用于宫颈癌筛查的标志物、探针组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于宫颈癌筛查的标志物、探针组合物及其应用，所述标志物选自9个标志物的任一种。本发明专利技术使用所述的标志物，能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态，从而可以用于对外周血游离DNA的检测，并且，本发明专利技术所述的组合物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，降低了侵入性检测造成的危害，所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度，能够实现实时监测。实时监测。

【技术实现步骤摘要】
用于宫颈癌筛查的标志物、探针组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种用于宫颈癌筛查的标志物、探针组合物及其应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌是最常见的妇科癌症类型之一，据2020年癌症统计，全球宫颈癌新发病例约604,127例，死亡病例约341,000例，在女性新发病率和死亡率均排第4位。全球超过80％的宫颈癌病例发生在发展中国家和不发达国家。2020年中国新发宫颈癌病例约为11万，死亡病例约6万。流行病学数据显示，持续感染高风险人乳头状瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是宫颈癌发生的主要危险因素。当机体感染HPV后会产生免疫应答，在这个过程中绝大多数HPV感染在其宿主中不会引起临床表现，并且大多数在短时间后被清除，但仍有～10％会持续存在。从HPV感染的宫颈上皮内瘤变到癌变发生是个缓慢的过程，长达数年甚至数十年。2018年，WHO发起了一项消除宫颈癌的全球战略，旨在将全球宫颈癌发病率降低到4/10万。其中，人群筛查是促进该项目实现的重大干预手段之一。
[0003]癌症诊断时的临床分期是癌症患者存活的主要决定因素。而癌症筛查可以实现癌症的预防、早诊早干预，进而提高5年生存率。目前临床上的宫颈癌筛查方法包含：细胞学筛查、阴道镜检查、宫颈造影和HPV DNA检测。尽管这些筛查方法的应用已经大大降低了宫颈癌的发病率和死亡率，但由于子宫内部复杂环境与检测方法质量的影响，导致依然有大量宫颈癌患者被遗漏或者产生过度医疗。例如，细胞学筛查结果依赖于宫颈细胞涂片质量和细胞学专家经验，导致该方法的敏感性不高。而HPV DNA技术可以有效提高HPV感染诱发宫颈癌的敏感性，降低阴道镜的检查。但由于该方法无法准确鉴别致病性HPV感染和瞬时性感染，进而产生高假阳性结果，转诊阴道镜检查产生过度医疗。除此之外，由于这些筛查方法都具有侵入性，且成本高，影响依从性，不利于开展宫颈癌的人群筛查。因此，临床上亟需综合高灵敏性和特异性，以及客观准确度高，且有助于从机会性筛查向人群普查推广的宫颈癌早期预防和诊断工具。
[0004]表观遗传学研究显示，特异性DNA甲基化异常通过抑制癌基因转录失活促进癌症发生。例如，目前已发现的CDH1在大多数原发宫颈癌中显示高甲基化。然而，目前尚无甲基化生物标记物用于宫颈癌的临床筛查或诊断。DNA甲基化已被证明具有组织特异性,利用血液中游离DNA甲基化信号可用于早期癌症的检测，并可根据循环肿瘤DNA(ctDNA)甲基化特征追踪到肿瘤原发部位。我们预期它将显著改善健康结果，减少宫颈癌等可以早期发现的疾病的发生，并最终可能提高生命健康质量。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供了一种检测宫颈癌的标志物以及探针组合物，可以用于宫颈癌的筛查，所述的标志物以非侵入性的方式用于无症状人群的筛查，以及癌症患者的预后检测，降低了侵入性检测造成的危害，并且具有更高的灵敏度和准确性。
[0006]本专利技术具体技术方案如下：
[0007]1.一种用于检测宫颈癌的标志物，其特征在于，所述标志物选自下述中的一种：LINC00643、ZNF773、CITED1、GABRA1、BCOR、NXPH1、DIAPH2、FAM133A和BCOR。
[0008]2.根据项1所述的标志物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:1
‑
9所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物。
[0009]3.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含靶向项1或2所述标志物甲基化的探针。
[0010]4.根据项3所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的CG高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的CG低甲基化的区域杂交；
[0011]优选的，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的CG高甲基化的区域的正义链和反义链的每个核苷酸杂交；
[0012]优选的，所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的CG低甲基化的区域的正义链和反义链的每个核苷酸杂交；
[0013]优选的，n和m均是1
‑
10中的任意整数；
[0014]优选的，第n
‑
1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠，优选的，x1为0
‑
100中的任意整数；
[0015]优选的，第m
‑
1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选的，x2为0
‑
100中的任意整数；
[0016]进一步优选的，所述第一探针组合物包括如SEQ ID NO:10
‑
27所示的一种或两种核苷酸序列，所述第二探针组合物包括如SEQ ID NO:28
‑
45所示的一种或两种和苷酸序列。
[0017]5.标志物在制备用于检测宫颈癌的试剂盒中的用途，其特征在于，所述标志物选自下述中的一种：LINC00643、ZNF773、CITED1、GABRA1、BCOR、NXPH1、DIAPH2、FAM133A和BCOR。
[0018]6.根据项5所述的用途，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:1
‑
9所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物；
[0019]优选的，所述探针组合物用于靶向宫颈癌的甲基化后的标志物；
[0020]优选的，所述探针组合物为项3或4所述的探针组合物。
[0021]7.一种用于宫颈癌检测的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测选自下述标志物中任一种甲基化的核酸：LINC00643、ZNF773、CITED1、GABRA1、BCOR、NXPH1、DIAPH2、FAM133A和BCOR。
[0022]8.根据项7所述的组合物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:1
‑
9所示的一种。
[0023]9.根据项7或8所述的组合物，其特征在于，所述核酸包括项3或4所述的探针组合物；
[0024]优选的，所述核酸包括：
[0025]引物，所述引物为所述标志物的靶序列中的至少9个核苷酸的片段，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列；
[0026]优选的，所述核酸还包括：
[0027]探针，所述探针为在中等严紧或严紧条件下与所述标志物的靶序列中的至少15个核苷酸片段杂交，所述片段包含至少一个CpG二核苷酸序列；
[0028]优选的，所述组合物还包括将标志物的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂；
[0029]优选的，所述用于检测标志物的靶序列甲基化的核酸还包括：
[0030]优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。
[0031]10.一种试剂盒，其包含项1或2所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测宫颈癌的标志物，其特征在于，所述标志物选自下述中的一种：LINC00643、ZNF773、CITED1、GABRA1、BCOR、NXPH1、DIAPH2、FAM133A和BCOR。2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ ID NO:1
‑
9所示的一种，优选所述标志物为甲基化后的标志物。3.一种探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物甲基化的探针。4.根据权利要求3所述的探针组合物，其特征在于，所述探针组合物包含高甲基化的第一探针组合物和低甲基化的第二探针组合物，所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的CG高甲基化的区域杂交，所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的CG低甲基化的区域杂交；优选的，所述第一探针组合物包括n个探针，所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的CG高甲基化的区域的正义链和反义链的每个核苷酸杂交；优选的，所述第二探针组合物包括m个探针，所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的CG低甲基化的区域的正义链和反义链的每个核苷酸杂交；优选的，n和m均是1
‑
10中的任意整数；优选的，第n
‑
1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠，优选的，x1为0
‑
100中的任意整数；优选的，第m
‑
1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠，优选的，x2为0
‑
100中的任意整数；进一步优选的，所述第一探针组合物包括如SEQ ID NO:10
‑
27所示的一种或两种核苷酸序列，所述第二探针组合物包括如SEQ ID NO:28
‑
45所示的一种或两种和苷酸序列。5.标志物在制备用于检测宫颈癌的试剂盒中的用途，其特征在于，所述标志...

【专利技术属性】
技术研发人员：关晋霞，韩晓亮，连明，张聪，王小奇，吴宁宁，李永君，叶志海，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：