一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白及其制备方法，该产品通过如下方法制备：转染含编码重组颗粒蛋白序列的质粒载体至宿主细胞并在细胞内进行表达、收获并破碎菌体、加热处理、尿素和氯化钠孵育、层析。产品粒径均匀，粒径大小批间一致性好。通过本发明专利技术方法制备产品可减少工业化大生产的成本，操作简单，产品杂质残留低，安全性好。安全性好。安全性好。

【技术实现步骤摘要】
一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及重组颗粒蛋白产品及其生产制备方法。

技术介绍

[0002]重组颗粒蛋白产品可通过多种普通技术知识范围内的制备方法(盐沉淀、密度梯度离心、过滤、层析、透析等)进行制备，但是仍然存在颗粒蛋白在工业化生产制备过程中不易成型、制备纯度低，工业化生产成本高等问题，因此开发适合工业化生产的高效、稳定、简便、低成本的重组颗粒蛋白产品及其制备方法，仍是本领域需要解决的问题。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0004]>SEQ ID NO:1
[0005]DSATHIKFSKRDEDGKELAGATMELRDSSGKTISTWISDGQVKDFYLYPGKYTFVETAAPDGYEVATAITFTVNEQGQVTVNGKATKGDAHIGGSGGSGGSGGSMKMEELFKKHKIVAVLRANSVEEAKKKALAVFLGGVHLIEITFTVPDADTVIKELSFLKEMGAIIGAGTVTSVEQARKAVESGAEFIVSPHLDEEISQFAKEKGVFYMPGVMTPTELVKAMKLGHTILKLFPGEVVGPQFVKAMKGPFPNVKFVPTGGVNLDNVCEWFKAGVLAVGVGSALVKGTPVEVAEKAKAFVEKIRGCTE
[0006]本专利技术提供一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，采用如下步骤制备：
[0007](1)转染含编码重组颗粒蛋白序列的质粒载体至宿主细胞，并在细胞内进行表达；(2)收获菌体，并通过高压均质破碎；(3)a.调节高压均质上清液pH为7.0
‑
9.0，在80℃
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100℃加热15分钟以上，恢复至室温后离心，弃沉淀，收集上清液；加入稀释缓冲液，调节pH值为pH7.0
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8.0；b.将溶液置于50℃
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70℃条件下加热5
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30分钟，立即离心，弃上清，收集沉淀；使用重悬缓冲液在pH7.0
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11.0条件下重悬沉淀；(4)加入尿素和氯化钠，尿素浓度为6M
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8M；(5)进行阴离子交换层析和疏水层析。
[0008]本专利技术提供一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，采用如下步骤制备：
[0009](1)转染含编码重组颗粒蛋白序列的质粒载体至宿主细胞，并在细胞内进行表达；(2)收获菌体，并通过高压均质破碎；(3)a.调节高压均质上清液pH为8.0
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10.0，在80℃
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95℃加热15
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80分钟，恢复至室温后离心，弃沉淀，收集上清液；加入稀释缓冲液，调节pH值为pH7.0
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8.0；b.将溶液置于50℃
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65℃条件下加热5
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20分钟，立即离心，弃上清，收集沉淀；使用重悬缓冲液在pH7.0
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11.0条件下重悬沉淀；(4)加入尿素和氯化钠；(5)进行阴离子交换层析和疏水层析。
[0010]本专利技术提供一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，采用如下步骤制备：
[0011](1)转染含编码所述重组颗粒蛋白序列的质粒载体至宿主细胞，并在细胞内进行表达；(2)收获菌体，并通过高压均质破碎；(3)a.调节高压均质上清液pH为7.0
‑
8.0，在4℃
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25℃加热15分钟以上，恢复至室温后离心，弃沉淀，收集上清液；加入稀释缓冲液，调节pH值为pH7.0
‑
8.0；b.将溶液置于50℃
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70℃条件下加热5
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30分钟，立即离心，弃上清，收集沉淀；使用重悬缓冲液在pH7.0
‑
11.0条件下重悬沉淀；(4)加入尿素和氯化钠；(5)进行阴离子交换层析和疏水层析。
[0012]本专利技术提供一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，采用如下步骤制备：
[0013](1)转染含编码所述重组颗粒蛋白序列的质粒载体至宿主细胞，并在细胞内进行表达；(2)收获菌体，并通过高压均质破碎；(3)a.调节高压均质上清液pH为9.0，在4℃
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95℃加热15分钟以上；优选在60℃
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90℃加热15
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60分钟；更优选在80℃
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90℃加热15
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45分钟；然后，恢复至室温后离心，弃沉淀，收集上清液；加入稀释缓冲液，调节pH值为pH7.0
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8.0；b.将溶液置于50℃
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70℃条件下加热5
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30分钟，立即离心，弃上清，收集沉淀；使用重悬缓冲液在pH7.0
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11.0条件下重悬沉淀；(4)加入尿素和氯化钠；(5)进行阴离子交换层析和疏水层析。
[0014]本专利技术提供一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品的制备方法，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其包括如下步骤：(1)转染含编码重组颗粒蛋白序列的质粒载体至宿主细胞，并在细胞内进行表达；(2)收获菌体，并通过高压均质破碎；(3)a.调节高压均质上清液pH为7.0
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9.0，在80℃
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100℃加热15分钟以上，恢复至室温后离心，弃沉淀，收集上清液；加入稀释缓冲液，调节pH值为pH7.0
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8.0；b.将溶液置于50℃
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70℃条件下加热5
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30分钟，立即离心，弃上清，收集沉淀；使用重悬缓冲液在pH7.0
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11.0条件下重悬沉淀；(4)加入尿素和氯化钠，尿素浓度为6M
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8M；(5)进行阴离子交换层析和疏水层析。
[0015]本专利技术提供一种适合工业化生产的重组颗粒蛋白产品的制备方法，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其包括如下步骤：(1)转染含编码重组颗粒蛋白序列的质粒载体至宿主细胞，并在细胞内进行表达；(2)收获菌体，并通过高压均质破碎；(3)a.调节高压均质上清液pH为8.0
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10.0，在80℃
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95℃加热15
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80分钟，恢复至室温后离心，弃沉淀，收集上清液；加入稀释缓冲液，调节pH值为pH7.0
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8.0；b.将溶液置于50℃
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65℃条件下加热5
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20分钟，立即离心，弃上清，收集沉淀；使用重悬缓冲液在pH7.0<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
Phenyl、Capto Phenyl Impres或Capto Octyl。9.根据权利要6所述的制备方法，在阴离子交换层析获得的洗脱收集液中和疏水层析缓冲液中添加稳定剂，稳定剂选自氨基酸、多元醇或糖，所述氨基酸选自...

【专利技术属性】
技术研发人员：晋竞，周宇，李广辉，谢志卿，
申请(专利权)人：烟台派诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：