马来西亚大虾病毒的检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种马来西亚大虾病毒的检测试剂盒。本发明专利技术以马来西亚大虾病毒MrPV

【技术实现步骤摘要】
马来西亚大虾病毒的检测试剂盒


[0001]本专利技术属于水产病毒病原的检测
更具体地，涉及一种马来西亚大虾病毒的检测试剂盒。

技术介绍

[0002]水产疾病严重制约着水产养殖业的发展，越来越多的迹象表明水产疾病的研究对新病毒的快速检测及鉴定有着迫切需求。面对俞渐纷繁复杂的水产病毒，宏病毒组学似乎可以满足鉴定新病毒的需求。宏病毒组学将环境中的病毒通过富集，测序，加以生物信息分析，初步拼接出病毒的基因组序列，并将其初步分类到已知的各病毒科属。这种方法不需要培养病毒的特定细胞株系，也不需要对病毒进行抗原抗体反应，已有多项研究表明通过宏病毒组学方法得到了传统方法难以发现的新病毒。本专利技术通过对感染“铁壳虾”病的马拉西亚大虾体内的病毒进行富集和宏病毒组测序，发现了一种新的小RNA病毒，暂命名为MrPV
‑
4。
[0003]“铁壳虾”是指表现出体表发黄，生长缓慢或停止生长，以及双螯肢变蓝，变长等性早熟现象的虾，铁壳虾虽不会死亡，但会导致产量下降，造成饲料等养殖资源的浪费，导致经济损失。为便于对铁壳虾病进行监测，及时对可能存在的风险进行针对性处理，有必要建立一种铁壳虾病的监测方法，针对MrPV
‑
4进行检测，开发相应的检测试剂盒等。
[0004]巢式PCR和荧光定量PCR具有检测特异性强，灵敏度高等优点，现已广泛应用于水产动物病毒病原的检测。例如，高文辉等基于牡蛎疱疹病毒DNA聚合酶基因建立了该病毒的巢式PCR检测方法(高文辉,白昌明,蔡生力,等.基于牡蛎疱疹病毒DNA聚合酶基因的巢式PCR检测方法的建立及应用[J].水产学报,2016,40(3):326
‑
333.)。中国专利CN 103966358A也公开了一种鳜传染性脾肾坏死病毒荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法。但目前还未有针对MrPV
‑
4进行检测，以监测铁壳虾病的试剂盒和方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是克服现有上述技术中的缺陷和不足，提供一种马来西亚大虾病毒的检测试剂盒。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一种用于检测马来西亚大虾病毒MrPV
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4的靶基因。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供所述靶基因在制备检测MrPV
‑
4的产品中的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种马来西亚大虾病毒MrPV
‑
4的检测试剂盒。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供一种用于检测所述靶基因的引物组。
[0010]本专利技术的第五个目的是提供上述引物组在制备检测MrPV
‑
4的产品中的应用。
[0011]本专利技术的第六个目的是提供一种检测MrPV
‑
4的巢氏PCR方法。
[0012]本专利技术的第七个目的是提供一种检测MrPV
‑
4的荧光定量PCR方法。
[0013]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0014]罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)又名马来西亚大虾，本专利技术通过对感染
“
铁壳虾”病的马来西亚大虾体内的病毒进行富集和宏病毒组测序，从中发现了一种新的小RNA病毒，暂将其命名为Macrobrachium rosenbergii picorna virus 4(MrPV
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4)，基因组序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]本专利技术参照国际病毒分类委员会(ICTV)对小RNA病毒科Picornaviridae的系统发育分析，通过贝叶斯建树，对小RNA病毒目Picornavirales下8个科内的多个属的代表种，未分类到属的暂定种，以及新发现的小RNA病毒MrPV
‑
1、MrPV
‑
4、MrPV
‑
7、MrPV
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12进行了系统发育分析。结果表明，MrPV
‑
4与MrPV
‑
12的亲缘关系相对最近，但仍不能分到同一个属，其枝落在Marnaviridae和Iflaviridae之间，但离两科距离较远，也不能分入已知的科。
[0016]为便于对“铁壳虾”病进行监测，本专利技术针对MrPV
‑
4，以其基因组中第8790～9506位的核苷酸序列为靶基因，设计筛选巢氏PCR和荧光定量PCR引物，开发了用于铁壳虾病监测的试剂盒，并建立了相应的监测方法。
[0017]本专利技术提供了一种用于检测马来西亚大虾病毒MrPV
‑
4的靶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0018]本专利技术在此靶基因的基础上，通过设计PCR引物，成功构建了MrPV
‑
4的巢氏PCR和荧光定量PCR检测方法，实现了对铁壳虾病的监测。因此，本专利技术申请保护SEQ ID NO.2所示靶基因在制备检测MrPV
‑
4的产品中的应用。
[0019]本专利技术还提供了一种用于检测SEQ ID NO.2所示靶基因的引物组。
[0020]优选地，所述检测SEQ ID NO.2所示靶基因的引物组为巢氏PCR引物，其序列如SEQ ID NO.3～6所示，见实施例1。
[0021]优选地，所述检测SEQ ID NO.2所示靶基因的引物组为荧光定量PCR引物，其序列如SEQ ID NO.7～8所示，见实施例4。
[0022]本专利技术还申请保护上述引物组在制备检测MrPV
‑
4的产品中的应用。
[0023]本专利技术还申请保护一种马来西亚大虾病毒MrPV
‑
4的检测试剂盒，其含有检测SEQ ID NO.2所示靶基因的试剂。
[0024]优选地，所述试剂包含检测SEQ ID NO.2所示靶基因的引物组。
[0025]优选地，所述试剂包含检测SEQ ID NO.2所示靶基因的巢氏PCR引物，引物序列如SEQ ID NO.3～6所示。
[0026]优选地，所述试剂包含检测SEQ ID NO.2所示靶基因的荧光定量PCR引物，引物序列如SEQ ID NO.7～8所示。
[0027]优选地，所述试剂盒中还包含含有SEQ ID NO.2所示靶基因序列的阳性重组质粒作为阳性对照。
[0028]本专利技术还提供了一种通过检测MrPV
‑
4以监测铁壳虾病的巢氏PCR方法，即用SEQ ID NO.3～6所示巢氏PCR引物对待测样本进行PCR扩增，若巢氏第一轮PCR出现了大小为717bp的特异性条带或第二轮出现大小为340bp的特异性条带，则表示所检样本中含有病毒MrPV
‑
4。
[0029]本专利技术还提供了一种通过检测MrPV
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4以监测铁壳虾病的荧光定量PCR方法，即用SEQ ID NO.7～8所示荧光定量PCR引物对待测样本进行扩增，若qPC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测马来西亚大虾病毒MrPV
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4的靶基因，其特征在于，所述靶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.权利要求1所述靶基因在制备检测MrPV
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4的产品中的应用。3.一种马来西亚大虾病毒MrPV
‑
4的检测试剂盒，其特征在于，含有检测权利要求1所述靶基因的试剂。4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂中含有检测权利要求1所述靶基因的引物组。5.一种用于检测权利要求1所述靶基因的引物组。6.根据权利要求5所述引物组，其特征在于，所述引物组为巢氏PCR引物，引物序列依次如SEQ ID NO.3～6所示。7.根据权利要求5所述引物组，其特征在于，所述引物组为荧光定量PCR引物，引物序列依次如SEQ ID NO.7～8所示。8.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：何建国，缪琪瑾，翁少萍，周丹丹，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：