一种免酶解程序制备林蛙卵胶肽的方法技术

本发明专利技术提供一种免酶解程序制备林蛙卵胶肽的方法，包括产卵蛙选择、产卵前预处理、产卵准备、受精卵处理、卵胶肽制备和冰冻干燥制备卵胶肽等步骤。本发明专利技术根据林蛙胚胎发育学原理，结合中国林蛙优良品种选育，采用商品林蛙繁殖期自然抱对产卵，利用林蛙胚胎自身的蛋白酶系在胚胎发育过程中的自我调节、分解机制，将林蛙胚胎中的卵胶蛋白分解为以多肽、寡肽为主，降低生产成本，解决了人工酶解产品异味、高成本、操作程序繁杂的难题，采用了“养蛙取卵”的方法，使成龄雌蛙可持续利用，生产原生态产品，改变了“杀蛙取油”的传统方法，保护了生态平衡的同时，增产增收，促进静置可持续性发展。促进静置可持续性发展。

【技术实现步骤摘要】
一种免酶解程序制备林蛙卵胶肽的方法


[0001]本专利技术涉及一种林蛙(雪蛤)卵胶肽的制备方法，特别涉及一种免酶解程序制备林蛙卵胶肽的方法。

技术介绍

[0002]林蛙，目前通指“东北林蛙(学名：Rana dybowskii)”是蛙科、林蛙属无尾两栖动物。主产中国东北山区，包括长白山脉、小兴安岭大部、张广才岭腹地，亦被称为雪蛤、哈什蚂(哈士蟆)，是集药用、食补、美容功能于一体的珍稀物种，其产品有延缓衰老、增强免疫力的作用，因此，林蛙养殖业已经成为我国东北山区发展的重要产业。产业发展的同时，为获得林蛙油产品，每年捕杀数亿只林蛙以获取林蛙油(输卵管)，但丢弃了营养丰富的卵细胞等副产物，造成大量资源浪费的同时也对生态环境和种质资源保护带来巨大威胁。
[0003]为充分开发利用林蛙资源，人们开始对林蛙进行了全方位的研究工作。对肽在生命体中的作用机理的深入研究发现，肽类物质是由多个氨基酸分子聚合成的小分子物质，将蛋白质分解成低分子量的肽类物质，比蛋白质更易被人体消化和吸收，而且还含有特殊功能的多肽，因此，研究出许多有关制备林蛙油、肉、皮等肽的生产方法，例如利用林蛙油制备林蛙油肽的方法，取新鲜林蛙油或林蛙油干品加入蛋白酶经过酶解处理制备林蛙油肽。
[0004]现有的文献资料所公开的林蛙油肽制备方法比较多，林蛙卵胶肽的相关资料未见报道，并且现有的肽的制备过程存在许多问题：都是采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等蛋白酶酶解蛋白质的方法获取肽产品，但利用蛋白酶酶解蛋白质后产品会产生异味，影响口感；同时随着水解程度的加深，林蛙油肽中具有活性成分的游离雌二醇的含量逐渐增加，导致林蛙油肽雌激素含量升高，不利于大多数人食用，因此限制了林蛙油的食用人群和推广范围；酶解后还需要进行灭酶处理，因此制备过程程序繁杂、生产成本高；需要捕杀林蛙以获取林蛙油原料，可持续性差，不利于产业发展和资源保护。综上原因，需要提供一种能够可持续利用林蛙资源、减少资源浪费、不需要添加蛋白酶的低成本、男女老少皆宜的林蛙肽的制备方法，促进林蛙资源的健康发展。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种免酶解程序制备林蛙卵胶肽的方法，包括以下步骤：
[0006](1)产卵蛙选择：
[0007]在我国东部山区，每年4
‑
5月份，待林蛙出蛰后，依照留种标准统一进行优良品种选择，优良品种留作繁殖，筛选出不合格的雌雄林蛙用于生产卵胶肽；
[0008](2)产卵前预处理：
[0009]将筛选出的用于生产卵胶肽的林蛙雌雄分离、冲洗，分别进入相邻的预温池内预温，预温池内水温18℃～22℃，自然光照，蛙的密度小于500只/
㎡
；
[0010](3)产卵准备：
[0011]预处理2～3天后，受蛙鸣和温度的影响，待雌蛙进入跌卵期，将雌、雄蛙分别从预温池中捞出、冲洗，按雌雄数量1:1.2～1.5的比例混合放入产卵池中，产卵池水温18℃～22℃，自然光照，蛙的密度小于40只/
㎡
；
[0012](4)受精卵前处理：
[0013]卵产出15～30分钟后(充分受精)用网兜捞出，用纯净水或矿泉水清洗卵团表面后，进入环境温度22℃～24℃、相对湿度70％～85％的卵发育室内，置于发育板上，单层摆放，暴露在空气中，适时对卵团喷雾补水，保持卵团表面湿润，补光照度3000
‑
4000勒克斯，使受精卵正常发育；
[0014](5)卵胶肽制备：
[0015]当受精卵发育12～18小时终止发育，将终止发育的卵和卵胶混合物通过胶体磨高速研磨，研磨细度＞100目，得粘稠粥状流体，加纯净水20～50％稀释后进入均质机，均质时间10～15分钟。均质完成后进入离心机，转速4000
‑
5000转/分钟离心5～10分钟，沉淀分离出卵壳碎片等较大颗粒，上清液即为卵胶肽溶液；
[0016](6)干燥制备卵胶肽：
[0017]将上清液置于冷冻干燥机中干燥，干燥参数为：预冻温度
‑
30℃～
‑
33℃，物料厚度小于1.5cm，真空度60Pa～120Pa,干燥时间25～35小时，干燥后得到含水率小于15％的雪花状固体卵胶肽产品，可直接应用于固态饮品、片剂、冲剂及食品添加剂。
[0018]所述的留种标准为后背有人字型黑纹标记的中国林蛙长白山亚种；蛙龄三年生以上；雄性体重＞22g，雌性体重＞35g；无可视病患。
[0019]作为优选，预温池的池深0.7～0.8m，池宽1.5～2.5m，池长不小于2m，池壁垂直；预温池内放入林蛙产地河水，水深0.3～0.4m。
[0020]作为优选，产卵池材料为304不锈钢或食品级塑料，产卵池的池高0.4～0.5m，池宽0.5～1m，池长不小于1m，池壁垂直；产卵池内放入可食用净水，水深0.1～0.15m。
[0021]作为优选，步骤(3)雌蛙产完卵后及时捞出，产后5小时内放归产后蛙饲养场，进行生殖休眠后常规饲养，产后蛙运输过程中避免多层叠压和高温；雄蛙捞出作商品蛙使用。
[0022]本专利技术的工作原理：
[0023]根据林蛙胚胎发育学原理，本专利技术发现林蛙抱对产卵后，受精卵发育小于12小时的卵胶尚以蛋白质为主形式存在，属改性林蛙油范畴；当受精卵发育大于12小时后，受精卵(包括卵胶膜)有效成分被大部分活化，激活的某些基因表达改变了组成生命体构架原料的原有属性，以适应新生命体的需要，如雌激素完成了历史使命，衰减殆尽，释放出多种生命活性物质，如生长激素、保幼激素等；同时，蛋白质在酶系的作用下，逐步被分解成多肽、寡肽、氨基酸，为新生命体的组建、生长打下物质基础。随着胚胎的发育，其蛋白质分解为多肽、寡肽的速率与发育时间、温度、光照密切相关，多肽、寡肽的含量百分比与胚胎发育时间成正比，雌激素含量与胚胎发育时间成反比，受精卵发育12
‑
18小时后的林蛙胚胎中经检测雌二醇、雌三醇、雌酮、睾酮、乙烯雌酚等激素含量均为0。因此，掌握胚胎发育至囊胚期后尚未出现代谢产物前且肽含量丰富时进行制备卵胶肽的处理，终止林蛙胚胎发育，则是该技术关键，利用胚胎发育过程中自身的酶对蛋白质进行酶解，将林蛙胚胎中的卵胶蛋白分解成多肽、寡肽、氨基酸，无需外界添加蛋白酶。
[0024]本专利技术的有益效果：
[0025]结合中国林蛙优良品种选育，在保护林蛙种质资源的同时，充分开发商品蛙的利用价值，采用商品林蛙繁殖期自然抱对产卵，利用林蛙胚胎自身的蛋白酶系在胚胎发育过程中的自我调节、分解机制，将林蛙胚胎中的卵胶蛋白分解为以多肽、寡肽为主，避免了人工添加的蛋白酶对卵胶肽产生异味、影响口感，降低生产成本，解决了人工酶解产品异味、高成本、操作程序繁杂的难题，采用了“养蛙取卵”的方法，使成龄雌蛙可持续利用，生产原生态产品，改变了“杀蛙取油”的传统方法，保护了生态平衡的同时，增产增收，促进静置可持续性发展。
具体实施方式
[0026]实施例一、
[00本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免酶解程序制备林蛙卵胶肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)产卵蛙选择：每年4
‑
5月份，待林蛙出蛰后，依照留种标准统一进行优良品种选择，优良品种留作繁殖，筛选出不合格的雌雄林蛙用于生产卵胶肽；(2)产卵前预处理：将筛选出的用于生产卵胶肽的林蛙雌雄分离、冲洗，分别进入相邻的预温池内预温，预温池内水温18℃～22℃，自然光照，蛙的密度小于500只/
㎡
；(3)产卵准备：预处理2～3天后，受蛙鸣和温度的影响，待雌蛙进入跌卵期，将雌、雄蛙分别从预温池中捞出、冲洗，按雌雄数量1:1.2～1.5的比例混合放入产卵池中，产卵池水温18℃～22℃，自然光照，密度＜40只/
㎡
；(4)受精卵前处理：卵产出15～30分钟后捞出，用纯净水或矿泉水清洗卵团表面后，进入环境温度22℃～24℃、相对湿度70％～85％的卵发育室内，置于发育板上，单层摆放，暴露在空气中，适时对卵团喷雾补水，保持卵团表面湿润，补光照度3000
‑
4000勒克斯，使受精卵正常发育；(5)卵胶肽制备：当受精卵发育12～18小时终止发育，将终止发育的卵和卵胶混合物通过胶体磨高速研磨，研磨细度＞100目，得粘稠粥状流体，加纯净水20～50％稀释后进入均质...

【专利技术属性】
技术研发人员：房永清，刘志文，
申请(专利权)人：吉林省蛙王生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：