RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子及双链嵌合体型NA分子制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种新型的RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子、及双链嵌合体型NA分子。即，本发明专利技术的一个实施方案为一种用于以具有点突变的突变型等位基因为靶基因的RNA干涉法的RNA分子，该RNA分子中，(1)具有与突变型等位基因的编码区互补的碱基序列；(2)从与突变型等位基因互补的碱基序列的最靠近5

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子及双链嵌合体型NA分子


[0001]本专利技术涉及一种用于RNA干涉法的RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子、及双链嵌合体型NA分子。

技术介绍

[0002]RNA干涉法为一种用于在细胞内特异性抑制特定靶基因的表达的简便且有效的方法。
[0003]然而，已知该方法会超出预计对即便原本并非为靶标的基因(脱靶(off
‑
target))也抑制其表达(Jackson,A.L.et al.,(2003)Nature Biotechnology vol.21,p.635
‑
7)。尤其是，已知若siRNA对靶基因的亲和力变强，则脱靶效果也变大(Ui
‑
Tei,K.et al.,(2008)Nucleic Acids Res.vol.36,p.7100
‑
7109)。

技术实现思路

本专利技术要解决的技术问题
[0004]本专利技术目的在于提供一种新型的RNA分子、新型的嵌合体型NA分子、新型的双链RNA分子及新型的双链嵌合体型NA分子。解决技术问题的技术手段
[0005]本申请的专利技术人为了确定脱靶效果低的RNA序列，进行了不懈努力，结果发现通过使第5个或第6个碱基不匹配，并在第6
‑
8个或第7
‑
8个核糖核苷酸中修饰五碳糖的第2
’
位，对于第10个或第11个碱基，特别是脱靶效果降低。据此，通过在以相对于某个基因的野生型等位基因具有一个碱基的点突变的突变型等位基因为靶基因的RNA干涉法中，以使第10个或第11个碱基对应于点突变的位置并为突变型等位基因所具有的碱基的方式设计RNA分子，并将以该RNA分子为向导链的双链RNA分子用于RNA干涉法，从而成功地主要抑制突变型等位基因的表达且事实上不抑制野生型等位基因的表达，完成了本专利技术。
[0006][1]普通的基因[1
‑
1]本专利技术的一个实施方案为一种RNA分子，其用于以相对于基因的野生型等位基因具有一个碱基的点突变的突变型等位基因为靶基因的RNA干涉法，所述RNA分子满足以下的要件：(1)具有除下述(2
‑
1)中规定的碱基以外与所述突变型等位基因的编码区互补的碱基序列；(2)从与所述突变型等位基因互补的碱基序列的最靠近5
’
侧的碱基开始计数，(2
‑
1)第5个或第6个碱基与所述突变型等位基因的碱基不匹配；(2
‑
2)第10位或第11位对应于所述点突变的位置，第10个或第11个碱基对应于所述突变型等位基因所具有的碱基；及(2
‑
3)在第6
‑
8个或第7
‑
8个核糖核苷酸中，五碳糖的第2
’
位被OCH3、卤素或LNA修
饰。所述卤素可以为F。当上述(1)中的规定的碱基序列的5
’
末端的碱基并非腺嘌呤或尿嘧啶时，该碱基可以被腺嘌呤或尿嘧啶取代。当上述(1)中规定的碱基序列的3
’
末端的碱基并非胞嘧啶或鸟嘌呤时，该碱基可以被胞嘧啶或鸟嘌呤取代。上述任一RNA分子可由13～28个核苷酸构成。上述任一RNA分子可以为一个或多个核糖核苷酸被脱氧核糖核苷酸、人工核酸或核酸类似物取代而成的嵌合体型NA分子。
[0007][1
‑
2]本专利技术的另一个实施方案为一种双链RNA分子，其中，上述任一RNA分子为向导链，具有与所述RNA分子互补的序列的RNA分子为随从链。向导链的3
’
末端和/或随从链的3
’
末端可具有单链突出端(overhang)部分，所述单链突出端部分可以由1～3个核苷酸构成。上述任一双链RNA分子可以为一个或多个核糖核苷酸被脱氧核糖核苷酸、人工核酸或核酸类似物取代而成的双链嵌合体型NA分子。
[0008][1
‑
3]本专利技术的另一个实施方案为一种在RNA干涉法中用作向导链的RNA分子的制备方法，所述制备方法包括制备上述任一RNA分子的工序。RNA分子可以为一个或多个核糖核苷酸被脱氧核糖核苷酸、人工核酸或核酸类似物取代而成的嵌合体型NA分子。
[0009][1
‑
4]本专利技术的另一个实施方案为一种RNA干涉法，其为在具有基因的野生型等位基因、及具有一个碱基的点突变的所述基因的突变型等位基因的细胞中，以所述突变型等位基因为靶基因的RNA干涉法，其中，所述RNA干涉法包括将上述任一RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子或上述任一双链嵌合体型NA分子导入所述细胞中的工序。
[0010][1
‑
5]本专利技术的另一个实施方案为一种治疗药，其为具有包含肿瘤细胞的肿瘤的患者的治疗药，所述肿瘤细胞具有肿瘤基因的野生型等位基因、及具有一个碱基的点突变的所述肿瘤基因的突变型等位基因，且所述点突变为肿瘤发生的原因，其中，所述治疗药以上述任一RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子或上述任一双链嵌合体型NA分子作为有效成分。
[0011][1
‑
6]本专利技术的另一个实施方案为一种RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子或双链嵌合体型NA分子的筛选方法，其为筛选用于用以抑制靶基因的RNA干涉法的RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子或双链嵌合体型NA分子的方法，所述筛选方法包括：通过分别使用多个上述任一RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子或上述任一双链嵌合体型NA分子以离体(in vitro)进行上述RNA干涉法，从而考察所述多个RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子或双链嵌合体型NA分子对所述靶基因的特异性抑制基因表达的能力的工序；及筛选所述特异性抑制基因表达的能力为规定水平以上的RNA分子、嵌合体型NA分子、双链RNA分子或双链嵌合体型NA分子的工序。
[0012][2]K
‑
ras基因[2
‑
1]作为本专利技术的另一个实施方案，对于[1
‑
1]所述的任一RNA分子，所述基因为K
‑
ras基因，所述野生型等位基因为K
‑
ras(wt)等位基因，所述突变等位基因为K
‑
ras(c.35G＞A)等位基因、K
‑
ras(c.35G＞T)等位基因或K
‑
ras(c.35G＞C)等位基因。包括所述(2
‑
1)中规定的碱基的与所述突变型等位基因的编码区互补的碱基序列可以具有下述中的任一种。此外，所述RNA分子中的一个或多个核糖核苷酸可以被脱氧核糖核苷酸、人工核酸或核酸类似物取代。5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种RNA分子，其用于以相对于基因的野生型等位基因具有一个碱基的点突变的突变型等位基因为靶基因的RNA干涉法，其中，所述RNA分子满足以下的要件：(1)具有除下述(2
‑
1)中规定的碱基以外与所述突变型等位基因的编码区互补的碱基序列；(2)从与所述突变型等位基因互补的碱基序列的最靠近5
’
侧的碱基开始计数，(2
‑
1)第5个或第6个碱基与所述突变型等位基因的碱基不匹配；(2
‑
2)第10位或第11位对应于所述点突变的位置，第10个或第11个碱基对应于所述突变型等位基因所具有的碱基；及(2
‑
3)在第6
‑
8个或第7
‑
8个核糖核苷酸中，五碳糖的第2
’
位被OCH3、卤素或LNA修饰。2.根据权利要求1所述的RNA分子，其中，所述卤素为F。3.根据权利要求1或2所述的RNA分子，其中，当权利要求1的(1)中规定的碱基序列的5
’
末端的碱基为胞嘧啶或鸟嘌呤时，该碱基被腺嘌呤或尿嘧啶取代。4.根据权利要求1～3中任一项所述的RNA分子，其中，当权利要求1的(1)中规定的碱基序列的3
’
末端的碱基为腺嘌呤或尿嘧啶时，该碱基被胞嘧啶或鸟嘌呤取代。5.根据权利要求1～4中任一项所述的RNA分子，其由13～28个核苷酸构成。6.根据权利要求1～5中任一项所述的RNA分子，其在权利要求1的(1)中规定的碱基序列的3
’
末端进一步具有1～3个核苷酸。7.一种嵌合体型NA分子，其由权利要求1～6中任一项所述的RNA分子中的一个或多个核糖核苷酸被脱氧核糖核苷酸、人工核酸或核酸类似物取代而成。8.一种双链RNA分子，其中，权利要求1～5中任一项所述的RNA分子为向导链，具有与所述RNA分子互补的序列的RNA分子为随从链。9.根据权利要求8所述的双链RNA分子，其在向导链的3
’
末端和/或随从链的3
’
末端具有单链突出端部分。10.根据权利要求9所述的双链RNA分子，其中，所述单链突出端部分由1～3个核苷酸构成。11.一种双链嵌合体型NA分子，其由权利要求8～10中任一项所述的双链RNA分子中的一个或多个核糖核苷酸被脱氧核糖核苷酸、人工核酸或核酸类似物取代...

【专利技术属性】
技术研发人员：程久美子，小林芳明，西乡薫，名取幸和，佐藤淳，浅野吉政，
申请(专利权)人：国立大学法人东京大学，
类型：发明
国别省市：