一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒，通过在新型冠状病毒Delta突变株的两个突变位点L452R和T478K上分别设计ARMS引物作为第一引物、第二引物(双ARMS引物)，从而能够更加特异性的扩增含上述突变位点的目标序列，而对不含上述突变位点的序列，其扩增效率较低或无扩增，不需要根据扩增结果Ct值的差值来判断是否存在突变，从而特异性地检测被测样本中的Delta突变株，使其操作简便，成本低。成本低。成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及病毒检测
，特别涉及一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒。

技术介绍

[0002]Delta主要有D614G、 T478K、L452R和P681R等关键突变位点。
[0003]基因测序是目前最常用新冠变种鉴定技术，但存在速度慢、检测灵敏度较低、检测成本高的缺点，无法满足现场检测的需求，也不能做到高通量检测大量样本，采用RT
‑
PCR方法可有效的解决了上述问题。
[0004]专利文献《一种鉴定新型冠状病毒印度变种的qRT
‑
PCR方法》(申请号： 202110713012.9)公开了检测印度变异株的L452R、T478K、P681R三个突变位点，对每个变异位点设计两对引物，其中上游引物3
’
端分别匹配变异和非变异点，即变异上游引物和非变异上游引物，两对上游引物共用一个下游引物。
[0005]要检测样本是否有L452R、T478K、P681R突变时，需要6个不同的RT
‑
PCR反应体系，并且检测结果需要根据扩增结果Ct值的差值来判断是否存在突变，检测方法较为繁琐，成本高。

技术实现思路

[0006][0007]本专利技术的主要目的是提供一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒，旨在解决现有新型冠状病毒Delta突变株检测方法较为繁琐，成本高的问题。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提出一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒，包括用于扩增含所述Delta突变株的L452R突变位点和T478K突变位点及其之间的碱基序列的第一引物和第二引物，所述第一引物的3
’
末端碱基与所述L452R突变位点匹配，所述第二引物的3
’
末端碱基与所述T478K突变位点匹配。
[0009]可选地，所述第一引物和/或所述第二引物的3
’
端倒数第二个或倒数第三个碱基与模板碱基序列错配。
[0010]可选地，所述第一引物的碱基序列为5
’‑
TAAGGTTGGTGGTAATTATAAT TACCG
‑3’
，或5
’‑
CTAAGGTTGGTGGTAATTATAATTAaCG
‑3’
；
[0011]所述第二引物的碱基序列为5
’‑
AAACCTTCAACACCATTACAAGGTT
‑ꢀ3’
，或5
’‑
AAACCTTCAACACCATTACAAGaTT
‑3’
。
[0012]优选地，所述第一引物的碱基序列为 5
’‑
CTAAGGTTGGTGGTAATTATAATTAaCG
‑3’
，所述第二引物的碱基序列为 5
’‑
AAACCTTCAACACCATTACAAGaTT
‑3’
。
[0013]可选地，所述检测试剂盒还包括探针，所述探针序列为 5
’‑
TGTTTAGGAAGTCTAATCTC
‑3’
，其中，5
’
端带有FAM基团，3
’
端带有 BHQ1基团。
[0014]可选地，所述检测试剂盒还包括逆转录酶和Taq酶。
[0015]可选地，所述检测试剂盒还包括UNG酶。
[0016]可选地，所述检测试剂盒还包括阳性质控品、阴性质控品、复溶液和内标质控品，所述阳性质控品为含目的检测基因的RNA假病毒，所述阴性质控品为RNase free H2O，所述复溶液为稳定剂，所述内标质控品为含内标检测基因的RNA假病毒。
[0017]可选地，所述内标检测基因为人类基因组管家基因RNaseP。
[0018]可选地，所述检测试剂盒中的试剂为预混冻干粉形态。
[0019]本专利技术技术方案通过在新型冠状病毒Delta突变株的两个突变位点L452R 和T478K上分别设计ARMS引物作为第一引物、第二引物(双ARMS引物)，从而能够更加特异性的扩增含上述突变位点的目标序列，而对不含上述突变位点的序列，其扩增效率较低或无扩增，不需要根据扩增结果Ct值的差值来判断是否存在突变，从而特异性地检测被测样本中的Delta突变株，使其操作简便，成本低。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。
[0021]图1为双ARMS引物的工作原理示意图；
[0022]图2为检测2019新型冠状病毒L452R和T478K突变型模板(1.0E+08 copies/mL)结果；
[0023]图3为检测2019新型冠状病毒L452R和T478K野生型模板(1.0E+08 copies/mL)结果。
[0024]本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
[0025]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]本专利技术提出一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒，包括用于扩增含所述Delta突变株的L452R突变位点和T478K突变位点及其之间的碱基序列的第一引物和第二引物，所述第一引物的3
’
末端碱基与所述L452R突变位点匹配，所述第二引物的3
’
末端碱基与所述T478K突变位点匹配。
[0027]其中，第一引物和第二引物可以为上游引物或下游引物，当第一引物为上游引物时，第二引物为下游引物；当第一引物为下游引物时，第二引物为上游引物。
[0028]本专利技术技术方案通过在新型冠状病毒Delta突变株的两个突变位点L452R 和T478K上分别设计ARMS引物作为第一引物、第二引物(双ARMS引物)，从而能够更加特异性的扩增含上述突变位点的目标序列，而对不含上述突变位点的序列，其扩增效率较低或无扩增，不需要根据扩增结果Ct值的差值来判断是否存在突变，从而特异性地检测被测样本中的Delta突变株，使其操作简便，成本低。
[0029]具体的，ARMS为扩增阻滞突变系统，由于DNA聚合酶缺乏3'
‑
5'外切酶活性，如果引物的3'末端碱基不能与靶DNA正确互补配对，那么靶DNA就不能被有效地扩增，PCR引物3'未
端的错配导致扩增产物的急剧减少。因此，本申请利用Delt本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒Delta突变株的检测试剂盒，其特征在于，包括用于扩增含所述Delta突变株的L452R突变位点和T478K突变位点及其之间的碱基序列的第一引物和第二引物，所述第一引物的3
’
末端碱基与所述L452R突变位点匹配，所述第二引物的3
’
末端碱基与所述T478K突变位点匹配。2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一引物和/或所述第二引物的3
’
端倒数第二个或倒数第三个碱基与模板碱基序列错配。3.如权利要求1或2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一引物的碱基序列为5
’‑
TAAGGTTGGTGGTAATTATAATTACCG
‑3’
，或5
’‑
CTAAGGTTGGTGGTAATTATAATTAaCG
‑3’
；所述第二引物的碱基序列为5
’‑
AAACCTTCAACACCATTACAAGGTT
‑3’
，或5
’‑
AAACCTTCAACACCATTACAAGaTT
‑3’
。4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一引物的碱基序列为5
’‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：段锦艳，周志图，
申请(专利权)人：无锡百泰克生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：