用于调节载脂蛋白B(APOB)基因表达的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了用于通过靶向APOB表达控制区来调节载脂蛋白B(APOB)基因的表达(例如增加或降低表达)的试剂和组合物及其用于治疗APOB相关病症(例如高胆固醇血症)的使用方法。APOB相关病症(例如高胆固醇血症)的使用方法。APOB相关病症(例如高胆固醇血症)的使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于调节载脂蛋白B(APOB)基因表达的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年9月23日提交的美国临时申请No.62/904,325的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0003]高脂血症是血液中任何或所有脂质或脂蛋白的水平异常升高。一种高脂血症，高胆固醇血症(也称为高胆固醇)，是血液中存在高胆固醇水平。高脂血症(例如高胆固醇血症)可能是饮食、肥胖、遗传性(基因性)疾病(如家族性高胆固醇血症中的LDL受体突变)或存在其它疾病(例如II型糖尿病和甲状腺机能减退)的结果。
[0004]载脂蛋白B(ApoB)是乳糜微粒、VLDL、IDL和LDL颗粒的主要载脂蛋白，其负责将脂质颗粒内的身体各处的脂质(包括胆固醇)转运至所有组织内的所有细胞。它是颗粒的主要组织蛋白组分并且对于这些颗粒的形成是重要的。特别地，LDL颗粒上的ApoB在全身的各种细胞中充当LDL受体的配体。ApoB的过度表达研究表明ApoB的水平升高可引起低β脂蛋白血症、正常甘油三酯性低β脂蛋白血症和高胆固醇血症，影响血浆胆固醇的疾病。
[0005]虽然高胆固醇血症本身是无症状的，但血清胆固醇的长期升高可导致动脉粥样硬化，其随着时间的推移可导致相关动脉的进行性狭窄或甚至完全闭塞。此外，较小的斑块可能破裂并导致凝块形成和阻塞血流，从而引发例如心肌梗塞和/或中风。
[0006]避免反式脂肪和用多元不饱和脂肪代替饱和脂肪被推荐为降低成人中血总胆固醇和LDL的饮食措施。但是，在具有非常高胆固醇(例如高胆固醇血症)的受试者中，饮食调整通常不足以实现LDL的期望的降低，并且通常需要降脂药物。然而，许多受试者对降脂药物具有不良反应。
[0007]因此，本领域内需要治疗ApoB相关的疾病(例如高胆固醇血症)的组合物和方法。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了用于通过靶向APOB表达控制区来调节载脂蛋白B(APOB)基因的表达(例如增加或降低表达)的试剂和组合物。APOB基因可以在细胞中，例如哺乳动物细胞，如哺乳动物体细胞(例如小鼠或人类体细胞)。本专利技术还提供了使用本专利技术的试剂和组合物来调节APOB基因的表达或治疗将受益于调节APOB基因的表达的受试者(例如患有或易患APOB相关疾病的受试者)的方法。
[0009]因此，在一个方面，本专利技术提供了位点特异性载脂蛋白B(APOB)破坏剂。该破坏剂包含靶向APOB表达控制区的位点特异性APOB靶向部分。在一个实施方案中，位点特异性APOB靶向部分包含聚合物分子。在另一个实施方案中，聚合物分子包含聚酰胺。在另一个实施方案中，聚合物分子包含多核苷酸。
[0010]在一个实施方案中，表达控制区包含APOB相关锚定序列。在另一个实施方案中，APOB相关锚定序列包含CCCTC结合因子(CTCF)结合基序。在另一个实施方案中，APOB相关CTCF结合基序包含APOB CTCF位点3的核苷酸序列。
[0011]在另一个实施方案中，表达控制区包含APOB相关锚定序列介导的结合体(conjunction)。在另一个实施方案中，APOB相关锚定序列介导的结合体包含所述结合体内部的一个或多个转录控制元件。在另一个实施方案中，APOB相关锚定序列介导的结合体包含所述结合体外部的一个或多个转录控制元件。
[0012]在另一个实施方案中，APOB相关锚定序列位于转录控制元件的约300kb内。在另一个实施方案中，锚定序列位于转录控制元件的10kb内。
[0013]在另一个实施方案中，表达控制区包含APOB特异性转录控制元件。在另一个实施方案中，转录控制元件包含APOB启动子。在另一个实施方案中，转录控制元件包含转录增强子。在另一个实施方案中，转录控制元件包含转录阻遏物。
[0014]在一个实施方案中，位点特异性APOB破坏剂包含与表2中任何核苷酸序列的完整核苷酸序列具有至少85％核苷酸同一性的核苷酸序列。
[0015]在另一个实施方案中，位点特异性APOB破坏剂包含编码特异性结合APOB表达控制区的锌指多肽(ZNF)或转录激活物样效应物(TALE)多肽的DNA结合域或其片段的多核苷酸。
[0016]在另一个实施方案中，位点特异性APOB破坏剂包含核苷酸修饰。
[0017]在另一个实施方案中，位点特异性APOB破坏剂包含肽核酸(PNA)。
[0018]在一个方面，本专利技术提供了包含任何方面和各个实施方案的位点特异性APOB破坏剂的载体。在一个实施方案中，载体是病毒表达载体。
[0019]在另一个方面，本专利技术提供了包含任何方面和各个实施方案的位点特异性APOB破坏剂或载体的细胞。
[0020]在一个实施方案中，位点特异性APOB破坏剂存在于组合物中。在另一个实施方案中，组合物包括药物组合物。在另一个实施方案中，药物组合物包含脂质制剂。在另一个实施方案中，脂质制剂包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质、或一种或多种PEG修饰的脂质，或前述的任何组合。在一个实施方案中，药物组合物包含脂质纳米颗粒。
[0021]在一个方面，本专利技术提供了位点特异性APOB破坏剂。破坏剂包含编码融合蛋白的核酸分子，所述融合蛋白包含靶向APOB表达控制区的位点特异性APOB靶向部分和效应分子。在一个实施方案中，位点特异性APOB靶向部分包含编码特异性结合APOB表达控制区的锌指多肽(ZNF)或转录激活物样效应物(TALE)多肽的DNA结合域或其片段的多核苷酸。在另一个实施方案中，效应分子包含编码多肽的核酸分子。在另一个实施方案中，融合蛋白包含肽
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核酸融合物。
[0022]在一个实施方案中，效应物选自由核酸酶、物理阻断剂、表观遗传募集剂和表观遗传CpG修饰剂及前述的任何组合组成的组。在另一个实施方案中，效应物包含CRISPR相关蛋白(Cas)多肽或编码Cas多肽的核酸分子。在另一个实施方案中，Cas多肽是无酶活性的Cas多肽。在另一个实施方案中，位点特异性APOB破坏剂进一步包含人核酸外切酶1(hEXO1)的催化活性结构域。在一个实施方案中，表观遗传募集剂包含转录增强子或转录阻遏物。在另一个实施方案中，其中所述表观遗传CpG修饰剂包含DNA甲基化酶、DNA去甲基化酶、组蛋白修饰剂或组蛋白脱乙酰酶。
[0023]在一个实施方案中，效应分子包含锌指多肽。在另一个实施方案中，效应分子包含转录激活物样效应物核酸酶(TALEN)多肽。
[0024]在一个方面，本专利技术提供了一种载体。载体包含编码本专利技术的任何方面和各个实施方案的位点特异性APOB破坏剂的核酸分子。在一个实施方案中，载体是病毒表达载体。
[0025]在另一个方面，本专利技术提供了一种细胞，所述细胞包含本专利技术的任何方面和各个实施方案的位点特异性APOB破坏剂或载体。
[0026]在一个实施方案中，位点特异性APOB破坏剂存在于组合物中。在另一个实施方案中，组合物包括药物组合物。在另一个实施方案中，药本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种位点特异性载脂蛋白B(APOB)破坏剂，其包含靶向APOB表达控制区的位点特异性APOB靶向部分。2.根据权利要求1所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述位点特异性APOB靶向部分包含聚合物分子。3.根据权利要求2所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述聚合物分子包含聚酰胺。4.根据权利要求2所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述聚合物分子包含多核苷酸。5.根据权利要求1所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述表达控制区包含APOB相关锚定序列。6.根据权利要求5所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述APOB相关锚定序列包含CCCTC结合因子(CTCF)结合基序。7.根据权利要求6所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述APOB相关CTCF结合基序包含APOB CTCF位点3的核甘酸序列。8.根据权利要求5
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7中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述表达控制区包含APOB相关锚定序列介导的结合体。9.根据权利要求8所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述APOB相关锚定序列介导的结合体包含所述结合体内部的一个或多个转录控制元件。10.根据权利要求8所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述APOB相关锚定序列介导的结合体包含所述结合体外部的一个或多个转录控制元件。11.根据权利要求8
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10中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述APOB相关锚定序列位于所述转录控制元件的约300kb内。12.根据权利要求11所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述锚定序列位于所述转录控制元件的10kb内。13.根据权利要求1所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述表达控制区包含APOB特异性转录控制元件。14.根据权利要求13所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述转录控制元件包含APOB启动子。15.根据权利要求13所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述转录控制元件包含转录增强子。16.根据权利要求13所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述转录控制元件包含转录阻遏物。17.根据权利要求1
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16中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其包含与表2中任何核苷酸序列的完整核苷酸序列具有至少85％核苷酸同一性的核苷酸序列。18.根据权利要求1所述的位点特异性APOB破坏剂，其包含编码特异性结合所述APOB表达控制区的锌指多肽(ZNF)或转录激活物样效应物(TALE)多肽的DNA结合域或其片段的多核苷酸。19.根据权利要求1
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18中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其包含核苷酸修饰。20.根据权利要求1所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述聚合物分子包含肽核酸(PNA)。21.一种包含根据权利要求1
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19中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂的载体。
22.根据权利要求21所述的载体，其中所述载体是病毒表达载体。23.一种包含根据权利要求1
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20中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂或根据权利要求21或22所述的载体的细胞。24.根据权利要求1
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20中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述位点特异性APOB破坏剂存在于组合物中。25.根据权利要求24所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述组合物包括药物组合物。26.根据权利要求25所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述药物组合物包含脂质制剂。27.根据权利要求26所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述脂质制剂包括一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质、或一种或多种PEG修饰的脂质，或前述的任何组合。28.根据权利要求26所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述药物组合物包含脂质纳米颗粒。29.一种位点特异性APOB破坏剂，其包含编码融合蛋白的核酸分子，所述融合蛋白包含靶向APOB表达控制区的位点特异性APOB靶向部分和效应分子。30.根据权利要求29所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述位点特异性APOB靶向部分包含编码特异性结合所述APOB表达控制区的锌指多肽(ZNF)或转录激活物样效应物(TALE)多肽的DNA结合域或其片段的多核苷酸。31.根据权利要求29所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述效应分子包含编码多肽的核酸分子。32.根据权利要求29所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述融合蛋白包含肽
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核酸融合物。33.根据权利要求29
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32中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述效应物选自由核酸酶、物理阻断剂、表观遗传募集剂和表观遗传CpG修饰剂及前述的任何组合组成的组。34.根据权利要求30所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述效应物包含CRISPR相关蛋白(Cas)多肽或编码Cas多肽的核酸分子。35.根据权利要求31所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述Cas多肽是无酶活性的Cas多肽。36.根据权利要求31所述的位点特异性APOB破坏剂，其进一步包含人核酸外切酶1(hEXO1)的催化活性结构域。37.根据权利要求33所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述表观遗传募集剂包含转录增强子或转录阻遏物。38.根据权利要求33所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述表观遗传CpG修饰剂包含DNA甲基化酶、DNA去甲基化酶、组蛋白修饰剂或组蛋白脱乙酰酶。39.根据权利要求29
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33中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述效应分子包含锌指多肽。40.根据权利要求29
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33中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述效应分子包含转录激活物样效应物核酸酶(TALEN)多肽。
41.一种包含编码根据权利要求29
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40中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂的核酸分子的载体。42.根据权利要求41所述的载体，其中所述载体是病毒表达载体。43.一种包含根据权利要求29
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40中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂或根据权利要求41或42所述的载体的细胞。44.根据权利要求29
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40中任一项所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述位点特异性APOB破坏剂存在于组合物中。45.根据权利要求44所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述组合物包括药物组合物。46.根据权利要求45所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述药物组合物包含脂质制剂。47.根据权利要求46所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述脂质制剂包括一种或多种阳离子脂质、一种或多种非阳离子脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质、或一种或多种PEG修饰的脂质，或前述的任何组合。48.根据权利要求46所述的位点特异性APOB破坏剂，其中所述药物组合物包含脂质纳米颗粒。49.一种调节细胞中载脂蛋白B(APOB)的表达的方法，所述方法包括使所述细胞与位点特异性APOB破坏剂接触，所述破坏剂包含靶向APOB表达控制区的位点特异性APOB靶向部分和效应分子，从而调节细胞中APOB的表达。50.根据权利要求49所述的方法，其中表达的所述调节是细胞中APOB表达的增加。51.根据权利要求49所述的方法，其中表达的所述调节是细胞中APOB表达的降低。52...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：欧米茄治疗公司，
类型：发明
国别省市：