干扰胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)受体信号传导的药剂制造技术

本公开文本涉及特异性结合并中和(人)胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的抗体(例如，人抗体)及其抗原结合片段。此类分子能够具有增加抗体半衰期、增加对蛋白酶的抗性和/或降低与F

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】干扰胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)受体信号传导的药剂
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年7月11日提交的美国临时申请号62/873,051的优先权权益，将其通过引用以其整体并入本文。
[0003]电子提交的文本文件的说明
[0004]将以电子方式随同提交的文本文件的内容通过引用以其整体并入：计算机可读格式拷贝的序列表(文件名：TABI_002_01WO_SeqList_ST25；记录日期2020年7月3日；文件大小49千字节)。

技术介绍

[0005]胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种白细胞介素7样细胞因子，其在免疫反应的调节和造血细胞的分化中起关键作用。TSLP在肺、皮肤和肠道的上皮细胞，胸腺髓质中的哈索尔小体，黏膜相关淋巴组织和扁桃体中广泛表达(Liu,Soumelis等人2007，Rochman和Leonard 2008，Sokol,Barton等人2008)。与肺、骨骼肌、肾、脾、卵巢、小肠和结肠中的表达水平相比，在心脏、肝、脾和前列腺中发现了高TSLP表达水平(Quentmeier,Drexler等人2001)。
[0006]上皮细胞衍生的细胞因子是响应于环境和促炎刺激而产生的。它诱导T细胞吸引趋化因子从单核细胞释放并且促进髓样树突细胞的成熟。在胸腺内，TSLP激活髓样和浆细胞样树突细胞，从而产生调节性T细胞。通过其对树突细胞、T和B细胞的活性以及抗原特异性Th2细胞产生细胞因子，TSLP在调节2型(Th2、T2)免疫中很重要(Ziegler,Roan等人2013)。
[0007]TSLP通过由胸腺基质淋巴细胞生成素受体(TSLPR)和IL
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7Rα链构成的异二聚体受体复合物进行信号传导(Verstraete,van Schie等人2014)。在结合其受体复合物后，TSLP可以激活多种信号转导通路(Zhong,Sharma等人2014)。通过TSLP刺激IL7R/TSLPR复合物诱导Janus激酶(JAK)的磷酸化和激活。激活的JAK进而调节多种转录(STAT)因子(包括STAT1、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6)的活性。几种其他蛋白质(诸如AKT1、ERK1/2、JNK、核糖体蛋白S6激酶和4E
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BP1)也通过TSLP刺激激活。此外，磷酸化蛋白质组学分析揭示了TSLP可以调节226种蛋白质(包括激酶和蛋白磷酸酶，诸如SHP
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1和SHP
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2)的磷酸化。
[0008]已知TSLP参与炎症级联反应的启动，并且可以促进慢性疾病(包括过敏性哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、溃疡性结肠炎和许多慢性纤维增生性障碍)的发展(Vannella,Ramalingam等人2016)。研究还表明，TSLP参与免疫障碍，包括感染(Piliponsky等人2016)、癌症(De Monte等人2011)、自身免疫(Moret等人2011)；以及参与先天性和适应性免疫反应(Ziegler,Roan,2013；Headley等人2009)。
[0009]TSLP是过敏性炎症(特别是2型炎症途径)的主调节剂，并且因此一直是治疗哮喘的有希望的靶标。哮喘是一种特征在于支气管炎症伴有管内的黏液产生增加的障碍。患有哮喘的人经历这样的症状，诸如由于长期气道高反应性导致的咳嗽、喘息、呼吸短促、胸部紧迫感、疼痛或压力，通常伴有嗜酸性粒细胞浸润(Ohta,Nagase等人2017)。尽管用具有或
没有口服糖皮质激素的高剂量吸入糖皮质激素连续治疗，一些患有严重哮喘的患者仍具有与持续的嗜酸性粒细胞炎症相关的频繁加重。一定比例的难治性(refractile)哮喘患者(对常规治疗没有反应的患者)具有最有可能由于非嗜酸性粒细胞、非Th2细胞群体导致的严重症状。与健康对照的气道相比，TSLP表达在患有哮喘的患者的气道中更高，并且其水平与Th2细胞因子和趋化因子表达和疾病严重程度相关(Gauvreau,O'Byrne等人2014)。最近，特折鲁单抗(Tezepelumab)(AMG 157)(一种特异性结合人TSLP的人抗TSLP IgG2抗体)正在进行针对不受控制的哮喘的临床试验(Comeau,DESMEDT等人2006)(Comeau,Smothers等人2012)(Corren,Parnes等人2017)。
[0010]除了靶向TSLP，三种针对IL
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5的mAb也已经被批准用于患有严重哮喘并且具有嗜酸性粒细胞表型的患者，即美泊利单抗(Mepolizumab)和瑞利珠单抗(Reslizumab)(其与IL
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5直接结合)以及贝那利珠单抗(Benralizumab)(其与IL
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5受体结合)(Ortega,Liu等人2014)(Castro,Zangrilli等人2015)(Bleecker,FitzGerald等人2016)。度匹鲁单抗(Dupilumab)(一种与Il
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4受体α链结合并且防止IL
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4和IL
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13二者结合的抗体)已经被批准用于患有中度至重度嗜酸性粒细胞性哮喘的患者(Castro,Corren等人2018)。值得注意的是，相对于具有较低水平的T2生物标记物的患者，所有这些治疗性抗体在具有增加水平的T2生物标记物的患者中似乎更有效。
[0011]TSLP在其他非过敏性疾病和几种纤维化病症中的盛行率也应当被视为进行靶向疗法的正当理由(Ying,Zhang 2015)。在系统性硬化症(一种自身免疫性疾病)中，TSLP在血管周区域和皮肤的免疫细胞中高度表达。TSLP在患有系统性硬化症的患者的皮肤上皮细胞、肥大细胞和成纤维细胞中上调(Usategui,Criado等人2013)。TSLP及其受体在患有特发性肺纤维化(一种严重的纤维化肺病)的患者的肺中强烈表达(Datta,Alexander等人2013)。在纤维化皮肤病中，在瘢痕疙瘩组织中，皮肤成纤维细胞响应于TGFβ而产生高水平的TSLP。
[0012]TSLP作为治疗靶标的进一步支持来自发现TSLP在多种肿瘤的开始和进展中起作用。这些肿瘤包括实体瘤(诸如乳腺肿瘤、结肠肿瘤和胰腺肿瘤)以及血液肿瘤(诸如B细胞急性淋巴细胞性白血病(B
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ALL))(Corren,Ziegler 2019)。显示Th2型反应的肿瘤通常具有比主要是Th型反应的那些肿瘤更差的预后。肿瘤细胞分泌Il
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1α和IL
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1β，它们为癌症相关成纤维细胞表达TSLP所需，这表明肿瘤和肿瘤微环境在诱导TSLP中很重要。对人类宫颈癌细胞、胃癌和卵巢癌的研究也提供了证据证明在浸润肿瘤和基质的造血细胞与肿瘤本身之间存在TSLP介导的串扰。
[0013]虽然TSLP在癌症中起重要作用，但其作为促肿瘤因子或抗肿瘤因子的功能取决于肿瘤的类型。转移性乳腺癌中的TSLP是一个深入研究的领域，但是在小鼠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与胸腺基质淋巴细胞生成素TSLP特异性结合并且中和、抑制、阻断、消除、降低或干扰TSLP的活性。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段是具有如SEQ ID NO:1所示的重链可变区和如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区的小鼠单克隆抗体或抗体片段。3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含如分别根据SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5的重链的互补决定区(CDR)序列HCDR1、HCDR2、HCDR3。4.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含如分别根据SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的轻链的互补决定区(CDR)序列LCDR1、LCDR2、LCDR3。5.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或片段是人源化抗体或抗体片段。6.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体或片段包含如SEQ ID NO:9所示的重链可变区。7.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体或片段包含如SEQ ID NO:10所示的轻链可变区。8.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体或片段包含如SEQ ID NO:11所示的轻链可变区。9.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含分别根据SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5的重链的互补决定区(CDR)序列HCDR1、HCDR2、HCDR3以及分别根据SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的轻链的LCDR1、LCDR2、LCDR3，并且其中所述抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:9具有至少80％序列同一性的重链可变区和与SEQ ID NO:10或11具有至少80％序列同一性的轻链可变区。10.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体包含如SEQ ID NO:12所示的人IgG重链序列。11.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体包含如SEQ ID NO:13所示的人轻链序列。12.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体包含如SEQ ID NO:14所示的人轻链序列。13.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体包含如SEQ ID NO:15所示的人IgG重链序列。14.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其中所述人源化抗体包含如SEQ ID NO:16所示的人IgG重链序列。15.根据权利要求1至14所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。16.根据权利要求1至14所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体具有与亲本野生型抗体相比延长所述工程化抗体的半衰期的一个或多个F
c
突变。17.根据权利要求1至14所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体具有与亲本野生型
抗体相比增强所述工程化抗体对蛋白酶的蛋白水解降解的抗性的一个或多个F
c
突变。18.根据权利要求1至14所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体具有与亲本野生型抗体相比降低或消除工程化抗体的效应子功能的一个或多个F
c
突变。19.根据权利要求1至14所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体具有与亲本野生型抗体相比延长所述工程化抗体的半衰期并且降低其效应子功能的L234A、L235A、M428L和N4...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭玉清，张镝，师丽华，冯文昌，
申请(专利权)人：拓维创新生物科技香港有限公司，
类型：发明
国别省市：