抗虫蛋白Cry3Bb胶体金免疫层析速测试纸条及其使用方法技术

本发明专利技术提供了一种胶体金免疫层析速测试纸条，所述试纸条包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，所述金标垫包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体

【技术实现步骤摘要】
3Bb单克隆抗体
‑
胶体金结合物。
[0006]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，所述样品垫与金标垫相邻端、金标垫与反应膜相邻端以及反应膜与吸水垫相邻端重叠，重叠部分宽度均为1
‑
2mm，所述样品垫与金标垫相邻端为样品垫叠放在金标垫上，所述金标垫与反应膜相邻端为金标垫叠放在反应膜上，所述反应膜与吸水垫相邻端为吸水垫叠放在反应膜上。
[0007]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.23865的杂交瘤细胞株1D7 1G8分泌得到。
[0008]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，反应膜上设有包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体的检测线和包被羊抗鼠IgG的质控线。
[0009]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，反应膜上设有的包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.23866的杂交瘤细胞株2H11 1H1分泌得到。
[0010]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，检测线和质控线间隔0.5
‑
1.0cm。
[0011]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，所述反应膜为硝酸纤维素膜，所述样品垫由玻璃纤维膜或滤纸制成，所述吸水垫由滤纸制成。
[0012]本专利技术还提供了上述胶体金免疫层析速测试纸条的检测方法：包括以下步骤：
[0013]待测样品前处理：若待测样品为植物组织提取液等液体物质时，可直接取40
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60μL待测样品检测，若待测样品为植物叶片、茎干、种子等非液体物质时，则需要将待测样品90
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110mg磨碎，加入0.5
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1.5mL样品处理液充分混匀，冰上静置25
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35min后取上清40
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60μL检测；
[0014]表1样品处理液配方
[0015][0016][0017]2)检测：将试纸条浸入待测样品内，室温下作用5
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10min，然后观察结果；
[0018]3)检测结果分析：
[0019]阳性：质控线、检测线均呈现条带，说明待测样本中有Cry 3Bb蛋白存在；
[0020]阴性：检测线不出现条带，质控线呈现条带，说明待测样本中没有Cry 3Bb蛋白存在；
[0021]失效：如果检测线、质控线均不出现条带或仅有检测线出现条带，说明试纸条失效。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本申请通过设计一种用于转基因玉米抗虫蛋白Cry 3Bb胶体金免疫层析速测试纸条，该试纸条特异性强，灵敏度高，并且，操作简便、快速、准确，适用于转基因玉米及其产品中抗虫蛋白Cry 3Bb的现场快速检测以及安全性评价。
[0023]保藏信息
[0024]本专利技术所涉及的杂交瘤细胞株1D7 1G8和杂交瘤细胞株2H11 1H1已依次于2021年11月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。邮编：100101，保藏编号依次为CGMCC No.23865和CGMCC No.23866。
附图说明
[0025]图1是根据本专利技术的胶体金免疫层析速测试纸条结构示意图；
[0026]图2是根据本专利技术的胶体金免疫层析速测试纸条的检测结果示意图；阳性，质控线(即C线)显色，检测线(即T线)肉眼可见，无论颜色深浅均判为阳性；阴性，C线显色，T线不显色，判为阴性；无效，C线不显色，T线无论是否显色均为无效；
[0027]图3是根据本专利技术的胶体金免疫层析速测试纸条在室温下检测转基因玉米阳性叶片样品的结果。
具体实施方式
[0028]下面结合附图，对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。
[0029]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0030]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径可购得。
[0031]实施例1一种胶体金免疫层析速测试纸条
[0032]一种胶体金免疫层析速测试纸条，包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，其特征在于，样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫顺次由底板一端向底板另一端设置，所述金标垫包被抗虫蛋白Cry3Bb单克隆抗体
‑
胶体金结合物。
[0033]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，所述样品垫与金标垫相邻端、金标垫与反应膜相邻端以及反应膜与吸水垫相邻端重叠，重叠部分宽度均为1
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2mm，所述样品垫与金标垫相邻端为样品垫叠放在金标垫上，所述金标垫与反应膜相邻端为金标垫叠放在反应膜上，所述反应膜与吸水垫相邻端为吸水垫叠放在反应膜上。
[0034]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.23865的杂交瘤细胞株1D7 1G8分泌得到。
[0035]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，反应膜上设有包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体的检测线和包被羊抗鼠IgG的质控线。
[0036]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，反应膜上设有的包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.23866的杂交瘤细胞株2H11 1H1分泌得到。
[0037]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，检测线和质控线间隔0.5
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1.0cm。
[0038]上述胶体金免疫层析速测试纸条在另一种实施方式中，所述反应膜为硝酸纤维素
膜，所述样品垫由玻璃纤维膜或滤纸制成，所述吸水垫由滤纸制成。
[0039]实施例2胶体金免疫层析速测试纸条检测转基因玉米叶片
[0040]取转基因玉米叶片100mg，经液氮研磨，与样本提取液充分混均，冰上静止30min后取上清50μL检测。室温下5min观察检测结果。具体结果详见图3，通过图3可知，原液中所含的Cry 3Bb蛋白能被本申请所涉及的胶体金免疫层析速测试纸条特异检测到。
[0041]实施例2胶体金免疫层析速测试纸条的检验
[0042]1.内容：
[0043]1.1准备工作：(取样量不低于20份，用于检验；复检、留样及其他特殊情况可另行抽取)
[0044]1.1.1对该检验项目所涉及的仪器或相关设备进行检查、调整、必要时进行核准。
[0045]1.1.2核对检验成品名称、批号、批量等信息是否与指令一致；
[0046]1.2外观：试剂(盒)各组分是否齐全、是否完整、液体有无惨漏；标签是否清晰易识别。
[0047]1.3膜条宽度：使用游标卡尺(精度为0.02mm)随机检测2条试纸，计算2次测定结果的平均值，结果本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶体金免疫层析速测试纸条，所述试纸条包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，其特征在于，样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫顺次由底板一端向底板另一端设置，所述金标垫包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体
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胶体金结合物。2.根据权利要求1所述的胶体金免疫层析速测试纸条，其特征在于，所述样品垫与金标垫相邻端、金标垫与反应膜相邻端以及反应膜与吸水垫相邻端重叠，重叠部分宽度均为1
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2mm，所述样品垫与金标垫相邻端为样品垫叠放在金标垫上，所述金标垫与反应膜相邻端为金标垫叠放在反应膜上，所述反应膜与吸水垫相邻端为吸水垫叠放在反应膜上。3.根据权利要求1或2所述的胶体金免疫层析速测试纸条，其特征在于，抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.23865的杂交瘤细胞株1D71G8分泌得到。4.根据权利要求1或2所述的胶体金免疫层析速测试纸条，其特征在于，反应膜上设有包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体的检测线和包被羊抗鼠IgG的质控线。5.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析速测试纸条，其特征在于，反应膜上设有的包被抗虫蛋白Cry 3Bb单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.23866的杂交瘤细胞株2H11 1H1分泌得到。6.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析速测试纸条，其特征在于，检测线和质控线间隔0.5
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1.0cm。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：金芜军，刘卫晓，宛煜嵩，苗朝华，黄卫红，董美，高进，王迪，孟丽霞，赵伟玲，文婷婷，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：