粘性生物样本液化剂及其组合产品、试剂盒、扩增方法、检测方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种粘性生物样本液化剂，其包括愈创甘油醚、强碱、莎梵婷和水性溶剂，还可选地包括吸附剂、刚性微颗粒中的一种或多种。本发明专利技术提供的粘性生物样本液化剂为可直扩型的液化剂，该液化剂能够在≤15min(甚至可达≤3min)快速高效地将粘性生物样本进行液化，而且可以在液化样本后免释放、免提取，直接用于核酸的扩增和/或检测，简化操作，降低成本，显著缩短检测时间，加快检测结果的获取。此外，本发明专利技术提供的粘性生物样本液化剂可以灵活地与不同的核酸检测平台联用，包括但不限于与实时定量荧光PCR仪或便携式核酸检测仪联用。定量荧光PCR仪或便携式核酸检测仪联用。定量荧光PCR仪或便携式核酸检测仪联用。

【技术实现步骤摘要】
粘性生物样本液化剂及其组合产品、试剂盒、扩增方法、检测方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物样本处理
，具体而言，涉及粘性生物样本液化剂及其组合产品、试剂盒、扩增方法、检测方法和应用。

技术介绍

[0002]随着荧光定量PCR以及多重PCR等技术在病原体检测领域的快速发展，通过痰液样本类型检测是否感染相应的病原体种类的需求日益增加。然而痰液样本具有粘度大、蛋白多、成分复杂的特点，包含粘蛋白和其它多种蛋白(如免疫蛋白)、多种酶类、脱落细胞、微生物及其它吸入杂质等，不便于直接检测，临床上痰液样本的检测需要先对痰液进行液化处理。
[0003]常见的痰液液化方法为氢氧化钠法、DTT(二硫苏糖醇)法以及蛋白酶法。氢氧化钠法是最常用的痰液液化方法，该方法比较简单，利用主成分为一定浓度的氢氧化钠溶液在60℃～80℃(也可在室温条件下)液化痰液，该方法用于核酸检测时其强碱性环境易造成核酸损失。蛋白酶法的原理是利用蛋白酶消化痰液黏蛋白，该方法的酶解反应耗时较长，所需蛋白酶成本较高，且黏蛋白消化效率低。DTT(二硫苏糖醇)法是目前最常用的痰液液化方法，利用含巯基(
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SH)的DTT(二硫苏糖醇)断裂痰液中导致粘稠的主要成分粘蛋白，以PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)提供生理缓冲，通常还会加入乙醇等固定细胞。该方法耗时长，且使用的DTT(二硫苏糖醇)成本较高，且DTT稳定性差，需要在低温条件下保存，同时DTT存在一定的毒性，不适合临床上大批量处理痰液样本。
[0004]由于痰液样本粘度大，干扰组分较多，对其采用传统方式进行核酸检测时，样本经液化后，仍需进行释放、提纯等复杂的样品处理过程，以便去除抑制PCR反应的因素，才能进行核酸的扩增和/或检测。这就导致从采集到样本到进行检测，需要经过繁琐的步骤，操作复杂，耗时长，成本高，不适合临床上大批量处理痰液样本。
[0005]有鉴于此，本领域亟需开发一种粘性生物样本的快速处理方法。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的包括提供能够快速处理粘性生物样本液化剂，该液化剂能够在液化样本后免释放、免提取，直接用于核酸的扩增和/或检测，简化操作，降低成本，降低检测时间，加快检测结果的获取。本专利技术提供的粘性生物样本液化剂为可直扩型的液化剂，可以单独提供，还可以提供粘性生物样本液化保存组合产品或液化试剂盒。
[0007]在本专利技术的第一方面，提供一种粘性生物样本液化剂，包括如下组分：20mmol/L～1mol/L愈创甘油醚、第一强碱、20mmol/L～200mmol/L莎梵婷和第一水性溶剂；所述粘性生物样本液化剂的pH≥10。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，所述创甘油醚和所述莎梵婷的质量比为(1～5):1；及/或，
[0009]所述愈创甘油醚的浓度为20mmol/L～500mmol/L；及/或，
[0010]所述莎梵婷的浓度为20mmol/L～150mmol/L；及/或，
[0011]所述第一强碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾；及/或，
[0012]所述粘性生物样本液化剂的pH为10～14。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述愈创甘油醚和所述莎梵婷的质量比为(2～5):1；及/或，
[0014]所述愈创甘油醚的浓度为80mmol/L～120mmol/L；及/或，
[0015]所述莎梵婷的浓度为30mmol/L～60mmol/L；及/或，
[0016]所述粘性生物样本液化剂的pH为10～12或12～14。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述粘性生物样本液化剂中，所述第一水性溶剂为水或第一缓冲组分。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述第一水性溶剂为无RNA酶的水；及/或，
[0019]所述第一缓冲组分选自Tris
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HCl、磷酸二氢钾
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氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠
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磷酸二氢钾缓冲液和磷酸氢二钠
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柠檬酸缓冲液中的一种或多种的组合。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述第一水性溶剂为无核酸酶的水。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述粘性生物样本液化剂还包括吸附剂和刚性微颗粒中的一种或两种。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述吸附剂为螯合树脂。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述吸附剂为Chelex树脂；及/或，所述吸附剂在所述粘性生物样本液化剂中的用量为1％～15％(w/v)。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述刚性微颗粒选自氧化锆、氮化硅、陶粒、硬质不锈钢、硬质碳化钨、烧结刚玉和玛瑙中的一种或多种；及/或，
[0025]所述刚性微颗粒为球体、近球体、椭球体、柱状、棒状、多面体或不规则形状；及/或，
[0026]所述刚性微颗粒的平均粒径为0.01mm～10mm；及/或，
[0027]所述刚性微颗粒的用量为0.1g/mL～2g/mL。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，包括如下组分：80mmol/L～120mmol/L愈创甘油醚、8mmol/L～12mmol/L氢氧化钠、0.5g/mL～1.5g/mL的平均粒径为0.1mm～10mm的氧化锆珠、5％～10％(w/v)吸附剂、30mmol/L～60mmol/L莎梵婷和所述第一水性溶剂。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述刚性微颗粒选自氧化锆、氮化硅、陶粒、硬质不锈钢、硬质碳化钨、烧结刚玉和玛瑙中的一种或多种；及/或，
[0030]所述刚性微颗粒为球体、近球体、椭球体、柱状、棒状、多面体或不规则形状；及/或，
[0031]所述刚性微颗粒的平均粒径为0.01mm～10mm；及/或，
[0032]所述刚性微颗粒的用量为0.1g/mL～2g/mL。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中，所述粘性生物样本液化剂还包含1mmol/L～200mmol/L的Na
+
和/或K
+
。
[0034]本专利技术的第一方面所提供的粘性生物样本液化剂能兼容扩增体系。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，该粘性生物样本液化剂能够在液化后直接进行核酸
扩增。“核酸扩增”可以为DNA扩增和/或RNA扩增。核酸扩增方式可以任选本领域中合适的DNA和/或RNA的扩增方式。
[0036]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术的第一方面所提供的粘性生物样本液化剂为可直扩型，进一步可以为DNA和/或RNA直扩型。在一些优选例中，该粘性生物样本液化剂为PCR直扩型。
[0037]在本专利技术的第二方面，提供一种粘性生物样本液化保存组合产品，包括液化组分和保存组分；其中，所述液化组分包括本专利技术的第一方面任一种所述粘性生物样本液化剂中的各组分。
[0038]在本专利技术的第三方面，提供一种液化试剂盒，包括液化组分、可选的保存组分和可选的扩增组分；其中，所述液化组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粘性生物样本液化剂，其特征在于，包括如下组分：20mmol/L～1mol/L愈创甘油醚、第一强碱、20mmol/L～200mmol/L莎梵婷和第一水性溶剂；所述粘性生物样本液化剂的pH≥10。2.根据权利要求1所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述愈创甘油醚和所述莎梵婷的质量比为(1～5):1；及/或，所述愈创甘油醚的浓度为20mmol/L～500mmol/L；及/或，所述莎梵婷的浓度为20mmol/L～150mmol/L；及/或，所述第一强碱为氢氧化钠和/或氢氧化钾；及/或，所述粘性生物样本液化剂的pH为10～14。3.根据权利要求1所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述愈创甘油醚和所述莎梵婷的质量比为(2～5):1；及/或，所述愈创甘油醚的浓度为80mmol/L～120mmol/L；及/或，所述莎梵婷的浓度为30mmol/L～60mmol/L；及/或，所述粘性生物样本液化剂的pH为10～12或12～14。4.根据权利要求1所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述粘性生物样本液化剂中，所述第一水性溶剂为水或第一缓冲组分。5.根据权利要求4所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述第一水性溶剂为无RNA酶的水；及/或，所述第一缓冲组分选自Tris
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HCl、磷酸二氢钾
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氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠
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磷酸二氢钾缓冲液和磷酸氢二钠
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柠檬酸缓冲液中的一种或多种的组合。6.根据权利要求5所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述第一水性溶剂为无核酸酶的水。7.根据权利要求1所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，还包括吸附剂和刚性微颗粒中的一种或两种。8.根据权利要求7所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述吸附剂为螯合树脂。9.根据权利要求8所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述吸附剂为Chelex树脂；及/或，所述吸附剂在所述粘性生物样本液化剂中的用量为1％～15％(w/v)。10.根据权利要求7所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述刚性微颗粒选自氧化锆、氮化硅、陶粒、硬质不锈钢、硬质碳化钨、烧结刚玉和玛瑙中的一种或多种；及/或，所述刚性微颗粒为球体、近球体、椭球体、柱状、棒状、多面体或不规则形状；及/或，所述刚性微颗粒的平均粒径为0.01mm～10mm；及/或，所述刚性微颗粒的用量为0.1g/mL～2g/mL。11.根据权利要求1所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，还包含1mmol/L～200mmol/L的Na
+
和/或K
+
。12.根据权利要求1所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，包括如下组分：80mmol/L～120mmol/L愈创甘油醚、8mmol/L～12mmol/L氢氧化钠、0.5g/mL～1.5g/mL的平均粒径为0.1mm～10mm的氧化锆珠、5％～10％(w/v)吸附剂、30mmol/L～60mmol/L莎梵婷和所述第一水性溶剂。13.根据权利要求1～12中任一项所述粘性生物样本液化剂，其特征在于，所述粘性生
物样本液化剂能兼容扩增体系，进一步为DNA和/或RNA直扩型。14.一种粘性生物样本液化保存组合产品，其特征在于，包括液化组分和保存组分；所述液化组分包括权利要求1～13中任一项所述粘性生物样本液化剂中的各组分。15.一种液化试剂盒，其特征在于，包括液化组分、可选的保存组分和可选的扩增组分；其中，所述液化组分包括：组分L1)：愈创甘油醚；组分L2)：第一强碱，所述第一强碱能够调节pH≥10；组分L3)：莎梵婷；组分L4)：可选的钠源和/或钾源；组分L5)：可选的第一水性溶剂；组分L6...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓中平，陈诗谣，邓勇，刘佳，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：