用结合血小板糖蛋白IB(GPIB)α胞外结构域的化合物治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和肝细胞癌(HCC)制造技术

本公开内容基于以下发现：化合物与血小板糖蛋白Ib(GPIb)α胞外结构域的特异性结合降低了非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发生和进展，或与NAFLD或NASH相关的病症或病况，例如由NAFLD或NASH发展的病症或病况(例如肝细胞癌)的发生和进展。本公开内容基于与GPIb胞外结构域的特异性结合，优选通过削弱GPIb

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用结合血小板糖蛋白IB(GPIB)
α
胞外结构域的化合物治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和肝细胞癌(HCC)
专利

[0001]本专利技术基于以下发现：化合物与血小板糖蛋白Ib(GPIb)α胞外结构域的特异性结合降低了非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发生和进展，或与NAFLD或NASH相关的病症或病况例如由NAFLD或NASH发展的病症或病况(例如肝细胞癌)的发生和进展。本专利技术基于与GPIb胞外结构域的特异性结合，优选通过削弱GPIb
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凝血酶相互作用，为NAFLD/NASH和HCC患者提供新的治疗选择。本专利技术提供了用于鉴定适合治疗NAFLD/NASH和HCC的化合物的医学治疗以及筛选方法。
[0002]描述
[0003]生活方式和饮食的改变大大增加了肥胖、超重和代谢综合征的发病率。超重和肥胖不仅是西方发达国家的问题。同时，发展中国家的儿童和成人也受到严重影响(Anstee等人，2019)。最新的WHO报告预测，肥胖疾病的数量在未来二十年将翻两至三倍(Stewart和Wild，2014)。
[0004]肝脏是人体最重要的代谢器官，受到慢性高热量摄入、肥胖、久坐不动的生活方式和由此产生的病理学的严重影响。全球最常见的肝病非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是超重/肥胖和代谢综合征的临床表现(图1)。NAFLD是一种慢性疾病，可以持续长达数十年。NAFLD的特征是主要的大囊泡性脂肪变性和肝脏代谢恶化，但不一定有明显的临床症状。目前，9000万美国人和4000万欧洲人患有NAFLD(Ringelhan等人，2018；Anstee等人，2019)。肥胖与癌症发病率之间的密切联系是众所周知的(Calle和Kaaks，2004)。事实上，相当多的NAFLD患者会发展非酒精性脂肪性肝炎(NASH)(脂肪肝疾病的病理表现，其易患纤维化和肝细胞癌(HCC)(Anstee等人，2019))或肝功能障碍。
[0005]在美国和欧洲，患有NAFLD和NASH的人数正在稳步增加(Loomba等人，2013；Ringelhan等人，2018；Anstee等人，2019)。因此，肥胖、脂肪变性和脂肪性肝炎作为导致肝功能障碍和HCC发病率增加的原因，是西方国家关注的主要原因(White等人，2012)。
[0006]到目前为止，慢性病毒感染(例如乙型和丙型肝炎病毒)一直是导致工业化国家肝功能障碍和HCC发展的最普遍的病因。然而，NAFLD患者的数量每天都在增加，因此NAFLD已成为发达国家和发展中国家最普遍的肝病。因此，HCC是美国患者增长率最高的癌症，并且欧洲已经观察到类似的趋势(Anstee等人，2019)。
[0007]同时，没有有效的治疗方法来治疗NASH，晚期NASH诱导的HCC的治疗选择有限(Villanueva等人，2014；Ringelhan等人，2018；Anstee等人，2019)。这主要是因为直到最近才了解触发这种慢性炎症/代谢性肝病的最重要机制。因此，迫切需要不会引起副作用的特定治疗方法。
[0008]在过去十年中，已经建立了几种模型来模拟NASH和NASH向HCC的转变。一方面，这些模型是由遗传驱动的，另一方面，这些模型是通过不同的饮食来源触发的(Anstee等人，2019)。重要的是，迄今为止使用的大多数临床前模型(遗传和饮食)未能对疾病的慢性以及随NASH发现的附带疾病(co
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lateral disease)的伴随存在(2型糖尿病、腹部肥胖、NASH相
关的肝脏病理学——代谢综合征的慢性存在)进行表型模拟。
[0009]此外，许多模型含有一方面诱导NASH和HCC高发病率和快速疾病发展的遗传异常，这并不一定反映NASH(发展缓慢并持续数十年的疾病)的病理生理动态。在C57BL/6小鼠中，NASH可以通过甲硫氨酸/胆碱缺乏饮食(MCD)或胆碱缺乏饮食(CD)诱导，但不能单独通过高脂肪饮食(HFD)诱导(Hebbard和George，2011)。然而，喂养MCD或CD的C57BL/6小鼠不会发展肥胖、代谢综合征或HCC，并且由于体重减轻(高达40％)或恶病质必须在几个月后停止饮食(Hebbard和George，2011)。因此，这些短期方法无法概括在人类肝脏和可能的其他代谢器官中发现的NASH诱导的长期后果。
[0010]由于缺乏合适的小鼠模型，因此导致NASH和HCC的确切长期机制在很大程度上仍然未知。报道了NAFLD患者中必需的营养胆碱缺乏会加剧NAFLD和NASH(Guerrerio等人，2012)。此外，胆碱摄取不足的人在肝脂蛋白分泌、线粒体功能障碍引起的氧化损伤和ER应激方面存在缺陷(Corbin和Zeisel，2012)。这些临床观察形成了本专利技术的基础(Wolf等人，CancerCell，2014)：专利技术人将胆碱缺乏与高脂肪饮食(CD
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HFD)或西方饮食(WD)(高脂肪；果糖；胆固醇)结合12个月，从而在C57BL/6小鼠中建立模型，导致代谢综合征、慢性NASH和NASH驱动的HCC。使用关于免疫细胞在实验性诱导的NASH中的作用的短期体内实验，曾经公开了矛盾的结果(Martin
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Murphy等人，2014；Lynch等人，2012；Bhattacharjee等人，2014)。相比之下，最近的数据首次表明，基于导致C57BL/6小鼠中代谢综合征的长期CD
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HFD或WD，免疫细胞在触发脂肪变性、NASH和NASH驱动的HCC中发挥重要作用(Wolf等人，CancerCell，2014)(Mahlemir等人，Nature Medicine 2019；通过引用整体并入本文，特别是其中图6所示的描述和结果)。
[0011]因此，本专利技术的一个目的是为NAFLD/NASH和最终的HCC患者提供新的治疗选择。
[0012]专利技术概述
[0013]一般而言，通过简要说明，本专利技术的主要方面可以描述如下：
[0014]在第一方面，本专利技术涉及一种化合物，其用于治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或与NAFLD或NASH相关的病症或病况，例如从NAFLD或NASH发展的病症或病况(例如肝细胞癌)，其中该化合物特异性结合血小板糖蛋白Ib(GPIb)的胞外结构域。
[0015]在第二方面，本专利技术涉及包含根据第一方面的化合物的药物组合物。
[0016]在第三方面，本专利技术涉及用于生产抗体、抗体样分子或其抗原结合片段的方法，包括以下步骤：用肽免疫非人动物，其中所述肽包含GPIb的胞外结构序列域的序列，或由GPIb的胞外结构域的序列组成，并且从该免疫的哺乳动物中分离出表达这种抗体、抗体样分子或其抗原结合片段的免疫细胞。
[0017]在第四方面，本专利技术涉及鉴定适合治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或与NAFLD或NASH相关的病症或病况例如从NAFLD或NASH发展本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.化合物，其用于治疗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或与NAFLD或NASH相关的病症或病况，例如由NAFLD或NASH发展的病症或病况(例如肝细胞癌)，其中所述化合物特异性结合血小板糖蛋白Ib(GPIb)的胞外结构域。2.根据权利要求1使用的化合物，其中所述化合物结合凝血酶结合位点，优选结合α
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凝血酶结合位点，其中所述结合位点位于GPIbα的胞外结构域内；和/或其中所述化合物结合GPIbα的胞外结构域，使得在化合物和GPIbα之间结合后，凝血酶(例如α
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凝血酶)与GPIbα的进一步结合减少或削弱，例如通过空间阻碍GPIbα
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凝血酶相互作用和/或通过改变GPIbα的3维构象。3.根据权利要求1或2使用的化合物，其中所述化合物与GPIbα的胞外结构域中的含有富含亮氨酸重复序列的结构域特异性结合。4.根据权利要求1至3中任一项使用的化合物，其中GPIbα是人GPIbα或其变体，并且优选其中人GPIbα包含SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列(UniProt ref：P07359)。5.根据权利要求4使用的化合物，其中GPIbα的变体是(i)GPIbα的凝血酶结合片段，和/或(ii)具有与SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列的蛋白质。6.根据权利要求1至5中任一项使用的化合物，其中所述化合物与凝血酶，优选α
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凝血酶竞争结合GPIb的胞外结构域。7.根据权利要求1至6中任一项使用的化合物，其中所述化合物不与血管性血友病因子(vWF)、P
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选择蛋白、Mac
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1、凝血因子XI和/或凝血因子XII竞争。8.根据权利要求1至7中任一项使用的化合物，其中所述化合物与pop/B
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抗体或其抗原结合片段竞争结合GPIb。9.根据权利要求1至8中任一项使用的化合物，其中所述化合物是选自由以下各项组成的组的抗原结合构建体：抗体、纳米抗体、scFv、Fab、抗体样分子或其他抗原结合衍生物，或其抗原结合片段；并且其中所述化合物结合所述GPIbα的胞外结构域，或所述GPIbα变体的胞外结构域。10.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：马蒂亚斯，
申请(专利权)人：德国癌症研究中心公共法律基金会，
类型：发明
国别省市：