY
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312)，保藏编号CGMCC No.10685。脆弱拟杆菌ZY
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312由本专利技术申请单位自行分离获得，并且已经在授权专利保护(专利号201510459408.X)，按照专利审查指南的规定，公众能够从商业渠道买到或已经授权，不用保藏，即不用提供保藏证明。


[0002]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种脆弱拟杆菌和/或其两性离子荚膜多糖在制备治疗呼系统肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0003]呼吸系统肿瘤是指任何特征为在呼吸系统中解剖学定位为恶性细胞的疾病，包括肺癌、鼻咽癌、喉癌等。其中，肺癌作为呼吸系统肿瘤的代表，2020年全球肺癌死亡180 万例，远超其他癌症类型，位居癌症死亡人数第一。从病理和治疗角度，肺癌大致可以分为非小细胞肺癌(non small celllung cancer，NSCLC)和小细胞肺癌(small celllungcancer，SCLC)两大类，其中非小细胞肺癌约占80％～85％，其余为小细胞肺癌。依据世界卫生组织(WHO)2015年发布的肺癌组织学分型标准，肺癌主要组织类型为鳞状细胞癌和腺癌，约占全部原发性肺癌的80％左右。其他少见类型原发性肺癌包括：腺鳞癌，大细胞癌、神经内分泌癌(类癌、不典型类癌和小细胞癌)等。其中SCLC由于其独特的生物学行为，各个诊疗指南中建议分为局限期与广泛期。
[0004]大量的流行病学研究表明，肺癌发生的主要危险因素包括：吸烟和被动吸烟、室内燃料和烹调油烟所致污染、室内氡暴露、室外空气污染、和遗传因素都有关系。吸烟是目前公认的肺癌最重要的危险因素。同时，由于我国工业化发展导致空气污染日益加重，空气中细颗粒物(PM2.5)增加肺癌死亡风险。肺癌患者中也存在家族聚集现象。这些说明遗传因素可能在对环境致癌物易感的人群和(或)个体中起重要作用。
[0005]鼻咽癌是头颈部最常见的恶性肿瘤，是由鼻咽腔表面或鼻咽隐窝的上皮发生的恶性肿瘤。鼻咽癌相对于其他癌症来说并不算常见，根据IARC的调查，在2020年约有12.9 万鼻咽癌新发病例，在所有癌症中占比0.7％。鼻咽癌组织学分型采用WHO分类(2017 版)标准，分为角化型鳞状细胞癌、非角化型鳞状细胞癌、基底细胞样鳞状细胞癌和其他类型鼻咽癌。鼻咽癌的发生一般来说与多种因素的综合作用有关，其中比较明确的有：遗传因素、EB病毒感染、环境因素(如芳香烃、亚硝胺及镍等)。
[0006]目前针对呼吸系统肿瘤的治疗方法包括手术、放疗、化疗、分子靶向治疗和免疫治疗等。
[0007]在NSCLC的治疗中，解剖性肺切除术辅以含铂双药方案是早中期肺癌的主要治疗
手段，也是目前临床治愈肺癌的重要方法。大多数非小细胞肺癌在治疗时已经局部晚期或远处转移，不能手术切除，使用放疗、化疗联合疗法，化疗方案包括依托泊苷+顺铂 (EP)或卡铂(EC)、培美曲塞+顺铂或卡铂、紫杉醇或多西紫杉醇+铂类。由于SCLC 恶性程度高、易转移，但对化疗、放疗较敏感，主要采用化疗、放疗和预防性脑放疗结合的综合治疗。由于缺乏临床症状和有效的筛查程序，大多数肺癌被诊断已为晚期，进行切除术后NSCLC局部复发的可能性依然较高。新兴的靶向治疗和免疫疗法主要用于转移、复发肿瘤。在NSCLC的治疗中，晚期NSCLC的一线药物治疗中如患者EGFR 基因突变，可选择表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，包括吉非替尼、厄罗替尼等。驱动基因阴性的晚期NSCLC患者可选择刚刚获批上市的PD
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1抑制剂纳武利尤单抗 (Nivolumab)。广泛期SCLC的一线治疗加入了免疫治疗如阿替利珠单抗+EC方案，细胞程式死亡
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配体1(PD
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L1)单抗度伐利尤单抗联用等方案。
[0008]目前鼻咽癌公认和有效的根治性治疗手段为放射治疗，放疗与铂类药物化疗相结合是治疗局部晚期鼻咽癌的关键。随着调强放疗等在鼻咽癌治疗中广泛应用，鼻咽癌的局部控制率和总生存率得到显著提高，但远端转移是鼻咽癌治疗中最主要的失败模式。鼻咽癌可通过血行转移至全身多处器官，常见的转移部位有骨、肺和肝。一般占初治患者的10％左右，初治时未发现转移的患者中，治疗后15％左右仍会发生远处转移。对于复发或转移性鼻咽癌的治疗多选用化疗、免疫治疗、靶向治疗等。若鼻咽癌组织EGFR和 VEGFR阳性，可用EGFR单克隆抗体(西妥昔单抗或尼妥珠单抗)、VEGFR单克隆抗体(贝伐单抗)、酪氨酸激酶抑制剂(阿帕替尼、安罗替尼等)及重组人血管内皮抑制素等靶向治疗。免疫疗法也发挥重要作用，如卡瑞利珠单抗+GP(吉西他滨+顺铂)，以及在挽救治疗方案中的特瑞普利单抗。
[0009]靶向治疗和免疫疗法作为新兴的热门治疗方法，在转移、复发呼吸系统肿瘤的治疗中起到重要作用，但其不良反应却不容忽视，可发生在皮肤、神经内分泌、胃肠道、肝、肺、心脏、肾脏等各个系统，还可能存在免疫性肠炎、肺炎、肝炎和心肌炎等严重不良反应。所以进一步提高联合治疗效果和减少毒性是免疫治疗与靶向治疗比较有突破前景的研究方向。
[0010]2017年Nature杂志发表的重要文献提出“肠
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肺轴微生态调控”，证实肠道菌群与肿瘤密切相关，然而现有技术还没有用于治疗呼吸系统肿瘤的微生态产品。
[0011]脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis，B.fragilis)为革兰氏染色阴性、杆状、两端钝圆而浓染、有荚膜、无芽胞、无动力的专性厌氧细菌，分为产肠毒素型(ETBF)和非产肠毒素型(NTBF)，是人及动物肠道正常菌群的一部分，主要存在于结肠中，呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。研究发现非产肠毒型脆弱拟杆菌(NTBF)具有重要的益生作用。能够调控T细胞扩张和产生阻碍致病性Th17细胞发育的细胞因子 IL
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10，具有抗炎作用，被认为是具有潜力的新一代益生菌。已有多项研究表明NTBF 能够分泌抑炎细胞因子IL
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10，促进Th1/Th2细胞的平衡，能够抵抗肠道炎症，对葡聚糖硫酸钠DSS诱导的结肠炎具有治疗作用。脆弱拟杆菌与宿主的关系在很大程度上取决于其高度复杂和动态的荚膜结构，B.fragilis两性离子荚膜多糖(capsularpolysaccharide，CPS)是首个公认的调节宿主免疫系统的发育，逆转无菌动物的形态、细胞和功能缺陷的共生因子。开发脆弱拟杆菌或其提取物两性离子荚膜多糖用于治疗呼吸系统肿瘤药物的应用方向具有前景且是必要的。

技术实现思路

[0012]为克服现有技术中所存在的上述缺陷，本专利技术的目的是提供一种脆弱拟杆菌及其
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脆弱拟杆菌和/或其两性离子荚膜多糖在制备预防和/或治疗呼吸系统肿瘤的产品中的应用，其特征在于，所述脆弱拟杆菌为保藏编号为CGMCC No.10685的脆弱拟杆菌ZY
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312。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脆弱拟杆菌是活菌、形态结构完整的灭活菌、形态结构不完整的灭活菌中的一种以上；和/或，所述脆弱拟杆菌是脆弱拟杆菌活菌体，经过灭活、基因重组、改造或修饰、减毒、化学处理、物理处理或灭活的脆弱拟杆菌，脆弱拟杆菌裂解物，脆弱拟杆菌液体培养上清液中的一种或多种。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述呼吸系统肿瘤包括头颈部癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌。优选地，所述头颈部癌还包括鼻咽癌、喉癌。4.根据权利要求1
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3中任一所述的应用，其特征在于，所述两性离子荚膜多糖含夹膜多糖A。优选地，所述荚膜多糖A的结构如下所示：更优选地，所述夹膜多糖A的重均分子量为80
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90kD；所述两性离子荚膜多糖中夹膜多糖A的含量超过95wt％。5.根据权利要求1
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4任一项所述的应用，其特征在于，所述两性离子荚膜多糖的制备方法包括以下步骤：(1)将发酵培养后的脆弱拟杆菌菌液离心收集沉淀物，即得脆弱拟杆菌菌泥；取菌泥，加入菌泥质量3～10倍的纯化水使菌体重悬，用酸溶液调节其pH至2.0～4.5，50～120℃提取0.5～3.0h，冷却至室温，常温离心，取上清，得到粗糖溶液；(2)粗糖溶液经超滤膜超滤浓缩、除小分子杂质，至电导率稳定，收集回流液；(3)回流液中加入等体积40mmol/L Tris
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HCl转盐；离子交换柱层析，梯度洗脱，分段收集，SEC
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HPLC跟踪监测，合并206nm吸收峰为单一、对称峰的组分，超滤膜超滤，加入纯化水反复超滤，至电导率稳定，收集回流液，冻干，得到脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖。优选地，步骤(1)中所述离心为11000～13000g离心8～12min；优选地，步骤(1)中所述酸溶液可以是有机酸、无机酸和酸性缓冲液中的一种或多种；其中，无机酸可以是盐酸、硫酸、磷酸等；有机酸可以是乙酸、柠檬酸等；优选地，步骤(2)中所述超滤膜可以为100、50、30、10、5、3KD或者任意两个分子量值之
间的范围；优选地，步骤(3)中所述离子交换柱为DEAE Sepharose Fast Flow的16mm
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200mm，层析时的流速15～25mL/min，pH5.0～9.0含0.2mol/L NaCl 20mmol/L Tris
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HCl梯度洗脱25个柱体积，分段收集，100mL/瓶(组分)；所述超滤膜为10KD。6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为食品或药品；优选地，所述药品为脆弱拟杆菌或其两...

【专利技术属性】
技术研发人员：王薇，蔡琰，郑丽君，梁德宝，
申请(专利权)人：广州知易生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：