一种SARS-CoV-2病毒的单链抗体及筛选方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS
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CoV
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2病毒的单链抗体及筛选方法和用途


[0001]本专利技术涉及一种SARS
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CoV
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2病毒的单链抗体及筛选方法和用途，尤其涉及对SARS
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CoV
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2病毒具有良好特异性的单链抗体。

技术介绍

[0002]冠状病毒属的病毒是具有外套膜包裹的RNA病毒，其直径约100
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160nm，遗传物质在所有RNA病毒中最大。包裹病毒粒子的脂肪膜表面有三个糖蛋白：棘突糖蛋白(S，是受体结合位点、溶细胞作用和主要抗原位点)；小包膜糖蛋白(E，较小，与胞膜结合的蛋白)；膜糖蛋白(M，负责营养物质的跨膜运输、新生病毒出芽释放与病毒外包膜的形成)。
[0003]S蛋白被酶解为S1和S2，S1内有一部分区域为受体结合域(RBD)与ACE2紧密结合，是病毒和受体相互作用的关键因素。
[0004]SARS
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CoV
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2属于一种新型冠状病毒，在SARS
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CoV
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2感染中，与SARS
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CoV(主要感染纤毛支气管上皮细胞和II型肺细胞)感染相同，血管紧张素转化酶II(ACE2)被证明是细胞受体。SARS
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CoV
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2可以进入表达ACE2的细胞，但不能进入没有ACE2的细胞。因此，ACE2在SARS
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CoV
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2感染中起着至关重要的作用。
[0005]针对SARS
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CoV
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2病毒，制药和检测都需要特异性良好的抗体，但不同抗体之间的特异性存在差异，选择具有良好特异性的抗体对制药和检测有重要的意义，但抗体的筛选是困难的，随机性很大，现有技术中尚没有特异性很好的抗体被筛选出来。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种SARS
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CoV
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2病毒的单链抗体，所述单链抗体与抗原S1
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RBD的SEQ NO：1序列特异性结合其中，编码重链的可变区的核苷酸序列如SEQ NO：2所示的序列；编码轻链的可变区的核苷酸序列为SEQ NO：3所示的序列。
[0007]根据本专利技术的一个实施方式，连接肽的氨基酸序列为SEQ NO：4所示的序列。
[0008]根据本专利技术的另一个方面，提供了一种制备SARS
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CoV
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2病毒的单链抗体的方法，包括，选取SARS
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CoV
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2抗原S
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RBD，从全人源抗体文库中筛选得到单链抗体，所述单链抗体编码重链的可变区的核苷酸序列如SEQ NO：2所示的序列，编码轻链的可变区的核苷酸序列为SEQ NO：3所示的序列，连接肽的氨基酸序列为SEQ NO：4所示的序列。
[0009]一种试剂盒，包括上述任一项所述的单链抗体。
[0010]一种在药学上可接受的载体，包含上述任一项所述的单链抗体。
[0011]本专利技术中的单链抗体(ScFv)，靶向S1
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RBD，阻止S1
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RBD与ACE2的结合，特异性能好；而且，本专利技术的scFv为全人源单抗，没有免疫原性反应。
附图说明
[0012]图1是阳性克隆显色在深孔板的示意图；
[0013]图2是单链抗体的阳性克隆的OD450数值折线图。
具体实施方式
[0014]下面结合附图对本专利技术的较佳实施例进行详细阐述，参考标号是指本专利技术中的组件、技术，以便本专利技术的优点和特征在适合的环境下实现能更易于被理解。下面的描述是对本专利技术权利要求的具体化，并且与权利要求相关的其它没有明确说明的具体实现也属于权利要求的范围。
[0015]本专利技术中，抗原S1
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RBD来自恺佧生物科技(上海)有限公司。
[0016]抗体文库使用编号:Hu001—Hu010，来自成都仁域生物技术有限公司。
[0017]Hu001—Hu010是全人源抗体文库编号。
[0018]本专利技术以从噬菌体展示抗体文库中通过亲和筛选的方法为例进行说明其获取方法。
[0019]包被：将抗原S1
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RBD，序列为SEQ NO1，用包被液稀释至浓度5ug/ml，(例如PBS包被液)，加入到ELISA板的孔位中，在4℃条件下持续12小时以上，使抗原S1
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RBD连接到ELISA板上。
[0020]洗涤：倒去ELISA板中的包被液，用无菌吸水纸拍干ELISA板，并用PBS洗涤3次，洗涤去除未结合的抗原S1
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RBD。
[0021]封闭：然后加入350ul封闭液，对ELISA板进行封闭，37℃放置1小时，避免抗体库中非目标蛋白与ELISA板结合。封闭完成后，倒掉封闭液，利用无菌吸水纸将ELISA板拍干，用PBS洗涤3次，以除去残留的封闭液。封闭液可以采用现有的或将来专利技术的封闭液，本专利技术不予限定。
[0022]扣除抗体库背景：取100ul抗体库+400ul 2％脱脂奶粉(溶于PBS)混匀，37℃放置1小时，用于与一部分非特异性单链抗体结合，避免这些单链抗体与抗原S1
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RBD结合，影响特异性单链抗体富集。
[0023]结合：将扣除背景的抗体库加入带有抗原S1
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RBD的ELISA板孔中，按照100ul/孔，在37℃条件下，以100rpm转速缓摇1小时，使抗体库中的目标单链抗体与抗原S1
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RBD特异性结合。
[0024]洗涤：洗涤带有抗原S1
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RBD的ELISA板，将未与抗原S1
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RBD结合的抗体及杂质除去。例如：PBS洗1次，0.1％PBST洗板9次，PBS洗1次，每次1min。从而，在ELISA板上，与抗原S1
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RBD特异性结合的单链抗体被富集。
[0025]加入洗脱液：将与抗原S1
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RBD特异性结合的单链抗体从ELISA板孔内洗脱。例如：加入洗脱液，100ul/孔，室温缓摇10min，用枪头吸出洗脱液，加入0.5倍体积的中和液中，混匀，静置1h，4℃保存。
[0026]第一轮筛选结束，洗脱物中含有较为富集的目标单链抗体。
[0027]针对第一轮筛选的产物进行滴度测定：测量洗脱液中单链抗体的浓度。例如：在2YT(培养基)中梯度稀释洗脱的抗体库(第一轮10E2～3，第二轮10E4～5)。
[0028]第一步，挑取TG1单克隆，加入10ml 2YT中，37℃、200rpm培养至对数期OD600＝0.6
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0.8，放置在37℃温箱备用；
[0029]第二步，向200ul处于上述对数期的TG1中加入10E1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS
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CoV
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2病毒的单链抗体，所述单链抗体与抗原S1
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RBD特异性结合，其特征在于，编码重链的可变区的核苷酸序列如SEQ NO：2所示的序列；编码轻链的可变区的核苷酸序列为SEQ NO：3所示的序列。2.根据权利要求1所述的单链抗体，其特征在于，连接肽的氨基酸序列为SEQ NO：4所示的序列。3.一种筛选SARS
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CoV
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2病毒的单链抗体的方法，其特征在于，包括，步骤1，选取SARS
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CoV
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2抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴浩飞，徐奇，杨靖，葛灵睿，谢小静，汪雨航，游洪伟，贾兰淑，汤静雯，沈鹏飞，
申请(专利权)人：江苏中慧元通生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：