基于miRNA特征标记的肝癌早期检测制造技术

一种用于肝癌早筛的miRNA特征标记检测方法以及相应的用于肝癌检测的试剂盒。其检测的miRNA包括选自hsa

【技术实现步骤摘要】
基于miRNA特征标记的肝癌早期检测


[0001]本专利技术涉及一种基于miRNA特征标记的肝癌检测方法，以及相应的用于肝癌检测的试剂盒，可用于肝癌的筛查。

技术介绍

[0002]肝癌被誉为“癌中之王”，是最常见的恶性肿瘤之一。中国每年新发肝癌患者约占全球一半以上，死亡率在所有恶性肿瘤中位列第二位，严重威胁人民的生命和健康。肝癌起病非常隐匿，早期无明显症状。约80％的肝癌患者首诊就已进入中晚期，5年生存率几乎为零，而早期肝癌患者经过治疗，5年生存率可达60％以上。因此，早诊早治是对抗肝癌的重要手段。甲胎蛋白(Alpha fetoprotein，AFP)作为一种血清标志物，是诊断肝癌的常用指标。然而，AFP检测的灵敏度较低，仅有60％
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70％的早期肝癌患者AFP值呈阳性。同时，常规的影像学检查，如B超和CT难以发现肿瘤直径小于2cm或密度近似肝实质的早期肝癌。因此，早期肝癌诊断仍面临较高的假阴性率及漏诊率。
[0003]因此，各国学者们从来没有停止过寻找新的更好的肝癌标志物的脚步。理想的肿瘤标志物需要有较高的特异性，能够将肝癌与肝硬化、肝炎、肝脏再生结节等区别开来；同时还需较高的敏感性，能够在肝癌早期提示诊断，且有易检测、可重复、侵入少的特点。
[0004]随着科学的发展和进步，以液体活检(Liquid biopsy)这种侵入式小、灵敏度高的肿瘤诊断技术应运而生。其中，循环miRNA分子标志物检测己被写入2019版《原发性肝癌诊疗规范》，并被纳入肝癌早期检测和诊断临床应用。
[0005]微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一种单链的、长度较短的内源性非编码RNA，己被确认可以广泛参与调节细胞生长和发育、分化、凋亡等生命活动，并能积极影响肿瘤的发生和发展。研究表明，约1/3以上的人类基因直接受到miRNA的调控作用，其生物学效应是阻遏或降解mRNA靶标转录和翻译成相应的蛋白质，进而参与生命活动的进程。其中，外周血中循环的、游离的miRNAs常以核酸.蛋白质复合物等形式稳定地存在于血液中，并可耐受反复冻融和极端pH环境。因此，这些因素决定了其不易降解的生物学特性。miRNAs在消化系统中的作用涉及发育、老化、分泌、代谢、病毒感染、免疫反应、肿瘤等等方面。

技术实现思路

[0006]具体地，本专利技术通过如下各项技术方案解决现有技术中存在的技术问题。
[0007]1.一种用于肝癌检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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3p，hsa
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3p，和hsa
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3p的一个或多个miRNA的检测试剂。
[0008]2.根据项1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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3p的至少两个miRNA的检测试剂。
[0009]3.根据项1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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ID NO:31所示的逆转录引物、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:34所示的探针。
[0024]18.根据项1
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17任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包含检测外参miRNA的检测试剂，所述外参miRNA是Cel
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39
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5p；优选地，所述检测外参miRNA的检测试剂是SEQ ID NO:35所示的逆转录引物、SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37所示的扩增引物，SEQ ID NO:38所示的探针。
[0025]19.根据项1
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18任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括针对血浆或血清样本的miRNA提取试剂。
[0026]20.根据项1
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19任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述肝癌为早期肝癌。
[0027]21.一种检测肝癌的方法，其特征在于，所述方法包含检测样本中的选自hsa
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3p的一个或多个miRNA的浓度。
[0028]22.根据项21所述的方法，其特征在于，所述方法包含检测样本中的选自hsa
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3p的至少两个miRNA的浓度。
[0029]23.根据项21所述的方法，其特征在于，所述方法包含检测样本中的选自hsa
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3p，hsa
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3p，hsa
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于肝癌检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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3p，hsa
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3p的一个或多个miRNA的检测试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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3p的至少两个miRNA的检测试剂。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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3p的至少三个miRNA的检测试剂。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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3p的至少四个miRNA的检测试剂。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测选自hsa
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3p的至少五个miRNA的检测试剂。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测hsa
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3p的检测试剂。7.根据权利要求1
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6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含至少一个逆转录引物，至少一个扩增引物，和/或至少一个探针。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含选自含SEQ ID NO:7,11,15,19,23和27至少一个的逆转录引物。9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含选自含SEQ ID NO:8
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9,12
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13,16
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17,20
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21,24
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25和28
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29至少一个的扩增引物。10.根据权利要求7
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9任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含选自含SEQ ID NO:10,14,18,22,26和30至少一个的探针。11.根据权利要求1
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10任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述检测hsa
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3p的检测试剂包含SEQ ID NO:7所示的逆转录引物、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:10所示的探针。12.根据权利要求1
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11任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述检测hsa
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3p的检测试剂包含SEQ ID NO:11所示的逆转录引物、SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:14所示的探针。13.根据权利要求1
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12任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述检测hsa
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5p的检测试剂包含SEQ ID NO:15所示的逆转录引物、SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:18所示的探针。14.根据权利要求1
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13任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述检测hsa
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5p的检测试剂包含SEQ ID NO:19所示的逆转录引物、SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:21所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:22所示的探针。15.根据权利要求1
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14任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述检测hsa
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3p
的检测试剂包含SEQ ID NO:23所示的逆转录引物、SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:26所示的探针。16.根据权利要求1
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15任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述检测hsa
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3p的检测试剂包含SEQ ID NO:27所示的逆转录引物、SEQ ID NO:28和SEQ ID NO:29所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:30所示的探针。17.根据权利要求1
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16任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包含检测内参miRNA的检测试剂，所述内参miRNA是hsa
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5p；优选地，所述检测内参miRNA的检测试剂包含SEQ ID NO:31所示的逆转录引物、SEQ ID NO:32和SEQ ID NO:33所示的扩增引物，和/或SEQ ID NO:34所示的探针。18.根据权利要求1
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17任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包含检测外参miRNA的检测试剂，所述外参miRNA是Cel
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5p；优选地，所述检测外参miRNA的检测试剂是SEQ ID NO:35所示的逆转录引物、SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37所示的扩增引物，SEQ ID NO:38所示的探针。19.根据权利要求1
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18任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括针对血浆或血清样本的miRNA提取试剂。20.根据权利要求1
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19任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述肝癌为早期肝癌。21.一种检测肝癌的方法，其特征在于，所述方法包含检测样本中的选自hsa
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3p，hsa
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3p，hsa
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【专利技术属性】
技术研发人员：张建勋，张茜，马刘敏，黄龙妹，吕宁，陈一友，
申请(专利权)人：杭州诺辉健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：