DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂与Akt抑制剂联合用于制备抗结直肠癌药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂与Akt抑制剂联合用于制备抗结直肠癌药物的用途。本发明专利技术发现，DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂伊立替康和Akt抑制剂MK

【技术实现步骤摘要】
DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂与Akt抑制剂联合用于制备抗结直肠癌药物的用途


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂与Akt抑制剂联合用于制备抗结直肠癌药物的用途。

技术介绍

[0002]结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是世界大多数地区最常见的恶性肿瘤之一，全球每年有60万人死于此病，已成为世界上第三大恶性肿瘤，也是癌症致死的第四大原因。
[0003]Akt又名蛋白激酶B(proteinkinase B，PKB)，是PI3K
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Akt
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mTOR信号通路的核心蛋白，该通路在调控肿瘤细胞凋亡、增殖和侵袭等方面发挥重要功能，是治疗癌症的重要靶点之一。MK
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2206是一种强效Akt变构抑制剂，可抑制肿瘤细胞增殖，其主要作用是抑制Akt磷酸化，其阻断效果优于传统的竞争性抑制剂，具有更高的特异性、相对较小的副作用和毒性。
[0004]伊立替康(Irinotecan，CPT
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11)是一种半合成水溶性喜树碱类衍生物，CPT
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11及其代谢产物SN38为DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂，其与拓扑异构酶Ⅰ及DNA形成的复合物能引起DNA单链断裂，阻止DNA复制及抑制RNA合成，为晚期结肠癌的一线用药。
[0005]目前没有伊立替康与MK
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2206联合用于制备抗结直肠癌药物的报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂与Akt抑制剂联合用于制备抗结直肠癌药物的用途。
[0007]本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：
[0008]DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂和Akt抑制剂联合用于制备抗结直肠癌药物的用途。
[0009]优选地，所述DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂为伊立替康。
[0010]优选地，所述Akt抑制剂为MK
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2206。
[0011]一种药物组合物，由DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂和Akt抑制剂组成。
[0012]优选地，所述DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂为伊立替康。
[0013]优选地，所述Akt抑制剂为MK
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2206。
[0014]上述药物组合物在制备抗结直肠癌药物中的应用。
[0015]有益效果：
[0016]本专利技术发现，DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂伊立替康和Akt抑制剂MK
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2206具有协同抑制结直肠癌细胞增殖的活性，这两种抑制剂的组合物具有开发成治疗结直肠癌的药物的前景。
具体实施方式
[0017]下面结合实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范
围。
[0018]一、实验材料
[0019]试剂：DMSO(Sigma
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Aldrich，美国)；青霉素
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链霉素(Hyclone，美国)；0.5％胰酶
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EDTA溶液(博士德，武汉博士德生物工程有限公司)；PBS溶液(Hyclone，美国)；FBS(Gibco,美国)；DMEM培养基(GIBCO，美国)，MTT(上海碧云天生物技术有限公司)
[0020]药物：MK
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2206di
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hydrochloride(CAS 1032350
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13
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2)购买于GLPBIO中国；伊立替康购买于上海阿拉丁生化科技股份有限公司；
[0021]细胞：人结肠癌细胞HCT116(购买于南京科佰生物科技有限公司)，人结肠癌细胞SW620(购买于南京宏新生物科技有限公司)。
[0022]二、实验方法
[0023]1、HCT116细胞培养
[0024]细胞培养：培养液由：89％DMED培养基+10％FBS+1％青霉素
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链霉素(双抗)组成；培养箱条件为5％CO2，37℃；每日更换新鲜培养液。
[0025]细胞传代：显微镜下观察细胞长满培养皿底部(周期为2天)(1)培养液、胰酶、PBS置于37℃水浴锅中预热20分钟；(2)从培养箱中取出细胞培养皿，弃去旧培养液，用2mL的PBS轻柔缓慢润洗细胞两遍以去除残留的培养基，加入1mL胰酶，在室温条件下充分消化2.5min，至细胞呈沙粒状从培养皿底部脱落；(3)直接加入2mL新鲜培养液终止消化，轻柔吹打，将培养液转移到15mL离心管，于室温下1000rpm离心5min；(4)弃去培养液，加6mL新鲜培养液重悬，之后吸取1mL细胞重悬液(1:6传代)加入新培养皿，加入9mL新鲜培养液，通过“8字法”使细胞分散后放入培养箱培养。
[0026]细胞冻存：(1)将培养液、胰酶、PBS置于37℃水浴锅中预热20分钟；(2)从培养箱中取出细胞培养皿，弃去旧培养液，用2mLPBS轻柔润洗细胞两遍，加入1mL胰酶，在室温条件下充分消化2.5min，至细胞呈沙粒状从培养皿底部脱落；(3)直接加入2mL新鲜培养液终止消化，轻柔吹打，将培养液转移到15mL离心管，于室温下1000rpm离心5min；(4)弃去上层培养液，加1mL冻存液(DMEM培养基：FBS：DMSO＝7:2:1)重悬细胞后转移入冻存管，将冻存管放入程序降温盒后置于
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80℃冰箱过夜，后转移入液氮中保存。
[0027]2、SW620细胞培养
[0028]细胞培养：条件同HCT116。
[0029]细胞传代：显微镜下观察细胞长满培养皿底部(周期为3天)(1)培养液、胰酶、PBS置于37℃水浴锅中预热20分钟；(2)从培养箱中取出细胞培养皿，弃去旧培养液，用2mL的PBS轻柔缓慢润洗细胞两遍以去除残留的培养基，加入1mL胰酶，放入培养箱在37℃条件下充分消化3min，至细胞呈沙粒状从培养皿底部脱落；(3)直接加入2mL新鲜培养液终止消化，轻柔吹打，将培养液转移到15mL离心管，于室温下1000rpm离心5min；(4)弃去上层培养液，加4mL新鲜培养液重悬，之后吸取1mL细胞重悬液(1:4传代)加入新培养皿，加入9mL新鲜培养液，通过“8字法”使细胞分散后放入培养箱培养。
[0030]细胞冻存：(1)培养液、胰酶、PBS置于37℃水浴锅中预热20分钟；(2)从培养箱中取出细胞培养皿，弃去旧培养液，用2mL的PBS轻柔缓慢润洗细胞两遍以去除残留的培养基，加入1mL胰酶，放入培养箱在37℃条件下充分消化3min，至细胞呈沙粒状从培养皿底部脱落；(3)直接加入2mL新鲜培养液终止消化，轻柔吹打，将培养液转移到15mL离心管，于室温下
1000rpm离心5min；(4)弃去上层培养液，加1mL冻存液(DMEM培养基：FBS：DMSO＝7:2:1)重悬细胞后转移入冻存管，将冻存管放入程序降温盒后置于
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80℃冰箱过夜，后转移入液氮中保存。
[0031]3、细胞增殖试验
[0032]取对数本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂和Akt抑制剂联合用于制备抗结直肠癌药物的用途。2.根据权利要求1所述的用途，所述DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂为伊立替康。3.根据权利要求1所述的用途，所述Akt抑制剂为MK
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2206。4.一种药物组合物，其特征在于：由DNA拓扑异...

【专利技术属性】
技术研发人员：许风国，吕波，张培，杨柳，张尊建，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：